29
3.4.5 Pemeriksaan saponin
Sebanyak 0,5 g sampel dimasukkan ke dalam tabung reaksi dan ditambahkan 10 mL air suling panas, didinginkan kemudian dikocok kuat-kuat selama 10 detik,
timbul busa yang mantap tidak kurang dari 10 menit setinggi 1-10 cm. Ditambahkan 1 tetes larutan asam klorida 2 N, bila buih tidak hilang menunjukkan
adanya saponin Depkes, RI., 1995.
3.4.6 Pemeriksaan steroidatriterpenoida
Sebanyak 1 g sampel dimaserasi dengan 20 mLn-heksan selama 2 jam, lalu disaring. Filtrat diuapkan dalam cawan penguap. Pada sisa dalam cawan penguap
ditambahkan 2 tetes asam asetat glasial dan 1 tetes asam sulfat pekat. Timbulnya warna biru atau biru hijau menunjukkan adanya steroid, sedangkan warna merah,
merah muda atau ungu menunjukkan adanya triterpenoidHarborne, 1987.
3.5 Uji Efek Antiinflamasi
Pengujian efek antiinflamasi ini terdiri dari beberapa tahap, yaitu penyiapan hewan percobaan, penyiapan bahan, dan pengujian efek antiinflamasi.
3.5.1 Pembuatan suspensi Na CMC 0,5
Sebanyak 500 mg Na CMC ditaburkan kedalam lumpang berisi air suling panas sebanyak 10 mL, ditutup dan dibiarkan selama 15 menit, kemudian digerus
hingga diperoleh massa yang transparan, lalu diencekan dengan air suling dimasukkan ke dalam labu tentukur dicukupkan hingga 100 mL Anief, 1995.
Universitas Sumatera Utara
30
3.5.2 Pembuatan suspensi natrium diklofenak dosis 4,5 mgkg bb
Sebanyak 4,5 mg serbuk natrium diklofenak digerus, kemudian ditambahkan sedikit suspensi Na-CMC 0,5 digerus sampai homogen, dimasukkan ke dalam
labu tentukur 10 mL, dicukupkan sampai garis tanda dengan suspensi Na-CMC 0,5.
3.5.3 Pembuatan suspensi ekstrak etanol daun sembukan EEDS dosis 300 mgkg bb, 400 mgkg bb dan 500 mgkg bb
Ditimbang masing-masing 300 mgkg bb, 400 mgkg bb dan 500 mgkg bb ekstrak etanol daun sembukan, kemudian dimasukkan ke dalam lumpang
ditambahkan sedikit suspensi Na-CMC digerus sampai homogen. Dimasukkan ke dalam labu tentukur 10 mL, dicukupkan sampai garis tanda. Perhitungan dosis
ekstrak etanol daun sembukan dapat dilihat pada lampiran 13 halaman 64.
3.5.4 Pembuatan larutan λ-karagenan 1
Ditimbang sebanyak 100 mg λ-karagenan, digerus sampai homogen dengan
larutan NaCl 0,9, kemudian dimasukkan ke dalam labu tentukur 10 mL, dicukupkan dengan larutan NaCl 0,9 sampai garis tanda. Diinkubasi pada suhu
37 C selama 24 jam Linnon, 2009.
3.5.5Pembuatan larutan reservoir
Sebanyak 2 mL campuran senyawa pembasah Ornano Imbente BBC. 97 yang telah tersedia dalam kemasan standar dimasukkan ke dalam labu tentukur 1
L, ditambahkan 0,4 NaCl kemudian dilarutkan dengan air suling lalu dimasukkan ke dalam labu tentukur 1 L , kemudian dicukupkan sampai garis tanda
Linnon,2009.
Universitas Sumatera Utara
31
3.5.6Penyiapan hewan percobaan
Hewan yang digunakan pada penelitian ini adalah tikus putih jantan yang sehat sebanyak 25 ekor dengan berat badan 150-200 g. Sebelum pengujian terlebih
dahulu tikus dikondisikan selama 1 minggu dalam kandang yang baik untuk menyesuaikan diri dengan lingkungannya. Hewan yang digunakan pada penelitian
ini telah disetujui penggunaanya oleh Ketua Komite Etik Penelitian Hewan Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam-Universitas Sumatera Utara
Animal Research Ethics Commitees EREC. Rekomendasi persetujuan dapat dilihat pada Lampiran 2 halaman 50.
3.5.7 Pengujian efek antiinflamasi