18
ekstrak siwak yang dihasilkan yaitu sebesar 5 vv. Rendemen ekstrak siwak tersebut dihitung berdasarkan volume akhir ekstrak setelah diuapkan dibandingkan dengan volume awal ekstrak
sebelum diuapkan pelarutnya dengan menggunakan rotary evaporator. Ekstrak siwak yang didapat kemudian disimpan di dalam lemari pendingin untuk meminimalisasi kerusakan senyawa aktif
sebelum digunakan.
B. DIAMETER ZONA HAMBAT
Uji aktivitas antimikroba dilakukan menggunakan metode difusi sumur agar. Metode difusi sumur agar dilakukan dengan memasukan komponen antimikroba ke dalam lubang sumur pada
media agar. Komponen tersebut akan berdifusi ke dalam media agar dan akan menghambat pertumbuhan mikroba yang terdapat pada media agar.
Aktivitas antimikroba ekstrak kayu siwak Salvadora persica Wall. pada metode difusi sumur ditunjukkan dengan adanya area bening di sekitar sumur yang berisi ekstrak kayu siwak
pekat pada media agar yang telah diinokulasi dengan bakteri uji. Pada uji difusi sumur digunakan tiga variabel yang Staphylococcus aureus ATCC 25923 dan Pseudomonas aeruginosa ATCC
27853. Diameter zona penghambatan dapat dilihat pada Tabel3. berikut ini : Tabel 3. Diameter zona hambat ekstrak kayu siwak terhadap bakteri uji mm
Keterangan : Uji difusi sumur dilakukan sebanyak 2 kali ulangan; diameter sumur 0.4 mm; uji statistik ANOVA dengan p = 0.05
Pada perlakuan ekstrak siwak dengan konsentrasi 100 didapatkan hasil diameter zona penghambatan sebesar 21.20±1.80 mm untuk bakteri uji Staphylococcus aureus. Pada perlakuan
yang sama dengan bakteri uji Pseudomonas aeruginosa didapatkan diameter zona penghambatan yang lebih kecil yaitu sebesar 20.11±1.76 mm. Bakteri gram positif dan gram negatif memiliki
ketahanan yang berbeda terhadap senyawa antimikroba. Hasil diameter zona penghambatan pada bakteri Staphylococcus aureus lebih besar jika dibandingkan dengan hasil zona penghambatan
pada bakteri Pseudomonas aeruginosa. Hasil tersebut menunjukkan bahwa bakteri gram positif lebih mampu dihambat oleh senyawa antibakteri yang terdapat di dalam ekstrak kayu siwak. Pola
penghambatan terhadap bakteri gram positif dan bakteri gram negatif dari ekstrak kayu siwak ini mirip dengan pola penghambatan antibiotik penisilin G. Menurut Prescott et al.2003, penisilin G
lebih aktif menghambat pertumbuhan bakteri gram positif daripada gram negatif. Perlakuan
Diameter zona penghambatan mm Staphylococcus aureus
Pseudomonas aeruginosa Ekstrak siwak 100
21.20±1.80
a
20.11±1.76
a
Amoxycillin 2 kontrol positif 22.24±1.03
a
21.34±0.75
a
Akuades steril kontrol negatif 0.00±0.00
0.00±0.00
19
Gambar 12. Diameter zona penghambatan ekstrak kayu siwak Bakteri gram positif lebih sensitif terhadap senyawa antimikroba dibandingkan dengan
bakteri gram negatif karena struktur dinding sel bakteri gram negatif yang lebih kompleks, yaitu lipopolisakarida, peptidoglikan, dan lipoprotein. Pada lapisan lipopolisakarida tersebut bakteri
gram negatif memiliki sistem seleksi screening terhadap zat-zat asing Branen dan Davidson, 1993. Bakteri gram negatif umumnya lebih sensitif terhadap senyawa antimikroba yang bersifat
polar karena dinding sel bakteri gram negatif bersifat polar sehingga lebih mudah dilewati oleh senyawa antimikroba yang bersifat polar.
Sebaliknya, bakteri gram positif lebih sensitif terhadap senyawa antimikroba yang bersifat non-polar. Sensitivitas bakteri gram positif terhadap senyawa antimikroba yang bersifat non-polar
disebabkan karena komponen terbesar penyusun dinding sel bakteri gram positif adalah peptidoglikan yang salah satu penyusunnya adalah asam amino alanin yang bersifat non-polar. Hal
inilah yang menyebabkan dinding sel bakteri gram positif menjadi lebih mudah dilewati dan diserang oleh senyawa antimikroba yang bersifat non-polar.
Menurut El-Mosterhy et al. 1998 siwak mengandung zat-zat kimia, seperti golongan alkaloid yang diduga sebagai salvadorin, klorida, sejumlah besar fluorida dan silika, sulfur,
vitamin C, serta sejumlah kecil tannin,saponin, flavanoida dan sterol. Darout 2000 melaporkan bahwa kandungan kimiawi ekstrak kayu siwak sangat ampuh menghilangkan plak dan mengurangi
virulensi bakteri periodontopatogenik. Kandungan anionik alami dalam siwak dipercaya sebagai antimikrobial yang efektif untuk menghambat dan membunuh mikroorganisme. Sementara itu,
Pratama 2005 menyebutkan bahwa mekanisme penghambatan terhadap pertumbuhan bakteri Staphylococcus aureus diduga disebabkan adanya zat antibakteri pada kayu siwak seperti
trimetilamin dan fluorida. Trimetilamin dapat merusak tegangan permukaan lapisan membran sel sehingga sel dapat kehilangan permeabilitasnya. Apabila sifat permeabilitas pada membran sel
hilang maka aliran keluar masuknya bahan-bahan dan zat tertentu akan terganggu sehingga dapat mengganggu metabolisme dan menyebabkan kematian pada bakteri tersebut. Sementara itu,
fluorida dapat mendenaturasi protein dan membuat enzim tidak bekerja pada membran sel sehingga metabolisme bakteri terganggu.
Kontrol positif menggunakan obat antibiotik komersial yaitu amoxycillin dengan konsentrasi 2 bv dengan hasil zona penghambatan bakteri sebesar 22.24±1.03 mm pada
bakteri Staphylococcus aureus dan 21.34±0.75 mm pada bakteri Pseudomonas aeruginosa.
20
Antibiotik merupakan produk metabolit yang dihasilkan oleh organisme tertentu yang dalam jumlah sangat kecil bersifat merusak atau menghambat mikroorganisme lainnya. Amoxycillin
merupakan bubuk berwarna putih atau agak keputihan, sedikit memiliki aroma sulfur, sinergis dengan sitrat, fosfat, dan larutan buffer. Amoxycillin mudah larut di dalam air, sedikit larut pada
etanol anhidrat, sangat sedikit larut pada etanol 96 British Pharmacopoeia, 2009.Amoxycillin sebagai kontrol positif dalam penelitian ini merupakan turunan semisintetik dari penisilin.Penisilin
mampu menghambat bakteri pada masa pertumbuhannya melalui mekanisme penghambatan sintesis peptidoglikan. Penisilin juga menghambat kerja enzim yang menjadi katalis dari reaksi
transpeptidasi karena strukturnya yang sangat serupa. Peptidoglikan yang tidak tersintesis secara sempurna selanjutnya akan menyebabkan tekanan osmotik pada sel yang tidak normal kemudian
lisis Prescott et al.,2003. Kontrol positif amoxycillin 2 bv menghambat pertumbuhan bakteri uji dengan penghambatan terhadap bakteri Staphylococcus aureus lebih besar daripada
Pseudomonas aeruginosa. Hal tersebut sesuai dengan Prescott et al.2003 yang menyatakan bahwa penisilin G lebih mampu menghambat pertumbuhan bakteri gram positif dibandingkan
pertumbuhan bakteri gram negatif. Kontrol negatif yang menggunakan air destilasi steril tidak menunjukkan adanya aktivitas
penghambatan bakteri uji. Hal itu ditunjukkan dengan tidak adanya area zona bening di sekitar sumur agar, baik untuk bakteri gram positif maupun bakteri gram negatif karena air destilasi steril
tidak memiliki aktivitas antimikroba. Berdasarkan uji statistik dengan ANOVA, perlakuan ekstrak siwak memiliki hasil yang
tidak berbeda nyata p 0.05 dengan perlakuan kontrol positif amoxycillin 2bv Lampiran 3. Hal tersebut menunjukkan bahwa ekstrak siwak yang diuji memiliki kemampuan daya hambat
terhadap bakteri Staphylococcus aureus dan Pseudomonas aeruginosa yang sama dengan antibiotik komersial yaitu amoxycillin. Menurut Kaur 2011, amoxycillin merupakan antibiotik
dengan spektrum luas yaitu antibiotik yang mampu menghambat pertumbuhan bakteri gram positif dan bakteri gram negatif. Penelitian yang dilakukan oleh Al-Bayati 2007 juga menyebutkan
bahwa ekstrak siwak dengan pelarut air memiliki kemampuan antimikroba dengan spektrum yang luas karena mampu menghambat beberapa bakteri gram positif dan bakteri gram negatif seperti
S.aureus, S. mutans, S. faecalis, P. aeruginosa, dan L. acidophilus. Dari hasil uji difusi sumur tersebut dapat digunakan sebagai acuan untuk melakukan uji berikutnya yaitu penentuan nilai
konsentrasi hambat minimal ekstrak kayu siwak karena aktivitas penghambatan yang dihasilkan pada uji difusi sumur bersifat kualitatif.
C. NILAI MINIMUM INHIBITORY CONCENTRATION MIC
