20
3.4 Prosedur Penelitian
3.5. Cara Kerja 3.5.1.
Sterilisasi Alat penelitian
Alat yang digunakan dalam penelitian ini dicuci bersih dan disterilkan dengan cara yang sesuai. Alat-alat seperti labu ukur, gelas ukur,
tabung reaksi test tube, pipet tetes, tabung durham, sendok aduk, dan kapas swab disterilkan dalam autoklaf selama 15 menit pada suhu 121
C dengan tujuan mematikan semua bakteri atau mikroorganisme. Sedangkan
jarum ose, pinset dan object glass disterilkan dengan api Bunsen.
3.5.2. Persiapan pemindahan susu pasteurisasi
Susu pasteurisasi yang berasal dari dua jenis merek berbeda, masing-masing dimasukkan ke dalam tabung reaksi yang sudah steril, lalu
ditutup dengan kapas steril dan alumunium foil, agar tidak terkontaminasi oleh mikroorganisme lainnya.
21
3.5.3. Pembuatan Kaldu laktosa
Bubuk laktosa ditimbang sebanyak 2,6 gram dimasukkan ke dalam labu ukur 300 ml, kedalam labu ukur ditambahkan sebanyak 200 ml
aquades, lalu dipanaskan dengan magnetic hot stirer hingga mendidih, setelah itu dimasukkan ke dalam 9 tabung reaksi yang sudah diisi tabung
durham sebanyak 10 ml. Larutan laktosa dimasukkan kedalam autoklaf pada suhu 121
C selama 15 menit untuk proses sterilisasi.
3.5.4. Pembuatan Larutan BGLB Brilliant Green Bile Lactose Borth
Bubuk BGLB.ditimbang sebanyak 8 gram dimasukkan ke dalam labu ukur 300 ml, kedalam labu ukur ditambahkan sebanyak 200 ml
aquades, lalu dipanaskan dengan magnetic hot stirrer hingga mendidih, setelah itu dimasukkan ke dalam 18 tabung reaksi yang sudah diisi tabung
durham sebanyak 10 ml. Setelah itu, larutan BGLB dimasukkan kedalam autoklaf pada suhu 121
C Selama 15 menit untuk proses sterilisasi.
3.5.5. Pembuatan larutan madu konsentrasi 25, 50, 75 dan 100.
Madu sebanyak 25 ml dilarutkan dengan aquades steril sebanyak 75ml dalam becker glass yang sudah disteril. Begitu juga untuk madu
dengan konsentrasi 50, madu sebanyak 50 ml dilarutkan dengan aquades steril sebanyak 50ml. Untuk madu konsentrasi 75, madu 75ml dilarutkan
dengan aquades sebanyak 25ml, sedangkan untuk madu dengan konsentrasi 100 tidak dilarutkan dengan aquades. Setelah itu masing-
masing becker glass yang berisi larutan madu dengan konsentrasi yang berbeda diaduk dengan sendok kaca steril, setelah itu becker glass tersebut
ditutup dengan alumunium foil untuk menghindari kontaminasi dari
mikroorganisme lainnya. 3.5.6.
Aquades steril
Aquades steril dimasukkan kedalam becker glass steril secukupnya, tanpa penambahan apapun, setelah selesai tutup dengan
alumunium foil untuk menghindari kontaminasi dari mikroorganisme lainnya.
22
3.6. Uji MPN untuk mengetahui jumlah koliform bakteri pada susu: