17 dapat disebabkan oleh antara lain penambahan larutan hipotonis, hipertonis ke
dalam darah, penurunan tekanan permukaan membran eritrosit, zatunsur kimia tertentu, pemanasan dan pendinginan, rapuh karena ketuaan dalam
sirkulasi darah serta adanya radikal bebas yang berinteraksi dengan membran. Membran eritrosit tersusun atas polisakarida dan protein spesifik yang berbeda
antara satu orang dengan orang lainnya. Penggunaan eritrosit sebagai model pada penelitian sudah banyak
dilakukan, seperti yang dilakukan oleh Mrowczynska 2001 yang menggunakan
eritrosit sebagai
model untuk
membandingkan dan
menghubungkan aktivitas hemolitik terhadap sifat sitotoksik garam empedu, Zhu et al. 2005 yang mengukur pengaruh flavonoid kakao terhadap
ketahanan membran eritrosit yang dioksidasi dengan AAPH, Suwalsky 2007 yang mengukur sifat antioksidan tumbuhan Ugni molinae dan pengaruhnya
pada eritrosit manusia dalam menanggulangi stress oksidatif yang dipicu dengan HClO, dan Karimi 2008 yang mengukur efek perlindungan eritrosit
oleh silimarin.
G. Limfosit dan Proliferasi Limfosit
Limfosit adalah sel darah putih leukosit yang mampu menghasilkan respon imun spesifik terhadap berbagai jenis antigen yang berbeda. Limfosit
berukuran kecil, berbentuk bulat dengan diameter 7-15 µm, dan banyak terdapat pada organ limfoid seperti limfa dan timus. Leukosit dibagi ke dalam
dua kelas, yaitu yang mengandung granula dalam sitoplasmanya granulosit dan agranulosit yang tidak mengandung granula Ganong, 1990. Limfosit
merupakan sel kunci dalam proses respon imun spesifik untuk mengenali antigen melalui reseptor antigen dan mampu membedakannya dari komponen
tubuh Kuby, 1992. Terdapat tiga kelompok limfosit yang dibedakan berdasarkan
fungsinya, yaitu : 1. Limfosit B
Limfosit B merupakan sel yang berasal dari sel stem di dalam sumsum tulang dan tumbuh menjadi sel plasma, yang menghasilkan antibodi.
18 Jumlah sel B limfosit adalah 25 dari total keseluruhan limfosit tubuh.
Limfosit B mampu menghasilkan berbagai jenis antibodi yang digunakan untuk melawan antigen.
Sel ini memiliki reseptor-reseptor pada permukaannya untuk antigen tertentu.
2. Limfosit T Sel ini terbentuk jika sel stem dari sumsum tulang pindah ke kelenjar timus
dan mengalami pembelahan dan dewasa di dalam kelenjar timus. Limfosit T dewasa meninggalkan kelenjar timus dan masuk ke dalam pembuluh
getah bening dan berfungsi sebagai bagian dari sistem pengawasan kekebalan. Sel T diproduksi oleh kelenjar timus, jumlahnya mencapai 70
dari seluruh sel limfosit di dalam tubuh. Di bawah mikroskop, morfologi Limfosit T dan B tidak dapat dibedakan.
Ada tiga bentuk sel T, yaitu sel T
helper
T
h
, T
supresor
T
s
, dan T
cytotoksik
T
c
Baratawidjaja, 1991. Sel T
helper
atau sel T penolong merupakan sel T yang berperan dalam stimulasi sintesis antibodi dan aktivasi makrofag
dengan cara mengsekresikan molekul yang disebut sitokinin. Sel ini bekerja bersama dengan aktivitas antibodi sel B. Sel T
supresor
berperan menekan aktivitas sel T yang lain. Sel ini mempunyai aktivitas dapat
menurunkan produksi antibodi. Sel T
cytotoksik
T
c
memiliki kemampuan untuk menghancurkan sel alogenik dan sel sasaran yang terinfeksi patogen
intraseluler Baratawidjaja, 1991. 3. Limfosit NK Natural Killer
Limfosit ini memiliki ukuran yang agak lebih besar daripada limfosit T dan B. Limfosit ini juga dikenal sebagai Large Granular Lymphocyte
LGL karena merupakan sel dengan sejumlah besar sitoplasma dengan granula azurofilik Kuby, 1992.
Sel ini dinamai sel pemusnah karena sel ini membunuh mikroba dan sel- sel kanker tertentu. Istilah alami digunakan karena mereka siap membunuh
sejumlah sel target segera setelah mereka terbentuk, tidak perlu melewati pematangan dan proses belajar seperti pada limfosit T dan limfosit B
Anonim, 2006
19 Uji aktivitas sel limfosit dapat dilakukan secara in vitro dan
menggunakan indikator respon imun. Uji ketoksikan suatu senyawa dapat juga dilakukan dengan menggunakan limfosit. Limfosit digunakan dalam uji
ketoksikan karena sel ini sangat rentan terhadap kerusakan yang diakibatkan oleh senyawa atau benda asing. Proliferasi merupakan proses diferensiasi dan
pembelahan sel secara mitosis. Respon proliferasi sel limfosit yang diuji pada sistem in vitro dapat digunakan untuk menggambarkan fungsi limfosit dan
status imun individu. Proliferasi merupakan fungsi biologis mendasar pada sel limfosit, yaitu meliputi proses diferensiasi dan pembelahan sel. Aktivitas
proliferasi limfosit merupakan salah satu parameter yang dapat digunakan untuk mengukur status imunitas karena proses proliferasi menunjukkan
kemampuan dasar dari system imun Roit dan Delves, 2001. Proliferasi sel limfosit dapat diinduksi oleh suatu senyawa yang
disebut mitogen. Tidak seperti immunogen yang hanya mengaktivasi reseptor spesifik pembawa limfosit, aktivitas mitogen adalah tidak spesifik. Beberapa
mitogen hanya mampu menginduksi proliferasi sel limfosit B, sedangkan beberapa yang lain hanya mampu menginduksi sel limfosit T, tetapi ada juga
sebagian kecil yang mampu menginduksi keduannya secara bersamaan. Pengujian terhadap kemampuan fungsional limfosit dapat dilihat dari
kemampuan memberikan respon terhadap mitogen, kemampuan membentuk immunoglobulin atau limfokin, dan kemampuan sitotoksisitas sel NK
Tejasari et al., 2000. Sejumlah mitogen yang umumnya digunakan adalah lektin. Lektin
memiliki afinitas terhadap gula pada permukaan sel limfosit. Beberapa contoh mitogen yang berasal dari lektin adalah PHA Phytohaemagglutinin dan
PWM Pokeweed. Akan tetapi tidak semua mitogen merupakan lektin, ada beberapa jenis senyawa yang biasa digunakan sebagai mitogen yaitu
Concanavalin A Con A. Senyawa ini berasal dari ekstrak tanaman kacang jack Conavalin ensiformis. Mitogen ini menginduksi proliferasi sel limfosit
T. Senyawa lain yang berperan sebagai mitogen adalah pokeweed PWM, senyawa ini diekstrak dari tanaman pokeweed Phytolacca americana.
Mitogen pokeweed dapat menginduksi proliferasi sel limfosit T dan B secara
20 bersama-sama. PWM mampu berikatan dengan di-N-asetyl kitobiose dan
mampu menginduksi sel B dan sel T Kuby, 1992. Pengamatan jumlah sel yang mati dan tingkat proliferasi sel limfosit
yang telah ditambahkan mitogen dapat diamati menggunakan pewarna MTT 3-[4,5-Dimethylthiazol-2-yl]-2,5-diphenyltetrazolium
bromide atau
terazole. Prinsip dari metode ini adalah konversi dari garam tetrazolium MTT yang berwarna kuning menjadi senyawa formazan yang berwarna biru
oleh aktivitas enzim suksinat dehidrogenase oleh mitokondria sel hidup Kubota et al., 2003. Senyawa yang terbentuk kemudian dihitung
absorbansinya menggunakan
microplate reader.
Enzim suksinat
dehidrogenase merupakan enzim yang disintesis hanya pada sel hidup. Jumlah formazan yang dihasilkan proporsional dengan jumlah sel limfosit
yang hidup sehingga dengan metode pewarnaan MTT dapat diketahui jumlah sel limfosit hidupnya. Metode MTT ini menggunakan enzim atau substrat
yang spesifik Davis, 1994.
H. Antioksidan
