III. METODOLOGI PENELITIAN
A. Tempat dan Waktu Penelitian
Penelitian ini dilakukan di Laboratorium Biokimia Pangan, Departemen Ilmu dan Teknologi Pangan, Institut Pertanian Bogor selama 3 bulan,
terhitung dari bulan Februari hingga April 2009.
B. Alat dan Bahan
Bahan utama yang digunakan adalah tulang ikan pepes iradiasi yang memiliki umur simpan yang berbeda-beda, yaitu tulang ikan pepes iradiasi
dengan masa simpan 2 tahun yang diiradiasi pada tahun 2007 tulang A, tulang ikan pepes iradiasi dengan masa simpan 1 tahun yang diiradiasi pada
tahun 2008 tulang B, dan tulang noniradiasi. Sampel-sampel tersebut merupakan sampel yang diperoleh dari Pusat Aplikasi Teknologi Isotop dan
Iradiasi BATAN. Bahan yang digunakan untuk ekstraksi adalah aquades. Serum darah,
eritrosit, dan limfosit diisolasi dari darah manusia yang berasal dari donor yang sehat. Bahan yang digunakan pada pengujian terhadap hemolisis eritrosit
adalah PBS phosphate buffer saline, H
2
O
2
0.5, dan biru trifan. Bahan kimia yang digunakan pada pengujian terhadap proliferasi limfosit adalah
histopaque Sigma, USA, RPMI-1640 Sigma, USA, MTT [3-4,5- dimethilthiazol-2-yl-2,5-diphenyl tetrazolium bromide] Sigma, USA dan
HCl-isopropanol 0.04 N, aquabides, larutan mitogen pokeweed, dan larutan mitogen LPS. Bahan yang digunakan pada pengukuran kapasitas antioksidan
adalah buffer asetat, metanol, DPPH diphenyl-β-picrylhidrazine, dan asam askorbat. Bahan yang digunakan pada pengukuran kadar malonaldehida
adalah larutan HCl 0.25 N, TCA trichloroacetic acid, TBA thiobarbituric acid, BHT butil hidroksi toluena, dan TEP 1,1,3,3 tetraetoksipropana.
Alat-alat yang digunakan pada penelitian ini adalah sentrifuse CR412, inkubator VWR Scientific CO
2
5 , 37
o
C, Spectrophotometer microplate reader Bio-rad model 550, mikroskop Olympus CH 20, laminar flow hood,
23 lempeng mikrokultur well plate 96 well, kertas saring, membran steril 0.20
m Sartorius, mikropipet, mikrotip 1000 µl, mikrotip 100 µl, vorteks,
hemasitometer Bright-line, syringe, hand counter, termometer, penangas air, tabung eppendorf, tabung vacutainer steril, vacutainer needle, holder,
torniquate, tabung sentrifuse steril 15 ml disposible Nunc.
C. Metode Penelitian
Kategori