4 HASIL DAN PEMBAHASAN
Penapisan antibakteri perlu dilakukan untuk mengetahui potensi senyawa antibakteri dari bakteri asam laktat dalam menghambat pertumbuhan bakteri uji.
Daya hambat suatu senyawa antibakteri dapat diketahui dengan melakukan uji aktivitas menggunakan metode difusi sumur agar. Metode ini sering digunakan
sebagai bioassay untuk penentuan jenis senyawa antibakteri yang dihasilkan. Aktivitas hambatan terhadap pertumbuhan bakteri patogen yang diujikan tampak
sebagai zona bening di sekeliling sumur agar.
4.1 Penapisan Senyawa Antibakteri
Tahap penapisan senyawa antibakteri bertujuan untuk menyeleksi isolat BAL yang menghasilkan senyawa antibakteri terbaik. Tahapan ini meliputi
kultivasi, pemanenan dan uji aktivitas senyawa antibakteri. Penapisan senyawa antibakteri dilakukan dengan menggunakan tiga isolat bakteri asam laktat yang
berbeda, yakni isolat BAL SK15, SK16 dan SK19.
4.1.1 Kultivasi
Kultivasi sel bakteri merupakan proses peningkatan konsentrasi beberapa atau semua komponen suatu populasi dan biasanya secara mutlak ditentukan oleh
macam pengukuran yang digunakan untuk memantau proses tersebut. Pengukuran sering digunakan untuk mencerminkan pertambahan jumlah atau massa sel.
Faktor lingkungan baik biotik maupun abiotik sangat berpengaruh terhadap
pertumbuhan dan kelangsungan hidup mikroorganisme Hadiutomo 1988. Istilah
pertumbuhan umum digunakan untuk bakteri dan mikroorganisme lain dan biasanya mengacu pada perubahan di dalam hasil panen pertambahan jumlah dan
atau massa melebihi yang ada di dalam inokulum asalnya Pelczar dan Chan 2005.
Tahap awal kultivasi dilakukan dengan mempersiapkan media pertumbuhan untuk BAL. Pengukuran pertumbuhan perlu dilakukan untuk
mengetahui peningkatan densitas BAL yang ditunjukkan dengan nilai absorbansi. Hasil pengukuran densitas optik dan pH pada awal dan akhir kultivasi setelah
diinkubasi selama 24 jam pada setiap isolat yang dikerjakan dapat dilihat pada Tabel 1.
Tabel 1 Densitas optik dan pH dari tiga isolat BAL selama inkubasi 24 jam.
Isolat BAL Awal Kultivasi
Akhir Kultivasi
OD pH
OD pH
SK15 0,15
6 3,61
4
SK16 0,11
6 3,19
4,5 SK19
0,10 6
2,64 4,5
Pertumbuhan bakteri dapat diartikan sebagai penambahan jumlah sel bakteri, ukuran bakteri yang semakin besar atau substansi atau massa bakteri
dalam koloni semakin banyak Hadiutomo 1988. Densitas optik pada awal kultivasi akan mempengaruhi besarnya nilai absorbansi pada akhir kultivasi.
Berdasarkan Tabel 1 dapat dilihat bahwa nilai OD pada awal kultivasi untuk ketiga isolat berada pada kisaran 0,10-0,15. Pada akhir kultivasi nilai OD
mengalami kenaikan untuk ketiga isolat. Densitas optik isolat SK15, SK16 dan SK19 pada akhir kultivasi secara berturut-turut ialah 3,61; 3,19 dan 2,64.
Perubahan nilai OD ini menunjukkan adanya pertumbuhan sel BAL pada masing- masing isolat. Perbedaan nilai OD akhir kultivasi pada masing-masing isolat ini
dapat disebabkan karena respon isolat BAL yang berbeda-beda terhadap kesesuaian lingkungan pada media pertumbuhannya.
Faktor-faktor lingkungan yang mempengaruhi pertumbuhan bakteri asam laktat antara lain adalah suhu, nilai pH, kadar garam dan karbohidrat Fardiaz
1992. Secara umum, kebutuhan mikroorganisme untuk pertumbuhan dapat dibedakan menjadi dua kategori, yakni kebutuhan fisik dan kebutuhan kimiawi.
Aspek-aspek fisik dapat mencakup suhu, pH, dan tekanan osmotik, sedangkan kebutuhan kimiawi meliputi air, sumber karbon, nitrogen oksigen, mineral-
mineral dan faktor penumbuh Pelczar dan Chan 2005. Selain itu, besarnya nilai absorbansi pada awal kultivasi juga akan mempengaruhi besarnya nilai absorbansi
pada akhir kultivasi, dimana pada awal kultivasi isolat SK15 memiliki nilai OD yang lebih tinggi. Hal tersebut akan mempengaruhi pertumbuhan BAL, sehingga
isolat SK15 memiliki nilai OD akhir kultivasi terbesar dibandingkan dengan isolat SK16 dan SK19. Perbedaan nilai OD dan pH pada akhir kultivasi untuk
ketiga isolat BAL juga diduga karena masing-masing isolat BAL tersebut menghasilkan senyawa antibakteri yang berbeda-beda kandungannya.
Derajat keasaman atau pH digunakan untuk menyatakan tingkat keasaman atau kebasaan yang dimiliki oleh suatu larutan. Tingkat keasaman dipengaruhi
adanya konsentrasi ion hidrogen H+ dalam pelarut air. Pengukuran pH dilakukan secara duplo pada masing-masing isolat BAL pada awal kultivasi dan
akhir kultivasi setelah diinkubasi selama 24 jam. Tingkat keasaman isolat SK15, SK16 dan SK19 pada awal kultivasi memiliki nilai pH yang sama,
yakni 6 dan pada akhir kultivasi nilai pH pada ketiga isolat berada pada kisaran 4- 4,5. Berdasarkan Tabel 1 dapat disimpulkan bahwa nilai pH untuk ketiga isolat
mengalami penurunan pada akhir kultivasi, sedangkan nilai OD mengalami peningkatan. Meningkatnya densitas BAL selama kultivasi, maka akan
meningkatkan pula aktivitas metabolismenya. Hasil metabolisme ini sebagian besar berupa asam laktat yang mampu menurunkan nilai pH pada lingkungan
pertumbuhannya. Asam laktat dapat bersifat mengawetkan bahan pangan Winarno 1994.
Efek bakterisidal dari asam laktat berkaitan dengan penurunan pH lingkungan menjadi 3 sampai 4,5 sehingga pertumbuhan bakteri lain termasuk bakteri
pembusuk akan terhambat Amin dan Leksono 2001 diacu dalam Rostini 2007. Bakteri asam laktat menghasilkan senyawa-senyawa tertentu selain asam laktat
dan asam asetat asam organik, senyawa-senyawa tersebut diantaranya H
2
O
2
, diasetil dan bakteriosin dalam jumlah yang relatif sedikit dibandingkan dengan
produksi asam organik Daeschel 1983 diacu dalam Kusmiati dan Malik 2002. Nilai pH medium merupakan salah satu parameter penting yang dapat
mempengaruhi pertumbuhan mikroba. Bakteri asam laktat merupakan mikroba yang mempunyai kemampuan dalam menciptakan respon terhadap keasaman
medium Lunggani 2007.
4.1.2 Uji aktivitas senyawa antibakteri
