32
Lempeng kaca yang lain ditutupkan ke atasnya sehingga sekat plastik terletak diantaranya. Pasangan ini ditegakkan di atas meja secara horizontal.
3. Penyiapan gel bawah
Pada penelitian ini gel bawah yang digunakan terdiri atas 10 akrilamida 0,375 M Tris-HCl pH 8,9 yang dibuat dengan cara :
Tabel I. Jumlah bahan yang digunakan dalam pembuatan gel bawah Banyaknya yang dibutuhkan untuk volume
Bahan 15 ml
30 ml
Larutan a Larutan c
Akuades Larutan g
Diaerasi TEMED
3,75 ml 5,00 ml
6,10 ml 0,15 ml
10 μl
7,50 ml 10,00 ml
12,50 ml 0,30 ml
20 μl
Larutan a, c, akuades dan larutan g dicampur dalam Erlenmeyer atau gelas ukur atau botol vakum bila akan dilakukan diaerasi. Larutan digojog dengan hati-
hati, kemudian dilakukan dierasi dengan pompa vakum. Diaerasi dihentikan bila gelembung-gelembung yang terbentuk jumlahnya telah menjadi sedikit. Larutan
ditambah TEMED dan digojog lagi dengan hati-hati, kemudian segera dituang dalam celah diantara lempeng kaca yang sudah disiapkan sampai kira-kira 2,5 cm
sebelum batas atas lempeng kaca. Akuades ditambahkan ke atas gel untuk menutup permukaannya agar terbentuk permukaan yang datar air.
33
4. Penyiapan gel atas
Gel atas dibuat pada hari berikutnya setelah gel bawah selesai dipersiapkan. Komposisi gel atas dengan menggunakan 5 akrilamida 0,617 M
Tris-HCl pH 6,7 adalah seperti yang tercantum pada Tabel II. Larutan b, d, e dan akuades dicampur dalam botol vakum atau beker glass
atau Erlenmeyer dan dilakukan diaerasi menggunakan pompa vakum. Larutan ditambah TEMED, dan dengan hati-hati digojog, selanjutnya dituang ke atas gel
bawah setelah akuades di atasnya diambil. Sisir plastik dimasukkan dalam gel atas untuk membuat sumuran tempat sampel. Bila polimerasi sudah terjadi dengan
sempurna gel atas tampak putih, selanjutnya sisir plastik diambil dan kelebihan akuades yang ada dalam masing-masing sumuran dibersihkan menggunakan
syringe.
Tabel II. Jumlah bahan yang digunakan dalam pembuatan gel atas Banyaknya yang dibutuhkan untuk volume
Bahan 6,5 ml
13 ml
Larutan b Larutan d
Akuades Larutan e
Diaerasi TEMED
0,78 ml 2,60 ml
2,09 ml 1,03 ml
4,70 μl
1,56 ml 5,20 ml
4,18 ml 2,06 ml
9,40 μl
5. Penyiapan homogenat nyamuk
Tabung ependrof diletakkan di atas hancuran es batu, kemudian ditetesi 75 μl sukrosa 20. Nyamuk secara individual dimatikan lebih dahulu dengan cara
