perpustakaan.uns.ac.id digilib.uns.ac.id
31
5. Pengecatan Gram Bakteri Uji
Langkah pengecatan Gram bakteri uji dimulai dengan membersihkan object glass dan degglass dengan alkohol kemudian masing-masing ujung
object glass diberi label untuk membedakan bakteri yang akan dicat. Pada bagian bawah object glass digambar bulatan berdiameter 1 cm dengan spidol
daerah ini digunakan untuk pengecatan bakteri. Pada sisi sebaliknya diteteskan 1 tetes aquadest dalam daerah bulatan, kemudian diambil sedikit
biakan bakteri dengan jarum ose secara aseptis dan digoreskan pada daerah bulatan lalu diratakan pada seluruh area bulatan kemudian dikering anginkan
hingga membentuk noda. Tahap selanjutnya dilakukan fiksasi panas dengan melewatkan object
glass pada nyala api beberapa kali jangan terkena api secara langsung. Setelah difiksasi, preparat digenangi dengan cat Gram A kristal violet selama
1-3 menit kemudian cat dibuang tanpa menggunakan air, selanjutnya preparat digenangi cat Gram B lugoliodine selama 1 menit kemudian sisa cat B dicuci
dengan air mengalir dan dikering anginkan. Object glass dimiringkan dan dicuci dengan cat Gram C alkohol 96 dan aceton dengan cara meneteskan
cat Gram C pada permukaan noda sampai warna cat tepat dilunturkan tidak berwarna selama 30 detik kemudian dicuci dengan air mengalir secara singkat
dan dikering anginkan. Preparat digenangi dengan cat Gram D safranin dan didiamkan selama 2 menit selanjutnya dicuci dengan air mengalir dan dikering
anginkan.
perpustakaan.uns.ac.id digilib.uns.ac.id
32
Permukaan object glass ditutup dengan deglass dan diamati dibawah mikroskop dengan perbesaran kuat dengan minyak imersi. Sel bakteri diamati
bentuk dan warnanya. Sel berwarna merah muda merupakan Gram negatif dan sel berwarna biru-ungu merupakan Gram positif.
Diagram alir pengecatan Gram bakteri uji dapat dilihat pada Gambar 8.
perpustakaan.uns.ac.id digilib.uns.ac.id
33
Gambar 8. Pengecatan Gram Bakteri Uji
Diperoleh Morfologi bakteri, Gram negatif merah muda, Gram positif biru-ungu
Ditambahakan dan disuspensikan 1 ose
biakan bakteri Ditetesi 1 tetes
akuades
Preparat kering Digenangi Cat Gram A selama 1-3 menit
Diratakan sebesar area bulatan Difiksasi di atas nyala api
Object Glass dibalik Object Glass
Ditempeli label
Digambar bulatan diameter ±1cm Daerah pengecatan mikroba
Dibersihkan dengan alkohol
Ditetesi cat Gram C selama 30 detik hingga warna hilang Cat Gram A buang tanpa dicuci air kemudian
digenangi cat Gram B selama 1 menit
Ditetesi cat Gram D selama 2 menit Ditutup dengan Degglass
Diamati dengan mikroskop perbesaran 1000x minyak imersi
Dicuci air kemudian dikering-anginkan,
Dikering-anginkan Dicuci cepat
dengan air mengalir
perpustakaan.uns.ac.id digilib.uns.ac.id
34
6. Uji Aktivitas Antibakteri