perpustakaan.uns.ac.id digilib.uns.ac.id
26
bakteri uji, pengecatan Gram bakteri dan uji aktivitas antibakteri secara in vitro dengan metode difusi agar.
1. Penyiapan Alat
Alat yang digunakan untuk penelitian ini adalah alat yang dipinjam dari Laboratorium Biologi Pusat Sub Lab Mikrobiolgi UNS dan Laboratorium
Teknologi Farmasi FMIPA UNS. Alat yang digunakan untuk uji aktivitas antibakteri disterilkan menggunakan autoklaf pada suhu 121
o
C, tekanan 1 atm selama 15 menit.
2. Determinasi dan Preparasi Sampel
Langkah ini bertujuan untuk memastikan kebenaran sampel daun jeruk bali Citrus maxima Merr., dengan mencocokkan ciri-ciri morfologis yang ada
pada tanaman jeruk bali Citrus maxima Merr. terhadap kepustakaan yang dibuktikan oleh Lembaga Penelitian dan Pengabdian pada Masyarakat LPPM
Universitas Setia Bu Flora
Daun jeruk bali Citrus maxima Merr. dipetik, disortir, dan dibersihkan dengan cara dicuci di bawah air mengalir yang bersih. Pengeringan daun jeruk
bali Citrus maxima Merr. dilakukan dengan cara dijemur dibawah sinar matahari dengan dilapisi kain hitam. Daun jeruk bali Citrus maxima Merr.
yang telah kering dipisahkan dari pengotor sortasi kering, selanjutnya diserbuk menggunakan grinder dan diayak menggunakan ayakan nomor 40
dan 60. Diagram alir pembuatan serbuk simplisia daun jeruk bali Citrus maxima Merr. dapat dilihat pada Gambar 5.
perpustakaan.uns.ac.id digilib.uns.ac.id
27
Gambar 5. Pembuatan Serbuk Simplisia Daun Jeruk Bali
3. Ekstraksi
Pembuatan ekstrak etanol daun jeruk bali Citrus maxima Merr. dilakukan dengan metode maserasi yakni serbuk simplisia daun jeruk bali Citrus maxima
Merr. sebanyak 800 gram dimasukkan ke dalam bejana dan direndam dalam pelarut Etanol 75 sebanyak 6 liter selama 3 hari sambil diaduk. Dalam 3
hari tersebut dilakukan penggantian pelarut setiap 24 jam supaya penyarian berlangsung lebih optimal dan senyawa bioaktif dapat terlarut sempurna. Hasil
maserasi maserat disaring menggunakan kain flanel kemudian maserat yang didapat dihilangkan pelarutnya menggunakan rotary evaporator pada suhu
Daun Jeruk Bali
Dikeringkan dibawah sinar matahari dengan ditutup kain hitam
Dicuci dibawah air mengalir
Diserbuk Diayak dengan ayakan 40 dan 60 mesh
Serbuk Simplisia Daun Jeruk Bali Dipisahkan dari pengotor sortasi kering
Disortasi basah
perpustakaan.uns.ac.id digilib.uns.ac.id
28
55°C dengan kecepatan 5 rpm. Hasil ekstrak yang didapat kemudian dikentalkan menggunakan waterbath pada suhu 55°C hingga diperoleh ekstrak
kental. Ekstrak etanol daun jeruk bali Citrus maxima Merr. kemudian ditimbang dan disimpan di dalam eksikator. Diagram alir pembuatan ekstrak
etanol daun jeruk bali Citrus maxima Merr. dapat dilihat pada Gambar 6.
Gambar 6. Pembuatan Ekstrak Etanol Daun Jeruk Bali
4. Pengambilan Apusan, Isolasi dan Identifikasi Bakteri Uji
