serinya maka semakin presisi nilai yang dihasilkan. Disarankan untuk menggunakan 5 atau lebih tabung setiap serinya jika menginginkan presisi yang lebih baik ISO,
2007
2.5.1.3. Tahap Uji Metode MPN
Metode MPN terdiri dari tiga tahap, yaitu uji pendugaan presumptive test, uji konfirmasi confirmed test, dan uji kelengkapan completed test.
1. Uji pendugaan Presumptive Test Uji pendugaan mendeteksi sifat fermentatif coliform dalam
sampel. Karena beberapa jenis bakteri selain coliform juga memiliki sifat fermentatif. Dalam uji pendugaaan, setiap tabung yang
menghasilkan gas dalam masa inkubasi diduga mengandung bakteri coliform
. Medium yang digunakan adalah kaldu laktosa. Bakteri
coliform menggunakan laktosa sebagai sumber karbonnya. Tes ini
dikatakan positif jika setelah inkubasi 37 C selama 48 jam laktosa
yang telah difermentasi akan berubah warna dan terbentuk gas yang ditampung oleh tabung Durham yang diletakkan terbalik.
Dalam tahap ini, keberadaan coliform masih dalam tingkat probabilitas rendah, masih dalam dugaan. Maka diperlukan uji
konfirmasi untuk mengetes kembali kebenaran adanya coliform. 2. Uji konfirmasi Confirmed Test
Merupakam tes lanjutan dari tes pendugaan. Uji konfirmasi dilakukan untuk mengkonfirmasi bahwa gas yang terbentuk
disebabkan oleh bakteri coliform dan bukan disebabkan oleh kerja sama beberapa spesies sehingga menghasilkan gas. Untuk uji
konfirmasi digunakan Brilliant Green Lactose Broth BGLB yang diinokulasi dengan satu mata ose media yang memperlihatkan hasil
Universitas Sumatera Utara
positif pada uji duga. Kaldu BGBL diinkubasikan pada suhu 35
o
C selama 48 jam.
3. Uji kelengkapan Completed Test Uji kelengkapan dilakukan untuk menetukan hasil pemeriksaan
benar –benar postif, maka mikroba dari hasil uji konfirmasi yang
positif diinokulasikan pada kaldu laktosa kembali. Selain itu ditumbuhkan pula pada agar miring. Jika timbul gas pada kaldu
laktosa, maka uji kelengkapan dinyatakan positif. Selanjutnya, jumlah coliform dapat dihitung dengan menggunakan tabel Hopkins yang
lebih dikenal dengan metode JPT atau MPN.
2.5.1.4. Nilai MPN
