media secara lurus dan diinkubasi selama 24-48 jam. Uji positif dilihat dengan adanya endapan hitam.
3.4.2 Seleksi BAL Potensial terhadap E. tarda
Seleksi BAL potensial dalam menghambat bakteri E. tarda dilakukan dengan metode Banerjee et al., 1999 untuk menentukan isolat terpilih yang
nantinya akan diteruskan pada pengujian selanjutnya. E. tarda sebanyak 5-10 koloni dikultur dalam 50 mL media NB dan diinkubasi 24 jam pada suhu 28
C disetarakan dengan spektrofotometer pada panjang gelombang 600 nm OD
0,5
diusap kultur cair patogen E. tarda dengan cotton bud sterilpada media MHA, uji antagonis
dengan meneteskan kultur cair BAL ke dalam kertas cakramdan diletakkan pada media MHA yang telah diusap kultur cair patogen E. tarda, diinkubasi pada suhu
28 Cselama 24-48 jam. Diameter zona penghambatan diukur dengan mengamati
zona bening yang terbentuk
3.4.3 KurvaPertumbuhan Isolat BAL
Sebanyak 5 ose kultur BAL terpilih dimasukkan kedalam 30 mL media cair MRSB, kemudian diinkubasi pada 28
o
C.pada rentang 3 jam selama 24 jam, dihitung nilai kerapatan optik atau optical density DO isolat terpilih BAL dengan
menggunakan spektrofotometer pada panjang gelombang 600 nm menurut metode Hadioetomo 1990.
3.4.4 Produksi Ekstrak kasar Senyawa anti mikrobaBAL
Produksi Senyawa Antimikroba dilakukan dengan memodifikasi metode Delgado 2001 yaitu dengan memproduksi senyawa antimikroba ekstrak kasar
BAL yang berasal dari kultur cair berumur 27 jam. Kultur cair ditambahkan sebanyak 10 mL kedalam 400 mL media NB, di inkubasi pada suhu 28
C selama 27 jam. Kemudian sebanyak 100 mL kultur disentrifugasi dengan kecepatan 10.000
rpm pada suhu 4 C selama 15 menit. Selanjutnya dilakukan penyaringan senyawa
antimikrpoba dengan kerrtas saring 0,22 µm MS
®
Syringe filter sehingga diperoleh ekstrak kasar seenyawa antimikrroba BAL.
3.4.5 Uji Aktivitas Ekstrak kasar Senyawa anti mikrobaBAL terhadap E.tarda
Uji ini dilakukan untuk menyeleksi BAL potensial. Sebanyak 25 µL E. tarda.diinokulasikan pada media MHA diusap menggunakan cotton bud hingga
merata. Sebanyak 30 µL ekstrak kasar senyawa anti mikroba kultur BAL diteteskan pada kertas cakram, diletakkan di permukaan cawan petri yang berisi biakan
patogen uji E. tardaSelanjutnya diinkubasi pada suhu 28
o
C selama 24 jam. Diameter zona penghambatan diukur dengan mengamati zona bening yang
terbentuk.
3.4.6 Pembentukan dan Penghitungan Sel Biofilm E. tarda Jamilah dan Priyani,
