Penetapan Kadar Pirasetam Tablet dengan Nama Generik dan Nama Dagang secara Kromatografi Cair Kinerja Tinggi (KCKT)

Lampiran 1. Kromatogram Kurva kalibrasi Pirasetam

Retention time Area Height Tailing factor

2,396 250,6911 40,8415 1,773

Gambar 1. Kromatogram pirasetam (5 µg/ml), C-18, asetonitril-buffer posfat pH 6 (30:70), laju alir 1,0 ml/menit.

Retention time Area Height Tailing factor

2,403 372,5730 66,8235 1,328

Gambar 2. Kromatogram pirasetam (10 µg/ml), C-18, asetonitril-buffer posfat pH 6 (30:70), laju alir 1,0 ml/menit.

Retention time Area Height Tailing factor

2,404 765,0109 134,7027 1,362

Gambar 3. Kromatogram pirasetam (20 µg/ml), C-18, asetonitril-buffer posfat pH 6 (30:70), laju alir 1,0 ml/menit.

Lampiran 1 (lanjutan)

Retention time Area Height Tailing factor

2,405 1036,3989 188,5217 1,342

Gambar 4. Kromatogram pirasetam (30 µg/ml), C-18, asetonitril-buffer posfat pH 6 (30:70), laju alir 1,0 ml/menit.

Retention time Area Height Tailing factor

2,410 1750,4458 318,1450 1,360

Gambar 5. Kromatogram pirasetam (50 µg/ml), C-18, asetonitril-buffer posfat pH 6 (30:70), laju alir 1,0 ml/menit.

Lampiran 2. Perhitungan Persamaan Regresi Pirasetam Baku

No Konsentrasi Retention time Area Height Tailing

1 5 2,396 237,73371 40,841 1,773

2 10 2,403 383,12602 68,250 1,328

3 20 2,404 748,99799 134,702 1,362

4 30 2,405 1058,90812 188,521 1,342

5 50 2,410 1778,89493 318,145 1,360

Catatan: Luas area merupakan rata-rata dari 3 × pengulangan. No

Konsentrasi (µg/ml)

(X)

Luas Area

(Y) X

2

Y2 XY

1 5 237,73371 25 56517,31687 1188,66855

2 10 383,12602 100 146785,5472 3831,2602

3 20 748,99799 400 560997,989 14979,9598

4 30 1058,90812 900 1121286,407 31767,2436

5 50 1778,89493 2500 3164467,172 88944,7465

∑ 115 4207,66077 3925 5050054,432 140711,8787

X 23 841,532154 785 1010010,886 28142,37573

b aX Y 



   

 

X

 

X n n Y X XY a / / 2 2  

     



  





3925

  

115 /5

5 / 66077 , 4207 115 8787 , 140711 2    a 1280 6809 , 43935

 34,3247

aX Y

b  841,53215



34,3247

 

23 52,0640

Maka persamaan regresinya adalah Y34,3247X 52,0640



   

 







X X n





 

Y

 

Y n



n Y X XY r / / / 2 2 2

2     

     



  





  



3925 115 /5







5050054,432

 

4207,66077



/5



5 / 66077 , 4207 115 8787 , 140711 2 2 _    r 5748 , 43951 6809 , 43935  99963 , 0  r

Lampiran 3. Perhitungan Batas Deteksi dan Batas Kuantitasi Pirasetam Persamaan regresi Y34,3247X52,0640

No Konsentrasi (µg/ml) (X)

Luas area (Y)

Luas area regresi

(Yi)

Y-Yi (Y-Yi)2

1 0 0 52,0640 -52,0640 2710,6600

2 5 237,73371 223,6875 14,04621 197,2960

3 10 383,12602 395,311 -12,1849 148,4737

4 20 748,99799 738,558 10,4399 108,9933

5 30 1058,90812 1081,805 -22,8968 524,2671

6 50 1778,89493 1768,299 10,5959 112,2737

∑(Y-Yi)2 3801,9638

2

)

(

2









n

Yi

Y

aku

SimpanganB

Slope x Sy x si

BatasDetek 3 /

3247 , 34 8300 , 30 3x 

= 2,6945 µg/ml

Slope x Sy x itasi

Bataskuant 10 /

3247 , 34 8300 , 30 10x 

= 8,9818 µg/ml

8300 , 380 2 6 ) 9638 , 3801 ( 2   

Lampiran 4. Kromatogram Hasil Penyuntikan Pirasetam Generik PT. A

Retention time Area Height Tailing factor

2,397 738,9414 157,9071 1,737

Gambar 6. Kromatogram Pirasetam Generik PT. A Perhitungan Kadar Pirasetam Generik PT. A Berat 20 tablet (400 mg) = 8547,0 mg

Berat serbuk yang ditimbang = 10,68375 mg Berat rata – rata = 427,35 mg

Y = 34,3247X + 52,0640

Y = luas area, X = konsentrasi (µg/ml) Luas area = 738,94147

X = 20,0111

34,3247 52,0640

738,94147 _

Konsentrasi pirasetam dalam larutan yang diencerkan 10 kali yaitu 20,0111  10 µg/ml = 200,111 µg/ml

Kadar pirasetam dalam labu awal (50 ml) yaitu 200,111 µg/ml x 50 ml = 10005,55 µg = 10,00555 mg

Kadar perolehan per tablet = x 427,35mg 400,22mg mg

10,68375 mg

Lampiran 4 (lanjutan)

% Kadar = x 99,5% 99,55% mg 400 mg 400,22 _

Analisis data statistik untuk mencari kadar sebenarnya dari penyuntikan larutan pirasetam secara KCKT

No Area (Y) % Kadar sampel (X)



X  X





X X



2

1 738,9414 99,55 -0,22 0,048

2 746,4126 100,63 0,86 0,739

3 734,1173 98,85 -0,92 0,846

4 751,6246 101,39 0,62 0,384

5 730,3542 98,32 -1,45 2,102

6 748,4268 100,93 1,16 1,345

X = 598,67

∑





2

X

X  = 5,4669

X _{= 99,77}

1 ) ( 2   



n X X SD 5 5,4669

 = 1,0456

Pada tingkat kepercayaan 99% dengan nilai α = 0,01, dk = n – 1 = 6 – 1 = 5 Diperoleh t tabel = 4,0321. Data ditolak jika t hitung≥ t tabel.

t hitung =

n SD X X / 

t hitung (1) =

6 / 0456 , 1 0,22

- _{= 0,5154}

t hitung (2) =

6 / 0456 , 1

0,86 _{= 2,0149}

t hitung (3) =

6 / 0456 , 1 0,92

- _{= 2,1555}

t hitung (4) =

6 / 0456 , 1

Lampiran 4 (lanjutan) t hitung (5) =

6 / 0456 , 1

1,45

- _{= 3,3973}

t hitung (6) =

6 / 0456 , 1

1,16 _{= 2,7179}

Semua data diterima, maka kadar sebenarnya terletak antara µ = X (t –1/2α) dk ×

µ = 99,7783 4,0321 × 6 1,0456

Lampiran 5. Kromatogram Hasil Penyuntikan Pirasetam Generik PT. B

Retention time Area Height Tailing factor

2,414 755,3684 147,6738 1,641

Gambar 7. Kromatogram Pirasetam Generik PT. B. Perhitungan Kadar Pirasetam Generik PT. B Berat 20 tablet (400 mg) = 8188,2 mg

Berat serbuk yang ditimbang = 10,2352 mg Berat rata – rata = 409,41 mg

Y = 34,3247X + 52,0640

Y = luas area, X = konsentrasi (µg/ml) Luas area = 755,36847

X = 20,4897

34,3247 52,0640

755,36847 _

Konsentrasi pirasetam dalam larutan yang diencerkan 10 kali yaitu 20,4897  10 µg/ml = 204,897 µg/ml

Kadar pirasetam dalam labu awal (50 ml) yaitu 204,897 µg/ml x 50 ml = 10244,8 µg = 10,2448 mg

Kadar perolehan per tablet = x 409,41mg 409,7940mg mg

10,2352 mg

Lampiran 5 (lanjutan)

% Kadar = x 99,5% 100,93% mg

400

mg

409,7940 _

Analisis data statistik untuk mencari kadar sebenarnya dari penyuntikan larutan pirasetam secara KCKT

No Area (Y) % Kadar sampel (X)



X X





X X



2

1 755,3684 100,93 -0,34 0,119

2 761,1046 102,76 1,48 2,205

3 748,5200 100,94 -0,33 0,112

4 730,5324 98,34 -2,93 8,584

5 758,7138 102,42 1,14 1,311

6 757,7309 102,27 -0,99 0,990

X = 607,65

∑





2

X

X  = 13,237

X = 101,27

1 ) ( 2   



n X X SD 5 13,237

 = 1,6270

Pada tingkat kepercayaan 99% dengan nilai α = 0,01, dk = n – 1 = 6 – 1 = 5 Diperoleh t tabel = 4,0321. Data ditolak jika t hitung≥ t tabel.

t hitung =

n SD X X / 

t hitung (1) =

6 / 627 , 1 0,34

- _{= 0,519}

t hitung (2) =

6 / 627 , 1

1,48 _{= 2,235}

t hitung (3) =

6 / 627 , 1 0,33

- _{= 0,504}

t hitung (4) =

6 / 627 , 1 2,93

Lampiran 5 (lanjutan) t hitung (5) =

6 / 627 , 1

1,14 _{= 1,723}

t hitung (6) =

6 / 627 , 1

0,99

- _{= 1,498}

Semua data diterima, maka kadar sebenarnya terletak antara µ = X (t –1/2α) dk ×

µ = 101,275 4,0321 × 6 1,627

Lampiran 6. Kromatogram Hasil Penyuntikan Pirasetam Merek Latropil PT. C

Retention time Area Height Tailing factor

2,400 757,6466 151,4258 1,759

Gambar 8. Kromatogram Pirasetam Merek Latropil PT. C Perhitungan Kadar Pirasetam Merek Latropil PT. C Berat 20 tablet (1200 mg) = 27764,2 mg

Berat serbuk yang ditimbang = 11,568 mg Berat rata – rata = 1388,2 mg

Y = 34,3247X + 52,0640

Y = luas area, X = konsentrasi (µg/ml) Luas area = 757,64661

X = 20,5561

34,3247 52,0640

757,64661 _

Konsentrasi pirasetam dalam larutan yang diencerkan 10 kali yaitu 20,5561  10 µg/ml = 205,561 µg/ml

Kadar pirasetam dalam labu awal (50 ml) yaitu 205,561 µg/ml x 50 ml = 10278,0 µg = 10,2780 mg

Kadar perolehan per tablet = x 1388,2mg 1233,3955mg mg

11,568 10,2780mg

Lampiran 6 (lanjutan)

% Kadar = x 99,5% 102,26% mg 1200 g 1233,3955m 

Analisis data statistik untuk mencari kadar sebenarnya dari penyuntikan larutan pirasetam secara KCKT

No Area (Y) % Kadar sampel (X)



X X





X X



2

1 757,6466 102,26 0,21 0,044

2 752,3772 103,16 1,11 1,232

3 750,8213 101,27 -0,78 0,608

4 758,9073 102,45 0,39 0,153

5 752,3596 101,50 -0,55 0,311

6 753,8175 101,71 -0,34 0,121

X = 612,35

∑





2

X

X  = 2,546

X _{= 101,058}

1 ) ( 2   



n X X SD 5 2,546

 = 0,7135

Pada tingkat kepercayaan 99% dengan nilai α = 0,01, dk = n – 1 = 6 – 1 = 5 Diperoleh t tabel = 4,0321. Data ditolak jika t hitung≥ t tabel.

t hitung =

n SD X X / 

t hitung (1) =

6 / 713 , 0

0,21 _{= 0,720}

t hitung (2) =

6 / 713 , 0

1,11 _{= 3,810}

t hitung (3) =

6 / 713 , 0 0,78

- _{= 2,677}

t hitung (4) =

6 / 713 , 0

Lampiran 6 (lanjutan) t hitung (5) =

6 / 713 , 0

0,55

- _{= 1,915}

t hitung (6) =

6 / 713 , 0

0,34

- _{= 1,194}

Semua data diterima, maka kadar sebenarnya terletak antara µ = X (t –1/2α) dk ×

µ = 101,058 4,0321 × 6 0,713

Lampiran 7. Kromatogram Hasil Penyuntikan Pirasetam Merek Neurotam PT. D

Retention time Area Height Tailing factor

2,397 760,8609 140,9730 1,707

Gambar 9. Kromatogram Pirasetam Merek Neurotam PT. D Perhitungan Kadar Pirasetam Merek Neurotam PT. D Berat 20 tablet (400 mg) = 8132,0 mg

Berat serbuk yang ditimbang = 10,165mg Berat rata – rata = 406,6 mg

Y = 34,3247X + 52,0640

Y = luas area, X = konsentrasi (µg/ml) Luas area = 760,86090

X = 20,6497

34,3247 52,0640

-760,86090 _

Konsentrasi pirasetam dalam larutan yang diencerkan 10 kali yaitu 20,6497 10 µg/ml = 206,497 µg/ml

Kadar pirasetam dalam labu awal (50 ml) yaitu 206,497 µg/ml x 50 ml = 10324,85 µg = 10,3248 mg

Kadar perolehan per tablet = x 406,6mg 412,992mg mg

10,165 mg 10,3248

Lampiran 7 (lanjutan)

% Kadar = x 99,5% 102,73% mg

400 mg

412,992 _

Analisis data statistik untuk mencari kadar sebenarnya dari penyuntikan larutan pirasetam secara KCKT

No Area (Y) % Kadar sampel (X)



X X





X X



2

1 760,8609 102,73 0,98 0,960

2 752,4276 101,50 -0,25 0,062

3 748,8974 100,99 -0,76 0,577

4 750,6460 101,25 -0,50 0,256

5 753,3891 101,64 -0,11 0,013

6 758,7958 102,43 0,67 0,454

X = 610,54

∑





2

X

X  = 2,444

X _{= 101,756}

1 ) ( 2   



n X X SD 5 2,444

 = 0,699

Pada tingkat kepercayaan 99% dengan nilai α = 0,01, dk = n – 1 = 6 – 1 = 5 Diperoleh t tabel = 4,0321. Data ditolak jika t hitung≥ t tabel.

t hitung =

n SD X X / 

t hitung (1) =

6 / 699 , 0

0,98 _{= 3,438}

t hitung (2) =

6 / 699 , 0 0,25

- _{= 0,877}

t hitung (3) =

6 / 699 , 0

0,76 _{= 2,667}

t hitung (4) =

6 / 699 , 0 0,50

Lampiran 7 (lanjutan) t hitung (5) =

6 / 699 , 0

0,11

- _{= 0,407}

t hitung (6) =

6 / 699 , 0

0,67 _{= 2,364}

Semua data diterima, maka kadar sebenarnya terletak antara µ = X (t –1/2α) dk ×

µ = 101,7566 4,0321 × 6 0,2854

Lampiran 8. Kromatogram Hasil Penyuntikan Pirasetam Merek Resibron PT. E

Retention time Area Height Tailing factor

2,618 733,0193 129,7992 1,474

Gambar 10. Kromatogram Pirasetam Merek Resibron PT. E Perhitungan Kadar Pirasetam Merek Resibron PT. E Berat 20 tablet (800 mg) = 16902 mg

Berat serbuk yang ditimbang = 10,564 mg Berat rata – rata = 845,13 mg

Y = 34,3247X + 52,0640

Y = luas area, X = konsentrasi (µg/ml) Luas area = 733,01935

X = 19,8386

34,3247 52,0640

-733,01935 _

Konsentrasi pirasetam dalam larutan yang diencerkan 10 kali yaitu 19,8386  10 µg/ml = 198,386 µg/ml

Kadar pirasetam dalam labu awal (50 ml) yaitu 198,386 µg/ml x 50 ml = 9919,3 µg = 9,9193 mg

Kadar perolehan per tablet = x 845,13mg 793,5533mg mg

10,564 mg 9,9193

Lampiran 8 (lanjutan)

% Kadar = x 99,5% 98,70% mg

800 mg

793,5533 _

Analisis data statistik untuk mencari kadar sebenarnya dari penyuntikan larutan pirasetam secara KCKT

No Area (Y) % Kadar sampel (X)



X X





X X



2

1 733,0193 98,70 -1,74 3,027

2 728,3096 98,01 -2,43 5,904

3 752,5560 101,53 1,08 1,185

4 760,7910 102,72 2,27 5,193

5 743,8903 100,27 -0,17 0,029

6 751,8465 101,42 0,98 0,960

X = 602,65

∑





2

X

X  =16,3011

X _{= 100,441}

1 ) ( 2   



n X X SD 5 16,301

 = 1,8066

Pada tingkat kepercayaan 99% dengan nilai α = 0,01, dk = n – 1 = 6 – 1 = 5 Diperoleh t tabel = 4,0321. Data ditolak jika t hitung≥ t tabel.

t hitung =

n SD X X / 

t hitung (1) =

6 / 1,806

1,74

- _{= 2,368}

t hitung (2) =

6 / 1,806

2,43

- _{= 3,294}

t hitung (3) =

6 / 1,806

1,08 _{= 1,476}

t hitung (4) =

6 / 806 , 1

Lampiran 8 (lanjutan) t hitung (5) =

6 / 806 , 1

0,171

- _{= 0,231}

t hitung (6) =

6 / 806 , 1

0,98 _{= 1,332}

Semua data diterima, maka kadar sebenarnya terletak antara µ = X (t –1/2α) dk ×

µ = 100,441 4,0321 × 6 1,8066

Lampiran 9. Kromatogram Hasil Penyuntikan Pirasetam Merek Revolan PT. F

Retention time Area Height Tailing factor

2,570 761,2841 133,6477 1,062

Gambar 11. Kromatogram Pirasetam Merek Revolan PT. F Perhitungan Kadar Pirasetam Merek Revolan PT. F Berat 20 tablet (400 mg) = 10695,4 mg

Berat serbuk yang ditimbang = 13,369 mg Berat rata – rata = 534,77 mg

Y = 34,3247X + 52,0640

Y = luas area, X = konsentrasi (µg/ml) Luas area = 761,28418

X = _20,6620

34,3247 52,0640

761,28418 _

Konsentrasi pirasetam dalam larutan yang diencerkan 10 kali yaitu 20,6620  10 µg/ml = 206,620 µg/ml

Kadar pirasetam dalam labu awal (50 ml) yaitu 206,620 µg/ml x 50 ml = 10331,0 µg = 10,3310 mg

Kadar perolehan per tablet = x 534,77mg 413,2477mg mg

13,369 mg 10,3310

Lampiran 9 (lanjutan)

% Kadar = x 99,5% 102,80% mg

400 mg 413,2477



Analisis data statistik untuk mencari kadar sebenarnya dari penyuntikan larutan pirasetam secara KCKT

No Area (Y) % Kadar sampel (X)



X X





X X



2

1 761,2841 102,80 1,47 2,160

2 758,5580 102,40 1,07 1,144

3 741,8429 99,97 -1,35 1,831

4 741,5247 99,93 -1,39 1,941

5 755,8782 102,01 0,68 0,462

6 747,7457 100,83 -0,49 0,243

X = 607,94

∑





2

X

X  = 7,784

X _{= 101,323}

1 ) ( 2   



n X X SD 5 7,784

 = 1,247

Pada tingkat kepercayaan 99% dengan nilai α = 0,01, dk = n – 1 = 6 – 1 = 5 Diperoleh t tabel = 4,0321. Data ditolak jika t hitung≥ t tabel.

t hitung =

n SD X X / 

t hitung (1) =

6 / 1,247

1,47 _{= 2,886}

t hitung (2) =

6 / 1,247

1,07 _{= 2,100}

t hitung (3) =

6 / 1,247

1,35

- _{= 2,650}

t hitung (4) =

6 / 1,247

1,39

Lampiran 9 (lanjutan) t hitung (5) =

6 / 1,247

0,68 _{= 1,335}

t hitung (6) =

6 / 1,247

0,49

- _{= 0,962}

Semua data diterima, maka kadar sebenarnya terletak antara µ = X (t –1/2α) dk ×

µ = 101,3233 4,0321 × 6 1,247

Lampiran 10. Hasil Pengolahan Data Penetapan Kadar Pirasetam No Nama Pabrik Luas Area Kadar Perolehan/

Tablet (mg)

Kadar etiket

(mg) % kadar

1

PT. A (Pirasetam

generik)

738,9414 400,222

400

99,55

2 746,4126 404,576 100,63

3 734,1173 397,412 98,85

4 751,6246 407,612 101,39

5 730,3542 395,218 98,32

6 748,4268 405,750 100,93

1

PT. B (Pirasetam

generik)

755,3684 409,794

400

100,93

2 761,1046 413,138 102,76

3 748,5200 405,805 100,94

4 730,5324 395,340 98,34

5 758,7137 411,746 102,42

6 757,7309 411,170 102,27

1

PT. C (Latropil)

757,6466 1233,3955

1200

102,26

2 752,3772 1244,1912 103,16

3 750,8213 1221,4671 101,27

4 758,9073 1235,6036 102,45

5 752,3596 1224,1552 101,50

6 753,8175 1226,7713 101,71

1

PT. D (Neurotam)

760,8609 412,992

400

102,73

2 752,4276 408,080 101,50

3 748,8974 406,024 100,99

4 750,6460 407,040 101,25

5 753,3891 408,640 101,64

6 758,7958 411,788 102,43

1

PT. E (Resibron)

733,0193 793,553

800

98,70

2 728,3096 788,653 98,01

3 752,5560 816,321 101,53

4 760,7910 825,913 102,72

5 743,8903 806,217 100,27

6 751,8465 815,4896 101,42

1

PT. F (Revolan)

761,2841 413,247

400

102,80

2 758,5580 411,659 102,40

3 741,8429 401,919 99,97

4 741,5247 401,735 99,93

5 755,8782 410,956 102,01

Lampiran 11. Kromatogram Hasil Penyuntikan dari Pirasetam Tablet dan Bahan Baku pada Persen Perolehan Kembali pada Rentang 80%, 100%, dan 120%.

Retention time Area Height Tailing factor

2,312 5221,3538 2325,7736 1,832

Gambar 12. Kromatogram recovery pada rentang 80% tanpa penambahan baku

Retention time Area Height Tailing factor

2,261 11741,5778 2542,3581 1,926

Lampiran 11 (lanjutan)

Retention time Area Height Tailing Factor

2,264 6638,7171 2483,6701 1,854

Gambar 14. Kromatogram recovery pada rentang 100% tanpa penambahan baku

Retention time Area Height Tailing Factor

2,265 14914,7962 2613,5915 1,947

Gambar 15. Kromatogram recovery pada rentang 100% setelah penambahan baku

Lampiran 11 (lanjutan)

Retention time Area Height Tailing Factor

2,741 9077,4973 2404,5341 1,505

Gambar 16. Kromatogram recovery pada rentang 120% tanpa penambahan baku

Retention time Area Height Tailing Factor

2,263 19202,0472 2655,3957 1,998

Gambar 17. Kromatogram recovery pada rentang 120% setelah penambahan baku

Lampiran 12. Perhitungan Persen Perolehan Kembali Berat 20 tablet = 8547,0 mg

Kandungan zat berkhasiat = 400 mg Perolehan 80%

Pirasetam = 400mg 100

80 _

= 320 mg

Analit 70% = 320 100

70 _

mg = 224 mg

Sampel yang ditimbang = 8547,0mg

mg 400 20

mg

224 _

 = 239,3 mg

Baku 30% = 320mg 100

30 _

= 96 mg Perolehan 100%

Pirasetam= 400mg 100

100_

= 400 mg

Analit 70% = 400mg 100

70 _

= 280 mg

Sampel yang ditimbang = 8547,0mg

mg 400 20

mg

280 _

 = 299,1 mg

Baku 30% = 400mg 100

30 _

= 120 mg Perolehan 120%

Pirasetam = 400mg 100

120_

= 480 mg

Analit 70% = 480mg 100

70 _

Lampiran 12 (lanjutan)

Sampel yang ditimbang = 8547,0mg

mg 400 20 mg 336 _

 = 358,97 mg

Baku 30% = 480mg 100

30 _

= 144 mg

Persen Perolehan Kembali pada Rentang 80% Sebelum Penambahan Baku Y = 34,3247 X + 52,0640

Y = Luas area, X = Konsentrasi (µg/ml) Luas area = 5221,35388

X= 150,5997

34,3247 2,0640 5 5221,35388 _

Konsentrasi pirasetam dalam larutan yang diencerkan 10 kali, yaitu 150,5997 x 10 µg/ml = 1505,997 µg/ml

Kadar pirasetam dalam labu awal (50 ml) yaitu 1505,997 µg/ml x 50 ml = 75299,8 µg = 75,2998 mg

Persen Perolehan Kembali pada Rentang 80% Setelah Penambahan Baku Y = 34,3247 X + 52,0640

Y = Luas area, X = Konsentrasi (µ g/ml) Luas area = 11741,57788

X= 340,5569

34,3247 2,0640 5 8 11741,5778 _

Konsentrasi pirasetam dalam larutan yang diencerkan 10 kali, yaitu 340,5569 x 10 µg/ml = 3405,569 µg/ml

Lampiran 12 (lanjutan)

3405,569 µg/ml x 50 ml = 170278,4 µg = 170,2784 mg

% 100 ditambah yang baku jumlah baku) tanpa konsentasi ( baku) si (konsentra cov

%re ery   x

% Recovery 1 = x 100% 98,9360%

mg 6 9 mg 5,2998 7 -mg 70,2784 1 

% Recovery 2= x 100% 97,6257%

mg 6 9 mg 6,7512 7 -mg 4719 , 70 1 1 _

% Recovery 3 = x 100% 99,5742%

mg 6 9 mg 8,6904 7 -mg 72,3425 1 

Persen Perolehan kembali pada rentang 100% sebelum penambahan baku Y = 34,3247 X + 52,0640

Y = Luas area, X = Konsentrasi (µg/ml) Luas area = 6638,71716

X= 191,8925

34,3247 2,0640 5 6638,71716 

Konsentrasi pirasetam dalam larutan yang diencerkan 10 kali, yaitu : 191,8925 x 10 µg/ml = 1918,925 µg/ml

Kadar pirasetam dalam labu awal (50 ml) yaitu : 1918,925 µg/ml x 50 ml = 95946,2 µg = 95,9462 mg

Persen Perolehan kembali pada rentang 100% setelah penambahan baku Y = 34,3247 X + 52,0640

Y = Luas area, X = Konsentrasi (µg/ml) Luas area = 14914,79626

Lampiran 12 (lanjutan)

X= 433,0039

34,3247 2,0640 5 -79626 , 4914 1 _

Konsentrasi pirasetam dalam larutan yang diencerkan 10 kali, yaitu : 433,0039 x 10 µg/ml = 4330,039 µg/ml

Kadar pirasetam dalam labu awal (50 ml) yaitu : 4330,039 µg/ml x 50 ml = 216501,9 µg = 216,5019 mg

% 100 ditambah yang baku jumlah baku) tanpa konsentasi ( baku) si (konsentra cov

%re ery   x

% Recovery 1 = x 100% 100,4630%

mg 20 1 mg 5,94625 9 -mg 16,5019 2 

% Recovery 2= x 100% 100,4436%

mg 20 1 mg 7,53155 9 -mg 18,0639 2 

% Recovery 3 = x 100% 99,6155%

mg 120 mg 7,90045 9 -mg 17,4390 2 

Persen Perolehan Kembali pada Rentang 120% Sebelum Penambahan Baku Y = 34,3247 X + 52,0640

Y = Luas area, X = Konsentrasi (µg/ml) Luas area = 9077,49738

X= 262,9428

34,3247 2,0640 5 -49738 , 9077 _

Konsentrasi pirasetam dalam larutan yang diencerkan 10 kali, yaitu : 262,9428 x 10 µg/ml = 2629,428 µg/ml

Lampiran 12 (lanjutan)

Kadar pirasetam dalam labu awal (50 ml) yaitu : 2629,428 µg/ml x 50 ml = 131471,4 µg = 131,4714 mg

Persen Perolehan kembali pada rentang 120% setelah penambahan baku Y = 34,3247 X + 52,0640

Y = Luas area, X = Konsentrasi (µg/ml) Luas area = 19202,04724

X= 557,9067

34,3247 2,0640 5 -04724 , 19202 _

Konsentrasi pirasetam dalam larutan yang diencerkan 10 kali, yaitu : 557,9067 x 10 µg/ml = 5579,067 µg/ml

Kadar pirasetam dalam labu awal (50 ml) yaitu : 5579,067 µg/ml x 50 ml = 278953,3 µg = 278,9533 mg

% 100 ditambah yang baku jumlah baku) tanpa konsentasi ( baku) si (konsentra cov

%re ery   x

% Recovery 1 = x 100% 102,4179%

mg 4 4 1 mg 31,4714 1 -mg 78,9533 2 

% Recovery 2= x 100% 102,3320%

mg 44 1 mg 27,860 1 -mg 75,2189 2 

% Recovery 3 = x 100% 102,1884%

mg 144 mg 30,3814 1 -mg 77,5328 2 

Lampiran 13. Hasil Pengolahan Data Persen Perolehan Kembali Pada Rentang 80%, 100%, dan 120%

Data hasil penyuntikan pirasetam sebelum dan sesudah penambahan analit.

No Konsentrasi (%) Kadar(mg) Baku yang ditambahkan (mg) % recovery Sebelum penambahan analit Setelah penambahan analit 1 80%

75,2998 170,2784

96

98,93

2 76,7512 170,4719 97,62

3 78,6904 172,3420 99,57

1

100%

95,9462 216,5019

120

100,46

2 97,5315 218,0639 100,44

3 97,9004 217,4390 99,61

1

120%

131,4714 278,9533

144

102,41

2 127,8607 275,2189 102,33

3 130,3814 277,5328 102,18

Analisis Data Statistik Persen Perolehan Kembali Pirasetam

No X ̅ ̅

1 98,93 -1,4635 2,1418

2 97,62 -2,7738 7,6930

3 99,57 -0,8253 0,6811

4 100,46 0,0635 0,00403

5 100,44 0,0441 0,00194

6 99,61 -0,7840 0,6146

7 102,41 2,0184 4,0739

8 102,33 1,9325 3,7345

9 102,18 1,7889 3,2001

∑ 903,59

∑ ̅ 2

=22,1448 100,39 = √ ̅ = √ = 1,6637 =

̅x 100% =

Lampiran 15. Alat yang Digunakan dalam Penelitian

Gambar 18. Alat KCKT

Gambar 19. Sonikator

Gambar 20. Syringe KCKT Agilent 50 µl

DAFTAR PUSTAKA

Ansel, H.C. (1999). Pengantar Bentuk Sedimen Farmasi, Edisi Keempat. Jakarta : UI Press. Halaman 35.

Arayne, M.S., Sultana, N., Siddiqui, F.A., Mirza, A.Z., Qureshi,F., dan Zuberi, M.H. (2010). Simultaneous determination of Piracetam and its four impurities by RP-HPLC with UV detection. Journal of Chromatographic Science. (48): 589.

Barkat, K., Ahmad, M., Minhas,M.U., Malik, M.Z., dan Sohail, M. (2014). Development of a simple Chromatorgaphic Method for the Determination of Piracetam in Human Plasma and Its Pharmakokinetic Evaluation. Pakistan : Faculty of Pharmacy and Alternative Medicines. Berridge, J.C. (1985). Techniques For The Automated Optimization of HPLC

Separations. Britain : John wiley & Sons Ltd. Halaman 1-4.

De Lux Putra, E. (2007). Dasar-Dasar Kromatografi Gas & Kromatografi Cair Kinerja Tinggi.Medan: Fakultas Farmasi USU. Halaman 82-91.

Ditjen. POM. (1995). Farmakope Indonesia Edisi ke IV. Jakarta: Departemen Kesehatan Republik Indonesia. Halaman 1009.

Ditjen. BKAK. (2014). Farmakope Indonesia Edisi ke V. Jakarta: Departemen Kesehatan RI. Halaman 1023.

Epshtein, N.A. (2004). Validation of HPLC Techniques for Pharmaceutical Analysis. Pharmaceutical Chemistry Journal.38(4): 212 – 228.

Gandjar, I.G., dan Rohman, A. (2009). Kimia Farmasi Analisis. Yogyakarta: Pustaka Pelajar. Halaman 378-381, 385-388, 393-394.

Gouliaev, A.H., dan Senning, A. (1994). Piracetam and Other Structurally Related Nootropics. Brain Research Reviews 19 (1994) 180-222

Gritter, R.J., Bobbit, J.M., dan Schwarting, A.E. (1985). Introduction of Chromatography. Penerjemah: Kosasih Padmawinata. (1978). Pengantar Kromatografi. Edisi III. Bandung: Penerbit ITB. Halaman 197.

Harmita. (2004). Petunjuk Pelaksanaan Validasi Metode dan Cara Perhitungannya. Majalah Ilmu Kefarmasian. 1(3): 117-135.

Johnson, E.L., dan Stevenson, R. (1978). Basic Liquid Chromatography. Terjemahan Kosasih Padmawinata (1991). Dasar Kromatografi Cair. Bandung: Penerbit ITB. Halaman 4-8.

Lindsay, S. (1987). High Performance Liquid Chromatography. London: John Wiley & Sons. Halaman 3.

Maslarska,V. (2013). Analytical Method Development and Validation for Piracetam in Pharmaceutical Formulation. Pharmacia, 60 (4) 1-5.

Meyer, V.R. (2010). Practical High-Performance Liquid Chromatography. Edisi ke-5. Chichester:John Wiley and Sons Inc. Halaman 19-42.

Munson, J.W. (1984). Pharmaceutical Analysis Modern Methods. Penerjemah: Harjana. (1978). Analisis Farmasi Metode Modern. Surabaya: Airlanggga University Press. Halaman 14.

Puspitasari, I. (2006). Cerdas Mengenali Penyakit dan Obat. Yogyakarta: Bentang Pustaka. Halaman 4-5.

Rohman, A. (2009). Kromatografi untuk Analisis Obat. Edisi Pertama. Yogyakarta: Graha Ilmu. Halaman 1-2.

Satiadarma, K., Mulja, M., Tjahjono, D.H., dan Kartasasmita, R.E. (2004). Asas Pengembangan Prosedur Analisis. Edisi Pertama. Surabaya: Airlangga University Press. Halaman 201.

Sudjana. (2001). Metoda Statistika. Bandung: Penerbit Tarsito. Halaman 168 Syamsuni, H.A. (2006). Ilmu Resep. Jakarta : Penerbit Buku Kedokteran EGC.

Halaman 14.

Tan, H.T., dan Rahardja, K. (2007). Obat-Obat Penting Khasiat, Penggunaan, dan Efek-Efek Sampingnya. Edisi Keenam. Jakarta: PT. Elex Media Komputindo. Halaman 530.

Torbeck, L.D. (2009). Statistical Solution: Square Root of (N) One Sampling Plan. Pharmaceutical Technology. 33: 128.

Watson, D.G. (2005). Pharmaceutical Analysis. Penerjemah : Winny, R., dan Syarief. (2007). Analisis Farmasi : Buku Ajar Untuk Mahasiswa Farmasi dan Praktisi Kimia Farmasi. Jakarta: EGC. Halaman 325.

Widjajanti, V.N. (2002). Obat-obatan. Yogyakarta: Penerbit Kanisius. Halaman 28.

BAB III

METODE PENELITIAN

3.1 Waktu dan Tempat Penelitian

Penelitian dilakukan di laboratorium PT. Mutifa Industri Farmasi pada bulan April - Mei 2015

3.2 Alat-alat

Alat-alat yang digunakan dalam penelitian ini adalah seperangkat instrumen KCKT lengkap (Agilent 1100) dengan pompa (G4290C), injektor (G4290C), kolom oven (G4290C), UV (G4290C), kolom Agilent C-18, wadah fasa gerak, vial, sonikator, pompa vakum, pH meter, syringe KCKT 50 µl, neraca analitik (Boeco-Germany), membran penyaring Poli Tetra Fluoro Etilen (PTFE) 0,45 µm, membran penyaring nitrat selulosa 0,45 µm, membran penyaring whatman PTFE 0,2 µm (Gambar alat dapat dilihat pada Lampiran 15).

3.3 Bahan-bahan

Bahan-bahan yang digunakan dalam penelitian ini adalah asetonitril grade grade for liquid chromatography (Merck), Kalium Dihidrogen Posfat (Merck), Natrium Hidroksida (Merck), aquabidestilata (PT. Mutifa Industri Farmasi), Pirasetam baku pabrik, dan pirasetam generik PT. A, Pirasetam generik PT. B, Pirasetam merek dagang Latropil PT. C, Neurotam PT. D, Resibron PT. E dan Revolan PT. F.

3.4 Pengambilan Sampel

Pengambilan sampel secara purposif yaitu tanpa membandingkan antara satu tempat dengan tempat lain, karena tempat pengambilan sampel dianggap homogen (Sudjana, 2001). Menurut Torbeck (2009), proses sampling dilakukan dengan menggunakan rumus:

1

  N n

Keterangan:

n = jumlah sampel yang diteliti N = jumlah sampel dalam populasi

3.5 Prosedur Penelitian 3.5.1 Penyiapan Bahan

3.5.1.1 Pembuatan Larutan KH2PO4

Ditimbang sebanyak 6804 mg KH2PO4 dimasukkan kedalam labu tentukur 500 ml kemudian dilarutkan dengan aquabides hingga garis tanda.

3.5.1.2 Pembuatan Fasa Gerak Asetonitril-Buffer Posfat pH 6

Sebanyak 500 ml KH2PO4 0,1 M dicampurkan dengan 100 ml larutan NaOH 0,2 M, diencerkan dengan air hingga 500 ml dan di cek pH hingga pH 6. Lalu dibuat campuran fasa gerak asetonitril-buffer posfat pH 6 (30:70) disonikasi dan disaring dengan penyaring membran filter PTFE 0,45 µm.

3.5.1.3 Pembuatan Larutan Induk Baku Pirasetam

Ditimbang seksama sejumlah 10 mg serbuk pirasetam baku, dimasukkan ke dalam labu tentukur 10 ml, dilarutkan dengan pelarut, disonikasi selama 30

menit untuk melarutkan hingga sempurna, kemudian dicukupkan sampai garis tanda dengan pelarut dan dikocok sampai homogen, sehingga diperoleh larutan dengan konsentrasi 1000 µg/ml (LIB I). Dipipet 5 ml, dimasukkan ke dalam labu tentukur 50 ml, dicukupkan sampai garis tanda dengan pelarut dan dikocok sampai homogen, sehingga diperoleh larutan dengan konsentrasi 100 µg/ml (LIB II).

3.5.2 Prosedur Analisis

3.5.2.1 Penyiapan Alat Kromatografi Cair Kinerja Tinggi

Masing – masing unit diatur, kolom yang digunakan Kolom Agilent C-18, dan dideteksi pada panjang gelombang 205 nm. Setelah alat KCKT dihidupkan, maka pompa dijalankan dan fasa gerak dibiarkan mengalir selama ± 60 menit dengan laju alir 1,0 ml/menit sampai diperoleh garis alas yang datar, menandakan sistem tersebut telah stabil.

3.5.2.2 Penentuan Perbandingan Fasa Gerak yang Optimum untuk Analisis Ditimbang 5 tablet pirasetam generik PT. A, digerus dengan menggunakan lumpang hingga halus, ditimbang seksama setara 10 mg pirasetam. Dimasukkan ke dalam labu tentukur 50 ml, dilarutkan dengan 30 ml pelarut, disonikasi selama 30 menit untuk melarutkan hingga sempurna. Dicukupkan dengan pelarut hingga garis tanda, dan dikocok sampai homogen sehingga diperoleh larutan pirasetam dengan konsentrasi 200 µg/ml. Disaring dengan menggunakan kertas saring. Dipipet 5 ml, dimasukkan ke dalam labu tentukur 50 ml dicukupkan dengan pelarut hingga garis tanda, dan dikocok sampai homogen sehingga diperoleh larutan pirasetam dengan konsentrasi 20 µg/ml. Disaring menggunakan penyaring whatman 0,2 µm. Kemudian diinjeksikan ke dalam sistem KCKT dengan volume

penyuntikan 20 µl, menggunakan fasa gerak asetonitril-buffer posfat pH 6, dengan perbandingan (30:70), (20:80) dan (10:90) dengan laju alir 1,0 ml/menit dan perbandingan (30:70), (20:80) dan (10:90) dengan laju alir 1,5 ml/menit, dideteksi pada panjang gelombang 205 nm. Kondisi kromatografi yang memberikan data yang terbaik yang akan dipilih dan digunakan dalam penelitian ini.

3.5.3 Analisis Kualitatif Menggunakan Kromatografi Cair Kinerja Tinggi 3.5.3.1 Uji Identifikasi Pirasetam dalam Sampel Menggunakan Kromatografi

Cair Kinerja Tinggi

Sampel dan bahan baku pirasetam masing-masing dengan konsentrasi 20 µg/ml diinjeksikan dengan volume penyuntikan 20 µl, dianalisis pada kondisi KCKT dengan perbandingan fasa gerak yang diperoleh. Sampel dinyatakan mengandung pirasetam dengan membandingkan waktu retensi bahan baku pirasetam dan waktu retensi sampel. Selanjutnya pada larutan sampel pirasetam ditambahkan sedikit larutan baku pirasetam (spiking) kemudian diinjeksikan dan dianalisa kembali pada kondisi KCKT yang sama.

3.5.3.2 Pembuatan Kurva Kalibrasi Pirasetam Baku

Dipipet larutan induk baku II (LIB II) dengan konsentrasi 100 µg/ml (0,5; 1; 2; 3 dan 5) ml, dimasukkan ke dalam labu tentukur 10 ml, diencerkan dengan pelarut hingga garis tanda, dikocok sampai homogen sehingga diperoleh konsentrasi (5, 10, 20, 30, dan 50) µg/ml. Kemudian masing-masing larutan disaring dengan penyaring whatman 0,2 µm, dan diinjeksikan ke sistem KCKT dengan volume penyuntikan 20 µl menggunakan fasa gerak asetonitril-buffer posfat pH 6 dengan perbandingan (30:70), laju alir 1,0 ml/menit, dan dideteksi

pada panjang gelombang 205 nm. Selanjutnya dari luas area yang diperoleh pada kromatogram dibuat kurva kalibrasi, dihitung persamaan garis regresi dan faktor korelasinya.

3.5.3.3 Penetapan Kadar Sampel

Ditimbang 20 tablet, dicatat beratnya. Digerus dengan menggunakan lumpang hingga halus. Ditimbang setara 10 mg. Dimasukkan ke dalam labu tentukur 50 ml, dilarutkan dengan 30 ml pelarut, disonikasi selama ± 30 menit untuk melarutkan hingga sempurna. Dicukupkan dengan pelarut hingga garis tanda, dan dikocok sampai homogen sehingga diperoleh larutan pirasetam dengan konsentrasi 200 µg/ml. Disaring dengan menggunakan kertas saring. Dipipet 5 ml, dimasukkan ke dalam labu tentukur 50 ml dicukupkan dengan pelarut hingga garis tanda, dan dikocok sampai homogen sehingga diperoleh larutan pirasetam dengan konsentrasi 20 µg/ml dan disaring menggunakan penyaring whatman 0,2 µm. Kemudian diinjeksikan ke dalam sistem KCKT dengan volume penyuntikan 20 µl, menggunakan fasa gerak asetonitril-buffer posfat pH 6 dengan perbandingan (30:70), laju alir 1,0 ml/menit, dan dideteksi pada panjang gelombang 205 nm. Dilakukan sebanyak 6 kali pengulangan untuk setiap sampel tablet generik dan merek dagang. Kadar dapat dihitung dengan mensubtitusikan luas area sampel pada Y dari persamaan regresi: Y = aX + b.

3.5.3.4 Analisis Data Secara Statistik

Data perhitungan kadar dianalisis secara statistik menggunakan uji t. Menurut Harmita (2004), rumus yang digunakan untuk menghitung Standar Deviasi (SD) adalah:

1 )

( 2

  



n X X SD

SD = Standard deviasi

X = Kadar dalam satu perlakuan

X = Kadar rata-rata dalam satu sampel n = Jumlah perlakuan

Kadar dapat dihitung dengan persamaan garis regresi dan untuk menentukan data diterima atau ditolak digunakan rumus:

t hitung

n SD

X X

/

 

Dengan dasar penolakan apabila t hitung ≥ t table. Untuk mencari kadar sebenarnya, dapat digunakan rumus:

µ =



X ± t (1- 1/2 α) dk

n

SD

Keterangan:

µ = Kadar sebenarnya X = Kadar sampel n = Jumlah perlakuan

t = Suatu harga tergantung pada derajat kebebasan dan tingkat kepercayaan dk = Derajat kebebasan

3.5.4 Metode Validasi

3.5.4.1 Kecermatan (accuracy)

Menurut Harmita (2004), kecermatan adalah ukuran yang menunjukkan derajat kedekatan hasil analisis dengan kadar analit yang sebenarnya. Ditimbang 20 tablet pirasetam yang mengandung zat berkhasiat 400 mg/tablet. Kemudian ditentukan pada rentang spesifik 80%, 100%, dan 120%. Tablet digerus hingga

halus. Ditimbang serbuk yang mengandung 70% analit dari kadar zat berkhasiat lalu dilakukan prosedur yang sama seperti pada penetapan kadar sampel. Ditimbang lagi serbuk yang mengandung 70% analit dari zat berkhasiat dan 30% bahan baku, lalu dilakukan prosedur yang sama seperti pada penetapan kadar sampel. Dilakukan 3 kali pengulangan untuk masing-masing rentang spesifik tersebut.

Menurut Harmita (2004), hasil dinyatakan dalam (% recovery). Persen perolehan kembali dapat dihitung dengan menggunakan rumus berikut:

% recovery =

A C

CA CF

*



x 100% Keterangan :

CF = konsentrasi total sampel yang diperoleh dari pengukuran (µg/ml) CA = konsentrasi sampel sebenarnya (µg/ml)

C*A = konsentrasi analit yang ditambahkan (µg/ml) 3.5.4.2 Keseksamaan (precision)

Menurut Rohman (2009), presisi merupakan ukuran kedekatan antar serangkaian hasil analisis yang diperoleh dari beberapa kali pengukuran pada sampel homogen yang sama. Untuk menguji data presisi, diambil data-data dari data % recovery, kemudian dihitung standar deviasi. Setelah itu, dihitung % RSD dengan cara standar deviasi dibagi rata-rata dari % recovery kemudian dikali 100%. Presisi seringkali diekspresikan dengan SD atau RSD dari serangkaian data. Nilai RSD dirumuskan dengan:

X xSD RSD100

Keterangan:

RSD = Simpangan baku relatif (%) SD = Standar deviasi serangkaian data

X = Rata-rata data.

Sementara itu, nilai SD dihitung dengan :

SD =









2 1  



n X X Keterangan:

X = nilai dari masing-masing pengukuran

X = rata-rata (mean) dari pengukuran N = banyaknya data

n-1 = derajat kebebasan

3.5.4.3 Batas Deteksi dan Batas Kuantitasi

Menurut Harmita (2004), batas deteksi adalah jumlah terkecil analit dalam sampel yang dapat dideteksi yang masih memberikan respon signifikan dibandingkan dengan blanko. Batas kuantitasi merupakan kuantitas terkecil analit dalam sampel yang masih dapat memenuhi kriteria cermat dan seksama dapat dihitung dengan menggunakan rumus sebagai berikut:

Sy/x =









2 2  



n Yi Y Slope x Sy x

LOD3 /

Slope x Sy x

LOQ10 /

Keterangan:

Sy/x = simpangan Baku Slope = derajat Kemiringan

BAB IV

HASIL DAN PEMBAHASAN

4.1 Penentuan Kondisi Kromatografi untuk Mendapatkan Hasil Analisis yang Optimum

Penetapan kadar pirasetam dalam sediaan tablet ditentukan secara KCKT. Untuk mendapatkan hasil yang baik, terlebih dahulu ditentukan kondisi kromatografi yang optimal meliputi perbandingan fasa gerak dan laju alir.

Hasil orientasi fasa gerak yang dilakukan pada perbandingan asetonitril-buffer posfat pH 6 yaitu (30:70), (20:80) dan (10:90) dengan laju alir 1,0 ml/menit dan 1,5 ml/menit, pada panjang gelombang 205 nm dapat dilihat pada gambar berikut :

Retention time Area Height Tailing factor

2.253 841.6373 160.2597 0.681

Gambar 4.1 Kromatogram pirasetam dengan fasa gerak asetonitril-buffer posfat pH 6 (30:70) laju alir 1,0 ml/menit.

Retention time Area Height Tailing factor

2.389 766.3770 150.3382 0.916

Gambar 4.2 Kromatogram pirasetam dengan fasa gerak asetonitril-buffer posfat pH 6 (20:80) laju alir 1,0 ml/menit.

Retention time Area Height Tailing factor

2.757 738.8053 145.6862 1.243

Gambar 4.3 Kromatogram pirasetam dengan fasa gerak asetonitril-buffer posfat pH 6 (10:90) laju alir 1,0 ml/menit.

Retention time Area Height Tailing factor

Gambar 4.4 Kromatogram pirasetam dengan fasa gerak asetonitril-buffer posfat pH 6 (30:70) laju alir 1,5 ml/menit.

Retention time Area Height Tailing factor

1.611 531.3620 136.7944 1.913

Gambar 4.5 Kromatogram pirasetam dengan fasa gerak asetonitril-buffer posfat pH 6 (20:80) laju alir 1,5 ml/menit.

Retention time Area Height Tailing factor

1.849 509.9312 131.4102 1.913

Gambar 4.6 Kromatogram pirasetam dengan fasa gerak asetonitril-buffer posfat pH 6 (10:90) laju alir 1,5 ml/menit.

Tabel 4.1 Hasil Optimasi Perbandingan Fasa Gerak dan Laju Alir No. Perbandingan

fasa gerak

Laju Alir (ml/menit)

Retention

time Area

Tailing Factor

Theoritical Plates 1 (30:70)

1,0

2,253 841,63733 0,681 3590

2 (20:80) 2,389 766,37701 0,916 2288

3 (10:90) 2,757 738,80536 1,243 1791

5 (20:80) 1,611 531,36200 1,913 1582

6 (10:90) 1,849 509,93124 1,913 3028

Dari tabel diatas dapat diambil kesimpulan bahwa optimasi fasa gerak dan laju alir terbaik yaitu perbandingan fasa gerak asetonitril-buffer posfat pH 6 (30:70) dengan laju alir 1,0 ml/menit karena memiliki tailing factor yang lebih kecil dari 2 dan theoriticalplates yang lebih besar.

4.2 Analisis Kualitatif Pirasetam Secara Kromatografi Cair Kinerja Tinggi Untuk mempertegas identifikasi analisa sampel dari pirasetam sediaan tablet, maka ditambahkan sedikit larutan baku pirasetam baku ke dalam larutan sampel (spiking), lalu dianalisis pada kondisi KCKT yang sama. Hal ini dilakukan dengan cara : Pertama, dilakukan proses kromatografi sampel tanpa penambahan baku. Kedua, sampel dengan penambahan bahan baku dilakukan proses kromatografi. Hasil kromatogram yang diperoleh dapat dilihat pada Gambar 4.7 dan 4.8

Retention time Area Height Tailing factor

2.386 756.9909 149.7187 1.275

Gambar 4.7 Kromatogram pirasetam sebelum penambahan baku dengan fasa gerak asetonitril-buffer posfat pH 6 (30:70) laju alir 1,0 ml/menit.

Retention time Area Height Tailing factor

2.392 764.0892 149.8481 1.268

Gambar 4.8 Kromatogram pirasetam setelah penambahan baku hasil spike dengan fasa gerak asetonitril-buffer posfat pH 6 (30:70) laju alir 1,0 ml/menit.

Hasil analisa kualitatif dari sediaan tablet pirasetam dengan metode penambahan baku (spike) dapat dilihat pada Tabel 4.2

Tabel 4.2 Perbandingan retention time, area, height, dan tailing factor dari hasil spiking.

No Retention time (menit) Area Height Tailing factor

1 2.386 756.99097 149.71875 1.27595

2 2.392 764.08923 149.84813 1.26873

Dari kromatogram diatas dapat dilihat bahwa terjadi peningkatan luas area dan tinggi puncak pada kromatogram setelah penambahan baku dibandingkan dengan sebelum penambahan bahan baku maka dapat diambil kesimpulan sampel mengandung pirasetam (Johnson dan Stevenson, 1978).

4.3 Penentuan Linieritas Kurva Kalibrasi Pirasetam Baku

Penentuan linieritas kurva kalibrasi pirasetam baku ditentukan berdasarkan luas puncak dengan konsentrasi (5,0; 10; 20; 30 dan 50) µg/ml. Kurva kalibrasi yang diperoleh memberikan hubungan yang linier antara konsentrasi dan luas puncak dengan koefisien korelasi (r) = 0,9996 dan dari perhitungan diperoleh

persamaan regresi Y34,3247X 52,0640. Kurva kalibrasi pirasetam dapat dilihat pada gambar berikut :

Gambar 4.9 Kurva kalibrasi pirasetam baku pabrik PT. Mutifa

4.4 Penetapan Kadar Pirasetam dalam Sediaan Tablet

Dilakukan penetapan kadar pirasetam sesuai dari hasil optimasi dengan menggunakan fasa gerak asetonitril-buffer posfat pH 6 (30:70), dimana waktu tambat yang relatif singkat, tailing factor yang kurang dari 2 dan theoriticalplates yang lebih besar dengan laju alir 1,0 ml/menit dan pada panjang gelombang 205 nm. Kadar dapat dihitung dengan mensubstitusikan luas area pada Y dari persamaan regresi Y = 34,3247X + 52,0640.

Tabel 4.3 Kadar rata-rata pirasetam dalam sediaan tablet

No Merek Nama

Pabrik

Kadar Rata-rata (%)

Kadar Sebenarnya (%)

1 Pirasetam generik A 99,96 99,96 ± 2,0240

2 Pirasetam generik B 101,46 101,46 ± 4,4385

3 Latropil® C 101,80 101,80 ± 0,7710

4 Neurotam® D 101,70 101,70 ± 1,0344

5 Resibron® E 100,46 100,46 ± 2,973

6 Revolan® F 101,34 101,34 ± 2,0543

y = 34,3247x + 52,0640 r = 0,99963

0 50000000 100000000 150000000 200000000

0 10 20 30 40 50 60

Luas

Puncak

Dari data di atas, kadar pirasetam dalam sediaan tablet generik maupun dagang yang diuji memenuhi persyaratan kadar umumnya suatu sediaan obat dalam bentuk tablet yaitu tidak kurang dari 90,0 % dan tidak lebih dari 110,0 % dari jumlah yang tertera pada etiket.

Dua tablet yang mengandung zat aktif dan kadar obat yang sama dari pabrik yang berlainan atau formula yang berlainan tidak selalu menghasilkan kadar obat dalam darah dan efek terapi yang sama. Dalam satu pabrik saja tablet dari bets yang berlainan bisa memberikan efek yang berbeda. Hal ini dikarenakan ketersediaan farmasi masing-masing berbeda karena setiap pabrik memiliki formula sendiri-sendiri (Syamsuni, 2006).

Faktor-faktor yang mempengaruhi ketersediaan farmasi masing-masing tablet berbeda adalah formulasi, bahan aktif, pengemas, proses, metode. Bioavabilitas yang berbeda antara produk-produk obat dari zat berkhasiat sama bisa jadi karena perbedaan formula yang digunakan, metode dari produk pabrik pembuat yang digunakan, kerasnya prosedur kontrol kualitas dalam proses pembuatan dan bahkan metode penanganan, peralatan, pengemasan dan penyimpanan (Ansel, dkk, 1999).

4.5 Uji Validasi

Uji validasi dilakukan dengan metode penambahan bahan baku (standar addition method) terhadap sampel tablet pirasetam generik (PT. A) yang meliputi uji akurasi dengan parameter %recovery, uji presisi dengan parameter RSD, LOD dan LOQ. Uji akurasi dengan parameter persen perolehan kembali dilakukan dengan membuat 3 konsentrasi analit dengan rentang spesifik 80%, 100%, dan

120%. Hasil uji validasi tablet pirasetam generik (PT. A) dapat dilihat pada Tabel 4.4

Tabel 4.4 Data hasil uji validasi metode dari tablet generik (PT. A) Rentang spesifik

(%)

Persen perolehan kembali (%)

80%

98,93 97,62 99,57

100%

100,46 100,44 99,61

120%

102,41 102,33 102,18 Recovery (%)

SD RSD (%) LOD (µg/ml) LOQ (µg/ml)

100,39 1,6637 1,6570 2,6945 8,9818

Dari data pada Tabel 4.4 di atas diperoleh persen perolehan kembali Pirasetam 100,39%. Hasil ini dapat diterima karena memenuhi syarat uji akurasi, bahwa rentang rata-rata % perolehan kembali ialah 98-102%. Maka dapat disimpulkan bahwa metode ini mempunyai akurasi yang baik (Epshtein, 2004).

Hasil uji presisi dengan parameter RSD diperoleh 1,65%. persyaratan nilai RSD adalah <2%. Maka dapat disimpulkan bahwa metode analisis mempunyai presisi yang baik (Harmita, 2004).

Batas deteksi dan Batas kuantitasi yang diperoleh dari penelitian ini sebesar 2,6945 µg/ml dan 8,9818 µg/ml. Hasil perhitungan dapat dilihat pada Lampiran 3.

BAB V

KESIMPULAN DAN SARAN 5.1 Kesimpulan

a. metode KCKT dalam penetapan kadar pirasetam tablet dengan perbandingan fasa gerak asetonitril-buffer posfat pH 6 (30:70) dengan laju alir 1,0 ml/menit memberikan uji validasi yang memenuhi persyaratan.

b. kadar pirasetam di dalam sediaan tablet yang ditetapkan memenuhi persyaratan kadar umumnya sediaan obat dalam tablet yaitu tidak kurang dari 90,0% dan tidak lebih dari 110,0% dari jumlah yang tertera pada etiket. c. dari penelitian yang dilakukan diperoleh kadar pirasetam tablet berturut-turut,

untuk sediaan generik PT. A (99,778%); PT. B (101,275%). Sedangkan untuk pirasetam tablet dengan nama dagang Latropil PT. C (101,058%); Neurotam PT. D (101,756%); Resibron PT. E (100,441%) dan Revolan PT. F (101,323%).

5.2 Saran

Disarankan kepada instansi rumah sakit, tenaga medis dan masyarakat untuk tidak ragu menggunakan obat generik.

BAB II

TINJAUAN PUSTAKA

2.1 Pirasetam 2.1.1 Uraian Bahan

Menurut Ditjen. BKAK (2014), sifat fisikokimia pirasetam adalah :

Gambar 2.1 Struktur Pirasetam Nama Kimia : 2-Oxopirolidin 1-Asetamida Rumus Molekul : C6H10N2O2

Berat Molekul : 142,2

Pemerian : Serbuk; putih atau hampir putih

Kelarutan : Mudah larut dalam air; larut dalam etanol 2.1.2 Farmakologi

Pirasetam merupakan obat nootropik yang digunakan untuk meningkatkan proses belajar dan mengingat. Pirasetam biasa disebut sebagai turunan siklik dari Gamma Amino Butiric Acid (GABA) yang berikatan dengan GABA reseptor. Obat ini bekerja pada aktivitas kognitif tanpa menimbulkan perangsangan ekstra atau menghambat neurotransmitter (Barkat, dkk., 2014).

Pirasetam merupakan salah satu dari kelompok rasetam yang biasa digunakan untuk mengobati penyakit demensia dan alzheimer. Pirasetam mempunyai absorbsi yang baik dengan pemberian peroral, dengan bioavailabilitas hampir 100%. Pirasetam diekskresikan dalam bentuk tidak berubah dan tereliminasi seutuhnya setelah 30 jam (Gouliaev dan Senning, 1994).

2.2 Kromatografi

Kromatografi merupakan suatu proses pemisahan yang mana analit-analit dalam sampel terdistribusi antara dua fasa, yaitu fasa diam dan fasa gerak. Fasa diam dapat berupa bahan padat dalam bentuk molekul kecil, atau dalam bentuk cairan yang dilapiskan pada pendukung padat atau dilapiskan pada dinding kolom. Fasa gerak dapat berupa gas atau cairan. Jika gas digunakan sebagai fasa gerak, maka prosesnya dikenal sebagai kromatografi gas. Dalam kromatografi cair dan kromatografi lapis tipis, fasa gerak yang digunakan selalu cair (Rohman, 2009).

Saat ini kromatografi merupakan teknik pemisahan yang paling umum dan paling sering digunakan dalam bidang kimia analisis kualitatif, kuantitatif, atau preparatif dalam bidang farmasi, lingkungan, industri, dan sebagainya. Kromatografi merupakan suatu teknik pemisahan yang menggunakan fasa diam (stationary phase) dan fasa gerak (mobile phase) (Gandjar dan Rohman, 2007). 2.2.1 Klasifikasi Kromatografi

Kromatografi dapat dibedakan atas berbagai macam, tergantung pada pengelompokannya. Berdasarkan pada mekanisme pemisahannya, kromatografi dibedakan menjadi : (a) kromatografi adsorbsi; (b) kromatografi partisi; (c) kromatografi pasangan ion; (d) kromatografi penukar ion; (e) kromatografi

eksklusi ukuran dan (f) kromatografi afinitas. Berdasarkan pada alat yang digunakan, kromatografi dapat dibagi atas: (a) kromatografi kertas; (b) kromatografi lapis tipis; (c) KCKT dan (d) kromatografi gas (KG) (Rohman, 2009).

2.3 Kromatografi Cair Kinerja Tinggi

Kromatografi Cair Kinerja Tinggi memisahkan komponen campuran senyawa kimia terlarut dengan sistem adsorpsi pada fasa diam padat atau sistem partisi di antara fasa diam cair yang terikat pada penyangga padat, dan fasa gerak cair. KCKT dapat memisahkan makromolekul, ion, bahan alam yang tidak stabil, polimer dan berbagai gugus polifungsi dengan berat molekul tinggi. Berbeda dengan kromatografi gas, pemisahan pada KCKT adalah hasil interaksi spesifik antara molekul senyawa dengan fasa diam dan fasa gerak (Satiadarma, dkk., 2004).

Kromatografi Cair Kinerja Tinggi merupakan sistem pemisahan dengan kecepatan dan efisiensi yang tinggi. Hal ini karena didukung oleh kemajuan dalam teknologi kolom, sistem pompa tekanan tinggi, dan detektor yang sangat sensitif dan beragam. KCKT mampu menganalisa berbagai cuplikan secara kualitatif maupun kuantitatif, baik dalam komponen tunggal maupun campuran (Ditjen. POM., 1995).

Teknik analisis obat secara KCKT merupakan yang paling cepat berkembang. Cara ini ideal untuk analisis beragam obat dalam sediaan dan cairan biologi, karena sederhana dan kepekaannya tinggi (Munson, 1984).

2.4 Cara Kerja Kromatografi Cair Kinerja Tinggi

Kromatografi merupakan teknik yang mana zat-zat terlarut terpisah oleh perbedaan kecepatan elusi, dikarenakan zat terlarut ini melewati suatu kolom kromatografi. Pemisahan zat-zat terlarut ini diatur oleh distribusi dalam fasa gerak dan fasa diam. Penggunaan kromatografi cair membutuhkan penggabungan secara tepat dari berbagai macam kondisi operasional seperti jenis kolom, fasa gerak, panjang dan diameter kolom, kecepatan alir fasa gerak, suhu kolom, dan ukuran sampel (Gandjar dan Rohman, 2007).

Pemisahan analit dalam kolom kromatografi berdasarkan pada aliran fasa gerak yang membawa campuran analit melalui fasa diam dan perbedaan interaksi analit dengan permukaan fasa diam sehingga terjadi perbedaan waktu perpindahan setiap komponen dalam campuran (Meyer, 2010).

2.5Kriteria Optimasi Kromatografi Cair Kinerja Tinggi

Menurut Berridge (1985), optimasi dalam sistem KCKT disyaratkan untuk menemukan kondisi yang optimal guna menghasilkan pemisahan yang baik pada kondisi percobaan tersebut dilakukan. Adapun tujuan dipersyaratkan optimasi pada sistem KCKT antara lain: (a) menghemat biaya penelitian; (b) mendapatkan hasil pemisahan yang baik dengan waktu yang singkat; (c) menciptakan pemisahan terbaik yang mungkin dihasilkan oleh sampel; (d) memilih fasa gerak dan kolom yang menunjukkan pemisahan yang baik pada waktu yang singkat.

Keberhasilan pemisahan suatu analit sangat dipengaruhi oleh pemilihan sistem kromatografi dan komposisi fasa gerak yang tepat. Meskipun dari segi

instrumen sering diabaikan. Proses pemisahan dikatakan baik bergantung pada kondisi kolom, detektor dan pompa instrumen KCKT.

2.6 Jenis Pemisahan Kromatografi Cair Kinerja Tinggi

Dari kedua fasa, yaitu fasa diam dan fasa gerak, salah satu di antaranya selalu harus lebih polar daripada yang lainnya. Misalnya, heksana yang dipakai pada kolom silika kepolarannya jauh lebih rendah daripada permukaan silika. Jika fasa yang lebih polar itu fasa diam, ini disebut kromatografi normal. Jika fasa yang kepolarannya lebih rendah ialah fasa diam, ini dikenal sebagai kromatografi fasa balik (Gritter, dkk., 1985).

Kromatografi fasa balik menggunakan fasa diam dari silika yang dimodifikasi secara kimiawi. Fasa diam yang paling popular digunakan adalah oktadesilsilan (ODS atau C18) yang relatif non polar sedangkan fasa geraknya relatif lebih polar daripada fasa diam. Kondisi kepolaran kedua fasa ini merupakan kebalikan dari kromatografi fasa normal sehingga disebut kromatografi fasa balik (Meyer, 2010).

2.7 Komponen Kromatografi Cair Kinerja Tinggi

Instrumentasi KCKT terdiri atas wadah fasa gerak, pompa, injektor, kolom, detektor, dan pengolah data. Diagram skematik alat KCKT ditunjukkan pada Gambar 2.2

Gambar 2.2 Diagram Skematik Alat KCKT (Rohman, 2009). 2.7.1 Wadah Fasa Gerak

Wadah fasa gerak harus bersih dan lembam (inert). Wadah pelarut kosong ataupun labu laboratorium dapat digunakan sebagai wadah gerak. Wadah ini biasanya dapat menampung fasa gerak antara 1 sampai 2 liter pelarut. Fasa gerak sebelum digunakan harus dilakukan degassing (penghilangan gas) yang ada pada fasa gerak, sebab dengan adanya gas akan berkumpul dengan komponen lain terutama di pompa dan detektor sehingga akan mengacaukan analisis. Pada saat membuat pelarut untuk fasa gerak, maka akan sangat dianjurkan untuk menggunakan pelarut dengan kemurnian yang sangat tinggi, dan lebih terpilih lagi jika pelarut-pelarut yang akan digunakan berderajat KCKT (HPLC grade). Adanya pengotor dalam pelarut dapat menyebabkan gangguan pada sistem kromatografi. Adanya partikel yang kecil dapat berkumpul dalam kolom atau dalam tabung sempit, sehingga dapat mengakibatkan suatu kekosongan pada kolom atau tabung tersebut (Gandjar dan Rohman, 2007).

2.7.2 Pompa

Ada dua jenis pompa yang digunakan: tekanan-tetap dan pendesakan-tetap. Pompa pendesakan tetap dapat dibagi lagi menjadi pompa torak dan pompa semprit. Pompa torak menghasilkan aliran yang berdenyut, jadi memerlukan

peredam denyut atau peredam elektronik untuk menghasilkan garis alas detektor yang stabil jika detektor peka terhadap aliran. Kelebihan utamanya ialah tandonnya tidak terbatas. Pompa semprit menghasilkan aliran yang tak berdenyut, tetapi tandonnya terbatas (Jhonson dan Stevenson, 1978).

2.7.3 Injektor

Menurut Jhonson dan Stevenson (1978), ada tiga tipe dasar injektor yang dapat digunakan, yaitu:

a. aliran henti: Aliran dihentikan, penyuntikan dilakukan pada tekanan atmosfir; sistem ditutup, dan aliran dilanjutkan lagi (biasanya sistem aliran utama tetap berada dalam tekanan kerja). Cara ini dapat dipakai karena difusi di dalam zat cair kecil, jadi umumnya daya pisah tidak dipengaruhi;

b. septum: Ini adalah injektor langsung pada aliran, yang sama dengan injektor yang lazim dipakai pada kromatografi gas. Injektor tersebut dapat dipakai pada tekanan sampai sekitar 60 - 70 atmosfir akan tetapi septum tidak dapat dipakai untuk semua pelarut kromatografi cair. Selain itu, partikel kecil terlepas dari septum dan cenderung menyumbat;

c. katup jalan-kitar: jenis injektor ini, biasanya dipakai untuk menyuntikkan volum lebih besar dari pada 10 µl dan sekarang dipakai dalam sistem yang diotomatkan (volume yang lebih kecil dapat disuntikkan secara manual memakai adaptor khusus). Pada kedudukan mengisi, jalan-kitar cuplikan diisi pada tekanan atmosfir. Jika katup dijalankan (dibuka), cuplikan di dalam jalan-kitar teralirkan ke dalam kolom. Tipe injektor katup jalan-kitar secara skematik ditunjukkan pada Gambar 2.3

Gambar 2.3 Tipe Injektor Katup jalan-kitar (De Lux Putra, 2007). 2.7.4 Kolom

Kolom merupakan jantung kromatografi. Keberhasilan atau kegagalan analisis bergantung pada pemilihan kolom dan kondisi kerja yang tepat. Menurut Johnson dan Stevenson (1978), kolom dapat dibagi menjadi dua kelompok:

a. kolom analitik: garis tengah dalam 2–6 mm. Untuk kemasan mikropartikel berpori, biasanya 10 – 30 cm.

b. kolom preparatif: umumnya bergaris tengah 6 mm atau lebih besar dan panjang kolom 25 – 100 cm.

Kolom hampir selalu terbuat dari baja nirkarat. Kolom biasanya dipakai pada suhu kamar, tetapi suhu yang lebih tinggi dapat juga dipakai, terutama dalam kromatografi penukar ion dan kromatografi eksklusi. Kemasan bergantung pada ragam KCKT yang dilakukan.

2.7.5 Fasa Diam

Fasa diam dapat berupa permukaan zat padat yang berfungsi sebagai medium yang menjerap, atau permukaan zat cair yang terdapat pada sejenis zat padat. Banyak sistem fasa diam baru telah dikembangkan untuk KCKT, dan pemakaian bahan tersebut sangat meningkatkan keefisienan dan kemampuan metode itu. Sebagian besar bahan itu didasarkan pada silika (Gritter, dkk., 1985).

Kebanyakan fasa diam pada KCKT berupa silika yang dimodifikasi secara kimiawi, silika yang tidak dimodifikasi, atau polimer-polimer stiren dan divinil benzen. Permukaan silika adalah polar dan sedikit asam karena adanya residu gugus silanol (Si-OH). Oktadesil silika (ODS atau C18) merupakan fasa diam yang paling banyak digunakan karena mampu memisahkan senyawa-senyawa dengan kepolaran yang rendah, sedang maupun tinggi (Gandjar dan Rohman, 2007).

Sekarang ini, gel silika ODS atau fasa-fasa sejenis seperti gel silika oktil digunakan untuk >80% analisis farmasi namun fasa-fasa lain hanya digunakan jika diperlukan selektivitas khusus, misalnya untuk senyawa-senyawa yang sangat mudah larut dalam air atau untuk pemisahan bioanalisis yang menjadi penting karena matriks sampel tersebut menghasilkan banyak puncak yang mengganggu (Watson, 2005).

2.7.6 Detektor

Detektor pada KCKT dikelompokkan menjadi dua golongan yaitu: detektor universal (yang mampu mendeteksi zat secara umum, tidak bersifat selektif) seperti detektor indeks bias dan detektor spektrofotometri massa, golongan detektor yang spesifik hanya akan mendeteksi analit secara spesifik dan selektif, seperti detektor utraviolet-visible, detektor fluoresensi, elektrokimia. Idealnya, suatu detektor mempunyai karakteristik sebagai berikut: (a) mempunyai respon terhadap zat terlarut yang cepat dan reprodusibel; (b) mempunyai sensitifitas yang tinggi, yakni mampu mendeteksi analit pada kadar yang sangat kecil dan (c) stabil dalam pengoperasiannya (Gandjar dan Rohman, 2007).

2.7.7 Pengolah Data

Alat pengumpul data seperti komputer, integrator, dan rekorder dihubungkan ke detektor. Alat ini akan mengukur sinyal elektronik yang dihasilkan oleh detektor dan memplotkannya sebagai suatu kromatogram yang selanjutnya dievaluasi oleh seorang analis (Gandjar dan Rohman, 2007).

2.7.8 Fasa Gerak

Fasa gerak atau eluen biasanya terdiri atas campuran pelarut yang dapat bercampur yang secara keseluruhan berperan dalam daya elusi dan resolusi. Daya elusi dan resolusi ini ditentukan oleh polaritas keseluruhan pelarut, polaritas fasa diam, dan sifat komponen-komponen sampel (Gandjar dan Rohman, 2007).

Pada KCKT, susunan pelarut atau fasa gerak merupakan salah satu hal penting yang mempengaruhi proses pemisahan. Berbagai macam pelarut dipakai dalam semua jenis KCKT, tetapi ada beberapa syarat fasa gerak yang digunakan dalam KCKT. Menurut Jhonson dan Stevenson (1978), kriteria fasa gerak yang ideal adalah sebagai berikut: (a) murni; (b) tidak bereaksi dengan kemasan; (c) sesuai dengan detektor; (d) dapat melarutkan cuplikan; (e) mempunyai viskositas rendah; (f) memungkinkan memperoleh kembali cuplikan dengan mudah, jika diperlukan; (g) harganya relatif.

2.7.9 Elusi Gradien dan Isokratik

Menurut Gritter, dkk., (1985), elusi pada KCKT dapat dibagi menjadi dua sistem yaitu:

a. Sistem elusi isokratik

Pada sistem ini, elusi dilakukan dengan satu macam atau lebih fasa gerak dengan perbandingan tetap (komposisi fasa gerak tetap selama elusi).

b. Sistem elusi gradien

Pada sistem ini, elusi dilakukan dengan campuran fasa gerak yang perbandingannya berubah-ubah dalam waktu tertentu (komposisi fasa gerak berubah-ubah selama elusi). Elusi gradien digunakan pada situasi yang membutuhkan pemprograman temperatur dalam kromatografi gas, dan ini dibutuhkan ketika range dari waktu retensi dari pelarut dalam kolom besar sehingga tidak dapat terlarut dan elusi dalam waktu tertentu menggunakan satu jenis atau campuran pelarut (Lindsay, 1987).

2.8 Validasi Metode

Validasi metode analisis adalah suatu tindakan penilaian terhadap parameter tertentu, berdasarkan percobaan laboratorium, untuk membuktikan bahwa parameter tersebut memenuhi persyaratan untuk penggunaannya. Validasi metode dilakukan untuk menjamin bahwa metode analisis akurat, spesifik, reprodusibel dan tahan pada kisaran analit yang akan dianalisis. Suatu metode analisis harus divalidasi untuk verifikasi bahwa parameter-parameter kinerjanya cukup mampu untuk mengatasi masalah dalam analisis. Parameter analisis yang ditentukan pada validasi adalah akurasi, presisi, batas deteksi, batas kuantitasi, spesifikasi, linieritas dan rentang, kekasaran (Ruggedness) dan ketahanan (Robustness) (Harmita, 2004).

Akurasi/kecermatan adalah ukuran yang menunjukkan derajat kedekatan hasil analisis dengan kadar analit yang sebenarnya. Kecermatan dinyatakan sebagai persen perolehan kembali (% recovery). Presisi/keseksamaan adalah ukuran kedekatan antar serangkaian hasil analisis yang diperoleh dari beberapa

kali pengukuran pada sampel yang sama. Presisi dinyatakan dengan Simpangan Baku Relatif (Relative Standar Deviation, RSD) (Harmita, 2004).

Batas deteksi (Limit of Detection, LOD) adalah jumlah terkecil analit dalam sampel yang dapat dideteksi yang masih memberikan respon signifikan dibandingkan dengan blanko. Batas kuantitasi (Limit of Quantitation, LOQ) merupakan kuantitas terkecil analit dalam sampel yang masih dapat memenuhi kriteria cermat dan seksama. LOD dan LOQ dapat dihitung secara statistik melalui garis regresi linier dari kurva kalibrasi (Harmita, 2004).

BAB I PENDAHULUAN 1.1 Latar belakang

Pengerasan dan penyumbatan pembuluh darah di otak adalah gangguan yang disebabkan oleh gangguan sirkulasi di otak dan sering ditemukan pada lansia diatas usia 60 tahun. Dengan meningkatnya harapan hidup manusia, maka jumlah orang yang akan menderita gangguan sirkulasi ini juga semakin meningkat. Menurut dugaan, di masa depan obat-obat tersebut akan semakin penting dan salah satu obat yang terdapat di pasaran untuk penyakit tersebut adalah tablet pirasetam (Tan dan Rahardja, 2007).

Dalam bidang farmasi, pemeriksaan mutu obat diperlukan agar obat dapat sampai pada titik tangkapnya dan memberikan efek terapi yang dikehendaki dengan kadar yang tepat. Salah satu dari uji tersebut adalah kadar zat berkhasiat dari suatu sediaan obat harus memenuhi persyaratan suatu buku standar. Monografi sediaan pirasetam dalam bentuk tablet tidak terdapat dalam Farmakope Indonesia Edisi V tahun 2014, tetapi terdapat dalam bentuk baku yang penetapan kadarnya ditentukan secara Kromatografi Cair Kinerja Tinggi (KCKT).

Dalam beberapa penelitian yang telah dilakukan, penetapan kadar pirasetam ditentukan secara KCKT dengan menggunakan pelarut asetonitril-buffer posfat pH 6 (5:95) dengan kolom C-18 µm (4,6 mm x 25 cm) pada panjang gelombang 205 nm dan pelarut asetonitril-trietilamin (15:85) menggunakan kolom C-18 µm (4,6 mm x 25 cm) pada panjang gelombang 205 nm (Maslarska, 2013; Arayne, dkk., 2010).

Pemeriksaan kadar zat aktif merupakan persyaratan yang harus dipenuhi untuk menjamin kualitas suatu sediaan obat. Sediaan obat yang berkualitas akan menunjang tercapainya efek terapetik yang diharapkan. Obat dengan nama generik merupakan obat yang harganya murah dibandingkan obat merek dagang. Masyarakat menganggap obat generik yang harganya murah tidak memiliki mutu sebaik obat merek dagang yang harganya jauh lebih mahal. Mereka menganggap obat paten lebih manjur dari pada obat generik, meskipun sebenarnya zat yang berkhasiat sama. Lebih-lebih bila penderita yang pengobatannya ditanggung oleh perusahaan selalu menginginkan obat-obat paten terutama obat paten buatan pabrik luar negeri (Puspitasari, 2006; Widjajanti, 2002).

Kegunaan umum KCKT adalah untuk pemisahan sejumlah senyawa organik, anorganik, maupun senyawa biologis; analisis ketidakmurnian (impurities); analisis senyawa-senyawa tidak mudah menguap (non-volatil); penentuan molekul-molekul netral, ionik, maupun zwitter ion; isolasi dan pemurnian senyawa serta pemisahan senyawa-senyawa yang strukturnya hampir sama. KCKT merupakan metode yang tidak destruktif dan dapat digunakan baik untuk analisis kualitatif maupun kuantitatif (Gandjar dan Rohman, 2007).

Dari uraian di atas peneliti tertarik melakukan penetapan kadar tablet pirasetam generik dan merek dagang yaitu dengan metode KCKT menggunakan fasa gerak asetonitril-buffer posfat pH 6 (30:70) dengan kolom C-18 dan laju alir 1,0 ml/menit pada panjang gelombang 205 nm serta melakukan validasi metode untuk memenuhi persyaratan uji validasi metode ini dilakukan uji akurasi, presisi, batas deteksi (Limit of Detection), dan batas kuantitasi (Limit of Quantitation).

1.2 Perumusan Masalah

Berdasarkan uraian di atas, maka rumusan masalah penelitian adalah sebagai berikut :

a. apakah metode KCKT dengan fasa gerak asetonitril-buffer posfat pH 6 dengan berbagai perbandingan tertentu dapat digunakan pada penetapan kadar pirasetam dalam sediaan tablet dan memberikan uji validasi metode yang memenuhi syarat ?

b. apakah kadar pirasetam dalam sediaan tablet dengan nama generik dan nama dagang yang beredar di pasaran dapat memenuhi persyaratan kadar yang ditetapkan Farmakope Indonesia Edisi V tahun 2014 ?

c. apakah pirasetam dalam sediaan tablet dengan nama generik memiliki kadar yang sama dengan pirasetam dengan nama dagang ?

1.3 Hipotesis

Hipotesis dalam penelitian ini adalah :

a. metode KCKT dengan menggunakan fasa gerak asetonitril-buffer posfat pH 6 dengan perbandingan tertentu dapat digunakan pada penetapan kadar pirasetam dalam sediaan tablet dan memberikan uji validasi metode yang memenuhi syarat.

b. kadar pirasetam dalam sediaan tablet dengan nama generik dan nama dagang yang beredar di pasaran dapat memenuhi persyaratan kadar yang ditetapkan Farmakope Indonesia Edisi V tahun 2014.

c. pirasetam dalam sediaan tablet dengan nama generik memiliki kadar yang sama dengan pirasetam dalam sediaan tablet dengan nama dagang.

1.4 Tujuan penelitian

Tujuan dari penelitian ini adalah untuk mengetahui :

a. kadar pirasetam dalam sediaan tablet serta menguji validasi dengan metode KCKT.

b. kesesuaian kadar tablet pirasetam dengan nama generik dan nama dagang yang beredar di pasaran dengan persyaratan Farmakope Indonesia Edisi V tahun 2014.

c. kadar pirasetam dalam sediaan tablet dengan nama generik dan nama dagang.

1.5 Manfaat penelitian

Manfaat dalam penelitian ini adalah :

a. pengembangan ilmu bahwa penetapan kadar pirasetam dapat dilakukan dengan KCKT dengan fasa gerak asetonitril-buffer posfat pH 6 menggunakan kolom C-18 dengan berbagai perbandingan tertentu.

b. sebagai metode analisa kuantitatif baru bagi industri farmasi pada penetapan kadar pirasetam pada tablet dengan metode KCKT.

PENETAPAN KADAR PIRASETAM TABLET DENGAN NAMA GENERIK DAN NAMA DAGANG SECARA

KROMATOGRAFI CAIR KINERJA TINGGI (KCKT) ABSTRAK

Pirasetam adalah salah satu obat nootropika yang mempunyai bermacam– macam efek fisiologis yang mungkin ditimbulkan oleh pemulihan ketidakstabilan membran sel. Obat ini digunakan untuk mengobati pasien yang menderita penyakit gangguan jiwa, vertigo, dan sindrom otak organik. Obat dengan nama generik merupakan obat yang harganya murah dibandingkan obat merek dagang. Masyarakat menganggap obat generik yang harganya murah tidak memiliki mutu sebaik obat merek dagang. Tujuan dari penelitian ini adalah untuk mengetahui kadar pirasetam dalam tablet generik dan dagang serta menguji validasi metode secara kromatografi cair kinerja tinggi (KCKT).

Sampel yang digunakan dalam penelitian adalah tablet pirasetam nama generik dari dua perusahan obat yaitu dari PT. A dan PT. B, sedangkan untuk tablet pirasetam dengan nama dagang diperoleh dari PT. C, PT. D, PT. E dan PT. F. Penetapan kadar pirasetam dilakukan secara Kromatografi Cair Kinerja Tinggi (KCKT) menggunakan kolom C-18 (4,6 mm × 25 cm), optimasi fasa gerak asetonitril-buffer posfat pH 6 dengan berbagai perbandingan yaitu (90:10), (80:20), (70:30) laju alir 1,0 ml/menit dan 1,5 ml/menit dengan detektor 205 nm. Untuk menguji validitas metode ini, dilakukan uji akurasi, presisi, batas deteksi, dan batas kuantitasi.

Hasil penelitian diperoleh kadar pirasetam tablet berturut-turut, untuk sediaan generik PT. A (99,778 ± 1,72)%; PT. B (101,275 ± 2,67)%. Sedangkan untuk tablet dengan nama dagang Latropil® (101,058 ± 1,17)%; Neurotam® (101,756 ± 0,46)%; Resibron® (100,441 ± 2,97)%; Revolan® (101,323 ± 2,05)%. Hasil uji validasi dari metode ini diperoleh persen perolehan kembali 100,39% dengan simpangan baku relatif 1,65 %, ini menunjukkan bahwa metode ini memiliki ketepatan dan ketelitian yang baik dengan limit deteksi 2,6945 µg/ml dan limit kuantitasi 8,9818 µg/ml.

Kata Kunci: KCKT, Pirasetam, Nama Generik, Nama Dagang, Asetonitril, Buffer

BAB V KESIMPULAN DAN SARAN ... 34

5.1 Kesimpulan ... 34

5.2 Saran ... 34

DAFTAR PUSTAKA ... 35

DAFTAR TABEL

Tabel Halaman

4.1 Hasil Optimasi Perbandingan Fasa Gerak dan Laju Alir ... 27 4.2 Perbandingan Retention time, Area, Height, dan Tailing

factor dari hasil Spiking ... 29 4.3 Kadar Rata-rata Pirasetam dalam Tablet ... 31 4.4 Data Hasil Uji Validasi Metode dari Tablet Generik

(PT. A) ... 32

DAFTAR GAMBAR

Gambar Halaman

2.1 Struktur Pirasetam ... 5 2.2 Diagram Skematik Alat KCKT ... 10 2.3 Tipe Injektor Katup Jalan-Kitar ... 12 4.1 Kromatogram Pirasetam dengan Fasa Gerak Asetonitril-Buffer

posfat pH 6 (30:70) laju alir 1,0 ml/menit ... 25 4.2 Kromatogram Pirasetam dengan Fasa Gerak Asetonitril-Buffer

posfat pH 6 (20:80) laju alir 1,0 ml/menit ... 26 4.3 Kromatogram Pirasetam dengan Fasa Gerak Asetonitril-Buffer

posfat pH 6 (10:90) laju alir 1,0 ml/menit ... 26 4.4 Kromatogram Pirasetam dengan Fasa Gerak Asetonitril-Buffer

posfat pH 6 (30:70) laju alir 1,5 ml/menit ... 26 4.5 Kromatogram Pirasetam dengan Fasa Gerak Asetonitril-Buffer

posfat pH 6 (20:80) laju alir 1,5 ml/menit ... 27 4.6 Kromatogram Pirasetam dengan Fasa Gerak Asetonitril-Buffer

posfat pH 6 (10:90) laju alir 1,5 ml/menit ... 27 4.7 Kromatogram Pirasetam Sebelum Penambahan Baku Secara

KCKT ... 28 4.8 Kromatogram Pirasetam Setelah Penambahan Baku Secara

KCKT ... 29 4.9 Kurva Kalibrasi Pirasetam dalam Sediaan Tablet ... 30

DAFTAR GAMBAR LAMPIRAN

Gambar Halaman

1 Kromatogram Pirasetam (5 µg/ml) C-18 asetonitril-buffer posfat

pH 6 (30:70) laju alir 1,0 ml/menit ... 37

2 Kromatogram Pirasetam (10 µg/ml) C-18 asetonitril-buffer posfat pH 6 (30:70) laju alir 1,0 ml/menit ... 37

3 Kromatogram Pirasetam (20 µg/ml) C-18 asetonitril-buffer posfat pH 6 (30:70) laju alir 1,0 ml/menit ... 37

4 Kromatogram Pirasetam (30 µg/ml) C-18 asetonitril-buffer posfat pH 6 (30:70) laju alir 1,0 ml/menit ... 38

5 Kromatogram Pirasetam (50 µg/ml) C-18 asetonitril-buffer posfat pH 6 (30:70) laju alir 1,0 ml/menit ... 38

6 Kromatogram Pirasetam Generik PT. A ... 41

7 Kromatogram Pirasetam Generik PT. B ... 44

8 Kromatogram Pirasetam Merek Latropil PT. C ... 47

9 Kromatogram Pirasetam Merek Neurotam PT. D ... 50

10 Kromatogram Pirasetam Merek Resibron PT. E ... 53

11 Kromatogram Pirasetam Merek Revolan PT. F ... 56

12 Kromatogram recovery Pada Rentang 80% Tanpa Penambahan Baku ... 60

13 Kromatogram recovery Pada Rentang 80% Setelah Penambahan Baku ... 60

14 Kromatogram recovery Pada Rentang 100% Tanpa Penambahan Baku ... 61

15 Kromatogram recovery Pada Rentang 100% Setelah Penambahan Baku ... 61

16 Kromatogram recovery Pada Rentang 120% Tanpa Penambahan Baku ... 62

17 Kromatogram recovery Pada Rentang 120% Setelah Penambahan

Baku ... 62

18 Alat KCKT ... 70

19 Sonikator ... 70

DAFTAR LAMPIRAN

Lampiran Halaman

1. Kromatogram Kurva Kalibrasi ... 37

2. Perhitungan Persamaan Regresi Pirasetam Baku ... 39

3. Perhitungan Batas Deteksi (LOD) dan Batas Kuantitasi (LOQ) Pirasetam ... 40

4. Kromatogram Hasil Penyuntikan Pirasetam Generik PT. A .... 41

5. Kromatogram Hasil Penyuntikan Pirasetam GenerikPT. B ... 44

6. Kromatogram Hasil Penyuntikan Pirasetam Merek Latropil PT. C ... 47

7. Kromatogram Hasil Penyuntikan Pirasetam Merek Neurotam PT. D ... 50

8. Kromatogram Hasil Penyuntikan Pirasetam Merek Resibron PT. E ... 53

9. Kromatogram Hasil Penyuntikan Pirasetam Merek Revolan PT. F ... 56

10. Hasil Pengolahan Data Penetapan Kadar Pirasetam... 59

11. Kromatogram Hasil Penyuntikan dari Pirasetam Tablet dan Bahan Baku pada Persen Perolehan Kembali pada Rentang 80%, 100%, dan 120% ... 60

12. Perhitungan Persen Perolehan kembali ... 63

13. Hasil Pengolahan Data Persen Perolehan Kembali Pada Rentang 80%, 100%, dan 120% ... 68

14. Tabel Distribusi t ... 69

15. Alat yang Digunakan dalam Penelitian ... 70