sebanyak 100 ml ke dalam erlenmeyer yang berisi PUF secara aseptis, kemudian dihomogenkan pada orbital shaker selama 6 jam Quek et al., 2005 dimodifikasi.
b. Imobilisasi dengan Menggunakan Alginat
Sebanyak 50 ml suspensi bakteri yang sama kemudian dicampurkan dengan 50 ml alginat dengan konsentrasi 3 bv. Selanjutnya campuran tersebut
diteteskan pada CaCl
2
0,1 Menggunakan syringe sambil dilakukan pengadukan dengan kecepatan putaran 50-100 rpm menggunakan magnetic stirrer. Pengerasan
gel dilakukan selama satu jam Li et al. 2009. Gel yang terbentuk dipindahkan dalam larutan NaCl fisiologis 0,85 untuk mendapatkan struktur gel yang
kompak. Kapsul yang terbentuk selanjutnya dimasukkan ke air destilasi steril dan diputar secara perlahan selama satu jam untuk menghilangkan residu CaCl
2
Lampiran 1.
3.3.4. Efektifitas Imobilisasi
Keberhasilan dari proses imobilisasi dapat dihitung dengan cara membandingkan jumlah bakteri sebelum dan sesudah imobilisasi, dengan
persamaan sebagai berikut: ����������� ����������� =
�������� ������� ������ ℎ ����������� �������� ������� ������� �����������
� 100
3.3.5. Uji Viabilitas Bakteri Setelah Imobilisasi dan Pengaplikasian pada Media Uji
Uji viabilitas dilakukan dengan metode Triana et al. 2006 yang telah dimodifikasi, segera setelah proses enkapsulasi selesai dan diinkubasi selama 20
hari pada suhu 37
o
Penghitungan jumlah bakteri segera dilakukan setelah enkapsulasi. Jumlah populasi bakteri yang terdapat pada polyurethane foam PUF dan kapsul alginat
dihitung selama 15 hari masa inkunasi dengan interval 5 hari. Penghitungan jumlah bakteri dilakukan dengan cara memisahkan bakteri dari bahan penyalut.
Kapsul alginat diguncang dalam larutan tri-sodiun sitrat hingga larut sempurna, sedangkan bakteri pada polyurethane foam dimasukkan dalam larutan NaCl
C kondisi kering dan amobil. Viabilitas sel terenkapsulasi dihitung dengan menggunakan metode Total Plate Count menggunakan media
Plate Count Agar PCA dengan membuat pengenceran berseri. Efektifitas Imobilisasi =
Populasi bakteri setelah imobilisasi Populasi bakteri sebelum imobilisasi
x 100 17
Universitas Sumatera Utara
0,85 dan diguncang dengan vortex. Ketahanan bakteri terimobilisasi didapat dengan membandingkan populasi bakteri sebelum diaplikasikan, dengan seusdah
diaplikasikan selama 15 hari masa inkubasi pada suhu ambien.
Ketahanan
=
�������� ������� ���� �������� ���� ����� � ��������
�������
���� �������� ������� �������������
× 100
3.3.6. Uji Aktifitas Biosurfaktan
Skrining aktivitas biosurfaktan dilakukan dengan metode Drop Collapsing Test Jain et al., 1991 yang dimodifikasi, yaitu metode yang digunakan untuk
menentukan penurunan tegangan permukaan cairan. Isolat bakteri ditumbuhkan pada media BHB yang ditambahkan 2 dekstrosa sebagai sumber karbon.
Sebanyak 2 ml inokulum cair isolat bakteri
λ
600 = 1 Abs setara 10
9
CFUml diinokulasikan kedalam 100 ml media BHB yang mengandung 2 dekstros
secara aseptis. Media diinkubasi pada waterbath shaker dengan kecepatan 150 rpm pada suhu ruang selama 15 hari. Setelah 15 hari masa inkubasi, masing-
masing media biakan disaring dan diambil filtratnya. Sebanyak 4 ml filtrat media dimasukkan ke dalam tabung reaksi, ditambah 4 ml N-heksan dan 2 ml akuades.
Lalu campuran larutan tersebut dihomogenkan dengan vorteks selama 10 detik dan didiamkan selama 1menit. Emulsi yang terbentuk diukur ketebalannya dengan
menggunakan gelas ukur. Persentase Indeks Emulsifikasi IE dihitung dari masing-masing isolat dengan cara membandingkannya antara volume emulsi
dibagi dengan totalvolume filtrat lalu dikali 100 Hamzah et al., 2013.
IE
=
������ ������ ���� ��������� ����� ������ ������� 10 ��
× 100
Hamzah et al., 2013
3.3.7. Uji Kemampuan Bakteri Terimobilisasi Dalam Mendegradasi Pestisida Secara In-vitro
