Pembuatan Fase Gerak Prosedur Kerja .1

31 UIN Syarif Hidayatullah Jakarta

BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN

4.1 Penetapan Panjang Gelombang Analisis

Pada penelitian ini, penetapan panjang gelombang analisis dilakukan dengan menggunakan alat spektrofotometer UV-Vis. Sebanyak 5,04 µgmL larutan N- hidroksietil-p-metoksi sinamamida diukur pada panjang gelombang 200 nm hingga 400 nm. Diperoleh spektrum serapan maksimumnya. Spektrum serapan yang dihasilkan memperlihatkan bahwa N-hidroksietil-p-metoksi sinamamida berada pada panjang gelombang sinar UV, yaitu 290 nm. Hal ini disebabkan karena N- hidroksietil-p-metoksi sinamamida mempunyai gugus kromofor yang terdeteksi pada daerah UV. Spektrum N-hidroksietil-p-metoksi sinamamida pada spektrofotometer UV-Vis dapat dilihat pada lampiran 3 gambar 5.1. Pemilihan panjang gelombang analisis ini berguna untuk meningkatkan selektivitas dan sensitivitas analisis sampel yang digunakan. Panjang gelombang ini kemudian yang digunakan pada instrumen Kromatografi Cair Kinerja Tinggi KCKT untuk mendeteksi sampel pada analisis N-hidroksietil-p-metoksi sinamamida dalam plasma secara in vitro.

4.2 Optimasi Kondisi Analisis

4.2.1 Pemilihan Komposisi Fase Gerak Pada pemilihan komposisi fase gerak, analisis dilakukan menggunakan KCKT dengan kolom C18 panjang 150 mm, dengan volume penyuntikan sampel sebanyak 20,0 µL. Sistem kromatografi yang digunakan adalah sistem isokratik dengan kombinasi fase gerak metanol dan akuabides pada beberapa perbandingan. Struktur molekul N-hidroksietil-p-metoksi sinamamida tersusun dari molekul-molekul yang bersifat sedikit polar dikarenakan adanya gugus amida. Oleh karena itu, komposisi fase gerak yang digunakan untuk memisahkan N-hidroksietil-p-metoksi sinamamida terdiri dari campuran pelarut organik metanol dan akuabides agar diperoleh fase gerak yang mampu membawa N-hidroksietil-p-metoksi sinamamida dan memisahkannya dari pengotor dalam plasma.