0 : berarti negatif Skor luas dinilai :
1 : pewarnaan positif 10 jumlah sel 2 : pewarnaan positif 10-50 jumlah sel
3 : pewarnaan positif 50 jumlah sel
0 : berarti negatif Skor intensitas dihitung :
1 : lemah 2 : moderat
3 : kuat Untuk skor akhir digunakan skor imunoreaktif. Skor imunoreaktif
diperoleh dengan mengalikan skor luas dengan skor intensitas. Skor imunoreaktif 4 atau lebih dinilai positif atau overekspresi MMP-9.
3.6.1. Alat dan Bahan penelitian
Penelitian ini membutuhkan beberapa peralatan dan reagen sebagai berikut:
a. Catatan medis penderita dan status penelitian penderita b. Formulir persetujuan ikut penelitian
c. Bahan untuk pemeriksaan hispatologi: formalin 10, blok paraffin, aqua destillata, hematoxyllin-eosin.
d. Bahan untuk pemeriksaan immunohistokimia: xylol, alkohol absolut, alkohol 96, alkohol 80, alkohol 70, H
2 2
0,5 dalam methanol,
Universitas Sumatera Utara
Tris Buffer Saline TBS, antibodi MMP-9, DAKO Real EnVision, Choromogen Diamino Benzidine DAB. Lathium Carbonat jenuh,
Tris EBTA, Hematoxylin, aqua destillata. e. Alat untuk biopsi: blakesley nasal foscep lurusbengkok, endoskopi
kaku, 4 mm, 0 f.
Alat untuk pemeriksaan histopatologi dan immunohistokimia: mesin pemotong jaringan microtome, waterbath, hot plate, staining jar, rak
kaca objek, kaca objek, rak inkubasi, silanized slide,Pap pen, pipet mikro, tabung sentrifuge,pengukur waktu dan mikroskop cahaya.
.
3.6.2. Prosedur Kerja Pemeriksaan Immunohistokimia MMP-9:
1. Deparafinisasi slide Xylol 1, Xylol 2, Xylol 3 5 menit
2. Rehidrasi Alkohol absolute, Alk 96, Alk 80, Alk 70 4 menit
3. Cuci dengan air mengalir 5 menit
4. Masukkan slide ke dalam PT Link Dako Epitope Retrieval : set up Preheat 65°C, Running time 98°C selama 15 menit.
± 1 jam
5. Pap Pen. Segera masukkan dalam Tris Buffered Saline TBS pH 7,4
5 menit
6. Blocking dengan peroxidase block 5-10 menit
7. Cuci dalam Tris Buffered Saline TBS pH 7,4 5 menit
8. Blocking dengan Normal horse Serum NHS 3 15 menit
9. Cuci dalam Tris Buffered Saline TBS pH 7,4 5 menit
10. Inkubasi dengan Antibodi MMP-9 dengan pengenceran 1:40 1 jam
11. Cuci dalam Tris Buffered Saline TBS pH 7,4 Tween 20 5 menit
12. Dako Real Envision RabbitMouse 30 menit
13. Cuci dalam Tris Buffered Saline TBS pH 7,4 Tween 20 5-10 menit
14. DAB+Substrat Chromogen solution dengan pengenceran 5 menit
Universitas Sumatera Utara
20 µL DAB : 1000 µL substrat tahan 5 hari di suhu 2-8°C setelah di-mix
15. Cuci dengan air mengalir 10 menit
16. Counterstain dengan Hematoxylin 3 menit
17. Cuci dengan air mengalir 5 menit
18. Lithium carbonat 5 dlm aqua 2 menit
19. Cuci dengan air mengalir 5 menit
20. Dehidrasi Alk 80, Alk 96, Alk Abs 5 menit
21. Clearing Xylol 1, Xylol 2, Xylol 3 5 menit
22. Mounting + cover glass
3.7. Teknik Pengumpulan Data
