BAB 3
BAHAN DAN METODA
3.1. Waktu dan Tempat
Penelitian potensi bakteri penghasil biosurfaktan asal laut Sibolga dan Tanjung Balai dalam mendegradasi minyak solar dilakukan dari bulan Mei sampai Desember 2010 di
Laboratorium Mikrobiologi Departemen Biologi Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Universitas Sumatera Utara, Medan.
3.2. Bahan dan Alat
Bahan-bahan utama yang diperlukan pada penelitian ini adalah minyak solar, media TSA Tripton Soya Agar, NaCl¸ K
2
HPO
4
, NH
4
H
2
PO
4
, KNO
3,
NH
4 2
SO
4,
N-hexan, Zat standart toluene n-C
7
, etilbenzena n-C
8
, nonana n-C
9
, undekana n-C
11
, aquades, air laut, alkohol 70, desinfektan, kapas. Adapun alat yang digunakan
adalah tabung reaksi, corong pisah, petri, jarum ose, bunsen, gelas beaker, erlenmeyer, kertas saring, hotplate, vorteks, magnetic stirer, autoclave, oven, shaker, inkubator,
kulkas, Counter timbangan analitik.
3.3. Sampel Penelitian
Minyak solar untuk pengujian diperoleh dari Stasiun Pengisian Bahan Bakar Umum SPBU Pertamina Jln. Dr Mansur, Medan, Sumatera Utara.
Universitas Sumatera Utara
3.4. Isolat Bakteri
Isolat bakteri yang digunakan adalah isolat yang diperoleh dari penelitian sebelumnya yaitu isolat bakteri dari jenis Pseudomonas aeroginosa dan Acinetobacter dari
Saudara Kabul Warsito S.si, yang berasal dari laut Sibolga dan laut Tanjung Balai. Isolat yang diujikan berjumlah 3 isolat bakteri yaitu: TJB 01 Pseudomonas
aeroginosa, TJB 05 Pseudomonas sp. dan SBG 05 Acinetobacter sp. diremajakan pada media Tripton Soya Agar TSA. Sebanyak 8g media TSA dimasukkan ke dalam
tabung erlenmeyer 250 ml ditambahkan air laut sebanyak 200 ml diaduk hingga merata. Media dimasak di atas hoteplate hingga mendidih, dituang ke dalam tabung
reaksi sebanyak 10 ml, ditutup dengan menggunakan kapas dan disterilkan menggunakan autoclave dengan suhu 121
o
C dengan tekanan 2 bar selama 15 menit.
3.5. Pembuatan Media Mineral
Ditimbang zat masing masing sebanyak 1 g NaCL, 1 g K
2
HPO
4
, 1 g NH
4
H
2
PO
4
, 3 g KNO
3
, 1 g NH
4 2
HPO
4
, 0,2 g MgSO
4
. Sebanyak 1000 ml air laut dimasukkan ke dalam erlenmeyer 1000 ml, kemudian diaduk setelah rata kemudian pH media diukur
dengan menggunakan pH meter, pH media disesuaikan dengan NaOH, dipanaskan di atas hoteplate hingga mendidih. Media yang telah dimasak kemudian disterilisasi
dengan autoclave dengan suhu 121
o
C dengan tekanan 2 bar selama 15 menit.
3.6. Pembuatan Suspensi Isolat Bakteri 10
Kategori