3.2.4. Pengujian Aktivitas Enzim Papain Metode Murachi 3.2.4.1. Pengujian pH Optimum Enzim Papain
Sebanyak 1 mL kasein 1 dimasukkan masing-masing kedalam 5 buah beaker glass 100 mL dan ditambahkan masing-masing 1 mL enzim papain 1 dan
ditambahkan masing-masing 16 mL buffer fosfat dengan variasi pH 6; 6,5; 7; 7,5; 8 untuk masing-masing gelas beaker dan diinkubasi pada suhu 55
o
C selama 20 menit. Kemudian ditambahkan masing-masing 2 mL asam trikloroasetat 30 dan
diinkubasi kembali pada suhu 55
o
C selama 20 menit dan disaring. Kemudian diukur absorbansi masing-masing
filtrat pada λ
maks
275 nm.
3.2.4.2. Pengujian Suhu Optimum Enzim Papain
Sebanyak 1 mL kasein 1 dimasukkan masing-masing kedalam 6 buah gelas beaker 100 mL dan ditambahkan masing-masing 1 mL enzim papain 1 dan
ditambahkan masing-masing 16 mL buffer fosfat pH 7 dan diinkubasi masing- masing gelas beaker dengan variasi suhu 40,45,50,55,60,65,70
o
C selama 20 menit. Kemudian ditambahkan masing-masing 2 mL asam trikloroasetat 30 dan
diinkubasi kembali masing-masing gelas beaker dengan variasi suhu yang sama selama 20 menit dan disaring. Kemudian diukur absorbansi masing-masing filtrat
pada λ
maks
275 nm.
3.2.4.3. Pengujian Aktivitas Enzim Papain
Sebanyak 1 mL kasein 1 dimasukkan kedalam gelas beaker 100 mL dan ditambahkan dengan 1 mL enzim papain 1 dan ditambahkan 16 mL buffer
fosfat pH 7 kemudian diinkubasi pada suhu 55
o
C selama 20 menit. Kemudian ditambahkan 2 mL asam trikloroasetat 30 dan diinkubasi kembali pada suhu
55
o
C selama 20 menit dan disaring. Kemudian diukur absorbansi filtrat pada λ
maks
275 nm.
Universitas Sumatera Utara
3.2.4.4. Imobilisasi Enzim Papain Dengan Menggunakan Bahan Pendukung Kappa Karagenan k – Karagenan
Sebanyak 20 mL enzim papain papain dimasukkan kedalam gelas beaker dan ditambahkan 5 mL larutan NaCl 0,85. Diaduk pelan-pelan dan biarkan selama 3
menit pada suhu 37
o
C. Kemudian dimasukkan 3,5 gram kappa karagenan kedalam gelas beaker dan ditambahkan 80 mL larutan NaCl 0, 85. Dipanaskan sampai
suhu 80
o
C sambil diaduk hingga larut sempurna, lalu dibiarkan hingga suhu 55
o
C. Dicampurkan kedua larutan tersebut sampai homogen, dibiarkan dingin pada suhu
kamar selama 10 menit dan suhu 10
o
C selama 30 menit sampai terbentukgel. Untuk menambah kekerasan gel direndam dalam larutan KCl 0,3 M dingin selama
24 jam pada suhu 4°C. Selanjutnya gel dipotong-potong dengan ukuran 3x3x3 mm. Gel yang sudah dipotong-potong dicuci dengan air akuades.
3.2.4.5. Penentuan Kadar Enzim Papain Yang Tidak Terenkapsulasi
