perpustakaan.uns.ac.id digilib.uns.ac.id
28
55°C dengan kecepatan 5 rpm. Hasil ekstrak yang didapat kemudian dikentalkan menggunakan waterbath pada suhu 55°C hingga diperoleh ekstrak
kental. Ekstrak etanol daun jeruk bali Citrus maxima Merr. kemudian ditimbang dan disimpan di dalam eksikator. Diagram alir pembuatan ekstrak
etanol daun jeruk bali Citrus maxima Merr. dapat dilihat pada Gambar 6.
Gambar 6. Pembuatan Ekstrak Etanol Daun Jeruk Bali
4. Pengambilan Apusan, Isolasi dan Identifikasi Bakteri Uji
Pengambilan apusan dilakukan dengan cara mengusap darah pada jerawat probandus menggunakan cotton budd steril yang sebelumnya telah dicelupkan
Dalam 3 hari dilakukan penggantian pelarut setiap 24 jam
Ekstrak kental
Disimpan dalam eksikator 800 gram Serbuk Simplisia Daun Jeruk Bali
Dimaserasi dengan pelarut Etanol 75 sebanyak 6 liter selama 3 hari
Maserat disaring menggunakan kain flanel
Dihilangkan pelarutnya menggunakan rotary evaporator pada suhu 55°C dengan kecepatan 5 rpm
Dikentalkan menggunakan waterbath pada suhu 55°C
perpustakaan.uns.ac.id digilib.uns.ac.id
29
ke dalam aquadest steril, kemudian diratakan dengan metode streak pada media NA Nutrient Agar dan diinkubasi selama 24 jam pada suhu 37°C.
Masing-masing koloni yang tumbuh diisolasi pada media NA Nutrient Agar dan diinkubasi selama 24 jam pada suhu 37°C. Dari tiap-tiap koloni yang
tumbuh diambil 1 ose untuk dilakukan pengecatan dan pengamatan morfologi. Apabila dari hasil pengecatan dan pengamatan morfologi hanya terdapat satu
jenis bakteri maka dapat langsung dibuat stok dan digunakan sebagai bakteri uji, sedangkan apabila hasilnya menunjukkan bahwa masih terdapat lebih dari
satu jenis bakteri maka harus dilakukan pemisahan terlebih dahulu menggunakan media yang sesuai. Diagram alir isolasi dan identifikasi bakteri
uji dapat dilihat pada Gambar 7.
perpustakaan.uns.ac.id digilib.uns.ac.id
30
Gambar 7. Tahap Isolasi dan Identifikasi Bakteri Uji
Dikulturkan dalam Media NA dan diinkubasi 24 jam pada suhu 37°C
Diperoleh biakan 10 koloni
Dibuat 10 stok bakteri dalam bentuk agar miring
Dilakukan pengecatan Gram dan pengamatan morfologi bakteri
Bakteri bentuk kokus Gram positif
pada stok tabung 1 sampai 9
Dibuat stok dalam TSA Apusan darah jerawat
Ditanam dalam Media NA Nutrient Agar dan diratakan dengan metode streak
Tumbuh koloni bakteri lebat dari 4 apusan darah jerawat yang berbeda
Diambil 10 koloni berbeda dengan melihat bentuk dan warna koloni
diinkubasi 24 jam suhu 37°C
Bakteri bentuk basil Gram positif dan negatif pada stok tabung 10
Ditanam pada media Agar Darah
Ditanam pada media MacConkey Agar
Koloni bakteri Gram negatif
Koloni bakteri Gram positif
tidak hemolisis Koloni bakteri
Gram negatif tidak hemolisis
Uji aktivitas antibakteri
Dilakukan Pengecatan Gram dan pengamatan morfologi bakteri pada tiap koloni yang berbeda
Bakteri bentuk basil Gram positif
Bakteri bentuk basil Gram negatif
Masing-masing dibuat stok agar miring
perpustakaan.uns.ac.id digilib.uns.ac.id
31
5. Pengecatan Gram Bakteri Uji
