Salah satu sifat yang tampak adalah kelarutannya yang menurun. Struktur primer protein tidak mengalami perubahan. Denaturasi tidak lain adalah
terbukanya lipatan alamiah struktur protein. Apabila yang mengalami perubahan struktur alamiah itu adalah enzim maka aktivitas biologiknya
menghilang. Jika denaturasi protein itu belum lanjut maka polimer itu bisa melipat lagi dan kembali pada struktur alamiahnya Martoharsono, 1981.
2.7.2 Penentuan Kuantitas Protein dengan Metode Lowry
Metode Lowry dikembangkan pada tahun 1951 dengan menggunakan reagen pendeteksi Folin-Ciocalteu. Reagen ini biasa digunakan untuk
mendeteksi gugus-gugus fenolik. Dalam analisa protein reagen Folin- Ciocalteu dapat mendeteksi residu tirosin yang mengandung gugus fenolik
melalui reaksi reduksi oksidasi dimana gugus fenolik tirosin akan mereduksi fosfotungstat dan fosfomolibdat yang terdapat pada reagen tersebut menjadi
tungsten dan molibden yang berwarna biru. Hasil reduksi ini dapat dianalisa lebih lanjut dengan melihat puncak absorpsi yang lebar pada daerah panjang
gelombang sinar tampak 600-800 nm Dennison, 2002. Metode Lowry merupakan pengembangan dari metode Biuret. Dalam
metode ini terlibat 2 reaksi. Awalnya, kompleks CuII-protein akan terbentuk sebagaimana metode biuret, yang dalam suasana alkalis CuII akan
tereduksi menjadi CuI. Ion Cu
+
kemudian akan mereduksi reagen Folin- Ciocalteu,
kompleks phosphomolibdat-phosphotungstat
phosphomolybdotungstate, menghasilkan heteropolymolybdenum blue akibat reaksi oksidasi gugus aromatik rantai samping asam amino terkatalis
Cu, yang memberikan warna biru intensif yang dapat dideteksi secara
kolorimetri. Kekuatan warna biru terutama bergantung pada kandungan residu tryptophan dan tyrosine-nya. Keuntungan metode Lowry adalah lebih
sensitif 100 kali daripada metode Biuret sehingga memerlukan sampel protein yang lebih sedikit. Batas deteksinya berkisar pada konsentrasi 0.01
mgml. Namun metode Lowry lebih banyak interferensinya akibat kesensitifannya Dennison, 2002.
Spektrofotometer merupakan suatu alat yang digunakan untuk mengukur energi yang diserap oleh suatu zat. Suatu sinar monokromatik yang
dilewatkan pada suatu zat diserap oleh zat tersebut dan sisa sinar diteruskan. Penyerapan absorban suatu zat berbanding lurus dengan konsentrasinya.
Pada penelitian ini
spektrofotometer yang digunakan
merupakan spektrofotometer visibel. Daerah visibel berada pada rentang 400-800 nm.
Pada daerah visibel penentuan kadar protein dapat dilakukan dengan mereaksikan protein dengan suatu zat warna, misalnya coommassie brilliant
blue G-250. Ikatan protein-coommassie mempunyai panjang gelombang maksimum pada 590 nm Rodrigues, 2005.
Kadar protein dapat ditentukan dengan membaca pada kurva standar, kurva standar dibuat dengan larutan protein murni yang telah diketahui kadar
proteinnya misalnya BSA bovine serum albumin yang memiliki rentang konsentrasi tertentu dimana konsentrasi sample protein berada di dalam
rentang tersebut dengan konsentrasi yang semakin tinggi Sudarmadji, 1981.
2.8 ELEKTROFORESIS
