G. Hasil Estimasi Kandungan Fenolik Total
Penetapan kandungan fenolik total dilakukan untuk mengetahui hubungan antara aktivitas antioksidan dan kandungan fenolik total pada fraksi etil
asetat kulit jeruk manis. Senyawa fenolik merupakan golongan terbesar dalam perannya sebagai antioksidan. Maka jumlah atau kandungan fenolik total pada
suatu tumbuhan sangat menentukan atau berpengaruh pada aktivitas antioksidannya.
Pada penetapan kandungan fenolik total ini menggunakan metode Follin- Ciocalteu. Metode ini memakai reagen fenol asam fosfomolibdat-fosfotungstat
atau reagen Follin-Ciocalteu. Prinsip reaksi Follin-Ciocalteu ini adalah reaksi reduksi oksidasi. Senyawa fenolik akan teroksidasi membentuk keton sedangkan
kompleks fosfomolibdat-fosfotungstat yang berasal dari pereaksi Follin-Ciocalteu akan mengalami reduksi menjadi kompleks molybdenum blue yang berwarna biru.
Penambahan natrium karbonat dimaksudkan agar reaksi berada pada suasana basa karena pada suasana basa fenolik akan menjadi ion fenolat yang lebih mudah
teroksidasi sehingga akan lebih mudah dan cepat bereaksi dengan pereaksi Follin- Ciocalteu.
Gambar 7. Reaksi asam galat dengan molibdenum, komponen dari reagen Folin-Ciocalteu Nunes,
et al., 2012
Untuk dapat membuat kurva baku penentuan kandungan fenolik total digunakan senyawa baku, yaitu asam galat. Asam galat digunakan sebagai
pembanding karena merupakan suatu senyawa fenolik dan memiliki aktivitas antioksidan yang kuat, ketersediaannya juga melimpah di alam dan juga tersedia
dalam kemurnian yang tinggi dengan harga relatif murah dibanding standar lain.
Gambar 8. Struktur asam galat
Tabel V. Hasil pengukuran seri baku asam galat
Replikasi Konsentrasi
Teoritis µgmL
Absorbansi Persamaan regresi linear
I 50
0,226 y = 0,0052x
– 0,0372 r = 0,9956
75 0,373
100 0,453
125 0,62
150 0,756
II 50,5
0,245 y = 0,0049x
– 0,0018 r = 0,9972
75,75 0,361
101 0,463
126,25 0,62
151,5 0,75
III 50
0,222 y = 0,0054x
– 0,051 r = 0,9996
75 0,346
100 0,495
125 0,624
150 0,758
Tabel VI. Hasil penetapan kandungan fenolik total fraksi etil asetat ekstrak etanol kulit jeruk manis
Replikasi Konsentrasi
µgmL Absorbansi
Kandungan fenolat
µgmL Kandungan
fenolat total mg
ekivalen asam galat per g
fraksi Rata-rata
mg ekivalen
asam galat per g fraksi
SD
1 305
0,800 157,59
25,83 25,81
0,314 2
306 0,799
157,41 25,72
3 305
0,799 157,41
25,89 Kandungan fenolik total ditentukan menggunakan persamaan regresi
linear antara konsentrasi asam galat dengan absorbansi yang didapat setelah direaksikan dengan pereaksi Follin-Ciocalteu. Tabel V menunjukkan bahwa pada
replikasi tiga memiliki persamaan regresi linear yang paling baik dengan nilai y = 0,0054x
– 0,051 dan r = 0,9996. Berdasarkan perhitungan menggunakan persamaan tersebut didapatkan hasil kandungan fenolik total rata-rata sebesar
25,81 ± 0,314 mg ekivalen asam galat per gram fraksi etil asetat ekstrak etanol kulit jeruk manis Tabel VI.
H. Hasil Optimasi Metode Uji Aktivitas Antioksidan
Kategori