33
3.3.3 Elektroforesis Dodecyl Sulphate Poliacrilmide Gel Electrophoresis
SDS-PAGE Laemli, 1970
Elektroforesis sodium dodecyl sulphate poliacrilamide gel electrophoresis SDS-PAGE dilakukan dengan menggunakan metode standar menggunakan alat
Mini-Protean II Slab Cell Electrophoresis Bio Rad.
3.3.3.1 Preparasi Sampel untuk Elekroforesis
Sampel protein ekstrak jaringan otot daging ayam potong didenaturasi dengan buffer sample Buffer Laemli dengan perbandingan protein dan buffer
1:4. Sebanyak 20 l sampel protein dicampurkan dengan 80 l buffer sample lalu dididihkan selama 5 menit, setelah dingin disentrifugasi pada 12000 rpm selama
10 menit dan siap untuk dielektroforesis.
3.3.3.2 Preparasi Gel Elekroforesis
Gel poliakrilamid dibuat dari larutan stok akrilamid dan bisakrilamid 30T, 2,67C, stacking buffer Tris-HCl 0,5M pH 6,8, resolving buffer Tris-
HCl 1,5M pH 8,8, 10 SDS, APS10 dan TEMED. Formulasi gel untuk resolving gel adalah 14 DDI H
2
O 2,7 ml, Acrilamid 4,7 ml, Resolving Gel Buffer 2,5 ml, SDS 10 0,1 ml, APS 10 0,2 ml dan TEMED 10 l. Sedangkan
untuk stacking gel adalah 6 DDI H
2
O 2,7 ml, Acrilamid 1 ml, Resolving Gel Buffer 1,25 ml, SDS 10 50 l , APS 10 100 l dan TEMED 10 L.
Gel poliakrilamid dicetak diantara dua buah lempengan kaca dengan ketebalan 0,75 mm. Terlebih dulu campuran resolving gel dimasukkan dalam
gelas plate melalui dindingnya agar tidak terbentuk gelembung, hingga kira-kira satu cm dari batas atas. Setelah gel mengering, larutan stacking gel yang telah
dibuat dimasukkan ke dalam cetakan di atas resolving gel dan permukaan gel
34 dipasang sisir berlubang untuk membuat cetakan sumuran hingga mengeras.
Setelah gel mengeras, cetakan gel dipindahkan ke perangkat elektroforesis dan
siap untuk ditempatkan protein sampel.
3.3.3.3 Loading Sampel
Elektroforesis dimulai dengan memasang gelas plate dan dirangkai
dengan frame dari Bio-Rad. Masing-masing sampel protein dengan kadar protein
yang sama Lampiran 5 dan 5 l marker yang telah dipreparasi dimasukkan ke dalam sumuran. Elektroforesis dijalankan dengan tegangan 150 volt. Proses ini
dihentikan setelah warna biru turun Buffer Laemmli turun hingga 0,5 cm dari batas bawah plate.
3.3.3.4 Pewarnaan Gel