BAB 3
BAHAN DAN METODA
3.1 Waktu dan Tempat
Penelitian ini dilaksanakan mulai bulan Juli 2007 sampai Januari 2008 di Laboratorium Mikrobiologi FMIPA USU Medan.
3.2 Bahan
Bagian tanaman kelapa sawit yang digunakan sebagai sampel untuk diisolasi yaitu akar dan daun tanaman kelapa sawit. Akar dan daun yang digunakan berasal dari
tanaman kelapa sawit yang sehat dan berumur ≥ 5 tahun. Isolat fungi G. boninense
berumur ± 5 hari yang ditumbuhkan pada media NA Nutrient Agar + YE Yeast Extract 1 yang diperoleh dari Pusat Penelitian Kelapa Sawit PPKS Marihat,
Pematang Siantar.
3.3 Lokasi Pengambilan Sampel
Akar dan daun tanaman kelapa sawit diambil dari 6 kawasan di Sumatera Utara, yaitu PTPN III Rantau Prapat Utara Kab. Labuhan Batu RU, Perkebunan Kelapa Sawit
Rakyat Rantau Prapat Selatan Kab. Labuhan Batu RS, Perkebunan Kelapa Sawit Rakyat Islamic Centre Medan ICM, PTPN II Tanjung Morawa Kab. Deli Serdang
TM, Perkebunan Kelapa Sawit Rakyat Tanah Jawa Kab. Simalungun, Pematang Siantar PS, dan Kebun Kelapa Sawit USU USU Medan Lampiran F, hlm: 35.
Universitas Sumatera Utara
3.4 Isolasi Bakteri Endofit Dari Akar
Isolasi bakteri endofit dari akar tanaman kelapa sawit dilakukan menurut metode Radu Kqueen 2002. Sampel yang diambil dari lokasi segera dicuci dengan air untuk
menghilangkan kotoran yang menempel. Kemudian dikeringkan, lalu dibungkus dengan kertas koran dan dimasukkan ke dalam kantong plastik. Selanjutnya sampel
dibawa ke laboratorium untuk tahap isolasi. Tahap awal yang dilakukan adalah mencuci bagian akar tanaman yang dipotong-potong sepanjang 3-5 cm dengan air
mengalir selama 20 menit. Kemudian disterilisasi bagian permukaan akar tanaman dengan merendamnya di dalam larutan secara berturut-turut: etanol 75 selama 2
menit, larutan sodium hipoklorit 5,3 selama 5 menit, dan etanol 75 selama 30 detik. Selanjutnya, dibilas dengan akuades steril sebanyak 2 kali. Setelah itu,
dikeringkan dengan kertas saring steril. Setelah kering, bagian ujung kiri dan kanan akar tanaman dibuang ± 1 cm. Kemudian masing-masing akar dipotong menjadi 4
bagian dan diletakkan di permukaan media NA yang telah dicampur dengan antibiotik ketokonazol 0,3 gram100 ml dengan posisi bekas potongan ke arah media.
Kemudian diinkubasi pada suhu ruang 25
o
-30
o
C selama ± 5 hari. Koloni yang muncul dari bagian akar tanaman sebelah dalam disubkulturkan ke media NA yang
baru untuk dimurnikan Lampiran B, hlm: 31.
3.5 Isolasi Bakteri Endofit Dari Daun
Kategori