lampiran 10 b, 10 f dan 10 h menunjukkan bahwa tidak ada serapan yang dihasilkan baik oleh pelarut, asam galat dan fraksi air ekstrak etanolik beras hitam
yang digunakan pada panjang gelombang maksimum Folin-Ciocalteu, sehingga dapat disimpulkan bahwa metode yang digunakan memliki spesifisitas yang baik.
G. Hasil Penetapan Kandungan Fenolik Total
Tujuan penetapan kandungan fenolik total adalah untuk mengetahui jumlah dari senyawa fenolik yang terdapat pada fraksi air ekstrak etanol beras hitam
yang diduga berperan sebagai senyawa yang memiliki aktivitas sebagai antioksidan. Penentuan kandungan fenolik total pada fraksi air ekstrak etanol beras hitam
dilakukan dengan menggunakan pereaksi Folin-Ciocalteu dengan standar asam galat dan absorbansinya diukur menggunakan spektrofotometer visibel pada OT
dan panjang gelombang maksimum. Hasil dari pengukuran tersebut dinyatakan sebagai massa ekivalen asam galat.
Gambar 9 . Struktur molekul asam galat menurut Pokorny et al., 2001
Prinisip dari metode Folin-Ciocalteu yaitu, senyawa fenol akan membentuk ion fenolat pada lingkungan basa. Selama reaksi berlangsung gugus
fenolik hidroksi akan mereduksi pereaksi Folin-Ciocalteu membentuk kompleks fosfotungstat-fosfomolibdat yang berwarna biru dengan struktur yang belum
diketahui. Makin besar kandungan fenolik dalam suatu sampel maka kompleks warna biru yang terbentuk juga akan makin pekat. Warna yang terbentuk kemudian
dapat diukur absorbansinya dengan menggunakan spektrofotometer visibel.
Tabel VI. Kadar asam galat dengan absorbansinya setelah direaksikan dengan pereaksi Folin-Ciocalteu yang diukur pada panjang gelombang 749,5 nm
Replikasi 1 Konsentrasi μ gml
Absorbansi Persamaan
40,16 0,288
y = 0,006x + 0,055 r = 0,9994
60,24 0,399
80,32 0,511
100,4 0,619
120,48 0,751
Replikasi 2 Konsentrasi μ gml
Absorbansi Persamaan
40 0,268
y = 0,006x + 0,013 r = 0,9997
60 0,393
80 0,506
100 0,626
120 0,758
Replikasi 3 Konsentrasi μ gml
Absorbansi Persamaan
40,48 0,257
y = 0,006x + 0,003 r = 0,9996
60,72 0,394
80,96 0,517
101,2 0,655
121,44 0,771
Gambar 10. Kurva persamaan regresi linear asam galat Replikasi 2
Hasil dari pengukuran kandungan fenolik total dinyatakan sebagai massa ekivalen asam galat. Pembuatan kurva baku untuk asam galat dilakukan dengan tiga
kali replikasi. Dari persamaan regresi linear yang didapatkan pada ketiga kali replikasi untuk kurva baku asam galat kemudian dipilih salah satu yang memiliki
koefisien korelasi yang paling baik. Dari ketiga replikasi tersebut yang digunakan adalah replikasi kedua karena nilai r yang dihasilkan paling mendekati +1.
Persamaan yang didapatkan pada replikasi kedua adalah y = 0,006x + 0,013 dengan nilai r = 0,9997 Tabel VI. Berdasarkan hasil perhitungan kandungan fenolik total
pada ketiga replikasi, fraksi air ekstak etanolik beras hitam memiliki nilai kandungan fenolik total rata-rata, yaitu 5,1 ± 0,12 mg ekivalen asam galat per gram
fraksi air ekstrak etanolik beras hitam Tabel VII.
y = 0,006x + 0,013 r = 0,9997
0,1 0,2
0,3 0,4
0,5 0,6
0,7 0,8
20 40
60 80
100 120
140
A b
so rb
a n
si
Konsentrasi Asam Galat μgml
KURVA PERSAMAAN PENETAPAN KADAR FENOLIK TOTAL ASAM GALAT
Tabel VII. Hasil perhitungan kandungan fenolik total
Fraksi air Absorbansi
Kandungan fenolik
μ gml Kandungan fenolik
total mg ekivalen asam galat per gram
fraksi x rata-rata ± SD
Replikasi 1 0,581
94,67 5,0
5,1 ± 0,12 Replikasi 2
0,609 99,34
5,2 Replikasi 3
0,594 96,83
5,1
H. Hasil Optimasi Metode Uji Aktivitas antioksidan 1. Penentuan panjang gelombang m
