E. Alat Penelitian
Alat-alat yang digunakan pada penelitian ini yaitu alat gelas Pyrex, jarum ose, mikropipet, inkubator Heraeus, autoclave tipe KT-40 ALP,
Densichek Vitek, neraca analitik Mettler Toledo GB 3002, shaker Innova 2100, oven Memmert, Microbiological Safety Cabinet, jangka sorong, alat
pembuat sumuran No. 3 diameter 6 mm, cawan petri Pyrex, vortex, corong Buchner, pompa vacuum, rotary vacuum evaporator IKAVAC®, dan kamera
digital Samsung.
F. Tata Cara Penelitian 1. Pengumpulan bahan daun salam
Daun salam yang diperoleh dari pohon salam berasal dari daerah Kaliurang dikumpulkan pada bulan Agustus dan September 2012. Daun salam
yang diambil berwarna hijau tua mulai dari daun ketiga dari ujung dan kedua dari pangkal dan diambil dalam keadaan segar.
2. Pembuatan serbuk daun salam
Daun salam dicuci bersih dari kotoran dan bagian tumbuhan yang lain dengan menggunakan air mengalir. Dikeringkan di bawah sinar matahari dengan
ditutup kain hitam. Pengeringan dihentikan jika daun saat diremas mudah remuk lalu diserbuk dengan menggunakan blender hingga halus. Serbuk daun diayak
menggunakan pengayak No.40. Disimpan di dalam wadah yang kering dan tertutup rapat.
3. Pembuatan ekstrak etanolik daun salam
Maserasi dilakukan pada 50 g serbuk daun salam 500 mL pelarut etanol 96 dengan kecepatan 120 rpm selama 5 hari. Disaring dengan kertas saring
dengan bantuan pompa vacuum lalu dipekatkan menggunakan rotary vacuum evaporator sampai terbentuk cairan kental. Dilanjutkan dengan menggunakan
penangas air selama 15-20 menit dengan suhu antara 50 -60
C sampai diperoleh ekstrak kental.
4. Skrining fitokimia serbuk daun salam
a. Uji flavonoid. Sebanyak 1 g serbuk daun salam ditambahkan
dengan 5 mL aquadest, lalu dipanaskan selama 10 menit. Selanjutnya disaring, filtrat ditambahkan dengan NaOH LP kemudian ditambahkan dengan HCl.
Adanya perubahan warna merah menjadi kurang pekat menunjukkan adanya flavonoid.
b. Uji tanin. Sebanyak 2 g serbuk daun salam ditambahkan dengan 10
mL aquadest, lalu dipanaskan selama 30 menit dalam penangas air hingga mendidih. Selanjutnya disaring, filtrat sebanyak 5 mL ditambahkan larutan
natrium klorida 2 sebanyak 1 mL. Apabila terbentuk suspensi atau endapan disaring dengan kertas saring kemudian filtrat ditambahkan larutan gelatin 1
sebanyak 5 mL. Terbentuknya endapan menunjukkan adanya tanin. Selain itu dapat juga dengan menambahkan 5 tetes FeCl
3
pada filtrat. Dikatakan positif tanin jika terjadi perubahan warna menjadi biru kehitaman.
5. Analisis flavonoid dan tanin serbuk daun salam dengan KLT
Kategori