Pertumbuhan Eksplan Bunga Betina Kelapa Sawit (Elaeis guineensis Jacq.) Pada Media MS Dengan Kombinasi 2,4D Dan BAP

(1)

PERTUMBUHAN EKSPLAN BUNGA BETINA KELAPA

SAWIT (

Elaeis guineensis

Jacq.) PADA MEDIA MS DENGAN

KOMBINASI 2,4-D DAN BAP

SKRIPSI

Diajukan untuk melengkapi tugas dan memenuhi syarat mencapai gelar Sarjana Sains

SITI SHOFIYA NASUTION 090805022

DEPARTEMEN BIOLOGI

FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM UNIVERSITAS SUMATERA UTARA

(2)

PERSETUJUAN

Judul : PERTUMBUHAN EKSPLAN BUNGA BETINA

KELAPA SAWIT (Elaeis guineensis Jacq.) PADA MEDIA MS DENGAN KOMBINASI 2,4-D DAN BAP

Kategori : SKRIPSI

Nama : SITI SHOFIYA NASUTION

Nomor Induk Mahasiswa : 090805022

Program Studi : SARJANA (S1) BIOLOGI

Departemen : BIOLOGI

Fakultas : MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN

ALAM (FMIPA) UNIVERSITAS SUMATERA UTARA

Diluluskan di

Medan, April 2014

Komisi Pembimbing :

Pembimbing 2 Pembimbing 1

Dra. Isnaini Nurwahyuni, M. Sc Dr. Suci Rahayu, M.Si NIP. 196005231985022001 NIP. 196506291992032002

Diketahui/Disetujui Oleh

Departemen Biologi FMIPA USU Ketua,

Dr. Nursahara Pasaribu, M.Sc NIP. 196301231990032001

(3)

PERTUMBUHAN EKSPLAN BUNGA BETINA KELAPA SAWIT (Elaeis

guineensis Jacq.) PADA MEDIA MS DENGAN KOMBINASI 2,4-D DAN

BAP

ABSTRAK

Penelitian tentang “Pertumbuhan Eksplan Bunga Betina Kelapa Sawit (Elaeis guineensis Jacq.) pada Media MS dengan Kombinasi 2,4-D dan BAP” telah dilakukan di Laboratorium Kultur Jaringan Tumbuhan Departemen Biologi Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Universitas Sumatera Utara dari bulan Januari 2013 sampai dengan bulan Desember 2013. Penelitian yang bertujuan untuk mengetahui kombinasi 2,4-D dan BAP terbaik pada induksi kalus dan pertumbuhan kultur eksplan bunga betina kelapa sawit (Elaeis guineensis

Jacq.) ini menggunakan Rancangan Acak Lengkap Faktorial 2 faktor dengan taraf 2,4-D yaitu 0; 325; 400; 475 µ M dan 4 taraf BAP yaitu 0; 25; 50; 75 µM. Hasil analisis statistik menunjukkan bahwa interaksi kedua zat pengatur tumbuh tersebut memberikan pengaruh yang tidak berbeda nyata terhadap waktu tumbuh dan berat kalus. Perlakuan yang terbaik berdasarkan waktu tumbuh yaitu 2,4-D 475 µM tanpa BAP, sedangkan berat basah kalus terbaik pada kombinasi 2,4-D 400 µM dan BAP 25 µM. Persentase kultur yang membentuk kalus embriogenik sebesar 44,44% dan menghasilkan kalus berwarna kuning sebesar 55,56%, kuning kecoklatan 30,56%, dan coklat 13,88%.

(4)

THE EFFECT OF 2,4-D AND BAP COMBINATION IN MS MEDIA ON THE GROWTH OF THE IMMATURE INFLORESCENCES OF OIL

PALM (Elaeis guineensis Jacq.) ABSTRACT

The research of “The Effect of 2,4-D and BAP Combination in MS Media on The Growth of The Immature Inflorescences of Oil Palm (Elaeis guineensis Jaqc.)”

has been done in Plant Tissue Culture Laboratory, University of Sumatera Utara from January 2013 to December 2013. The aim of this research was to know the effects combination 2,4-D and BAP for callus induction and the growth of the immature inflorescences of oil palm (Elaeis guineensis Jacq.) using Complete Randomized Design, two factors which are 4 levels of 2,4-D concentrations: 0; 325; 400; 475 µM and 4 concentrations of BAP: 0; 25; 50; 75 µM. The result of statistic analysis indicated that the interaction of 2,4-D and BAP give have no significant effect of callus growth in culture and the percentage of callus fresh weight. The result showed that the treatment 2,4-D 475 µM without BAP can result the fastest time of callus induction. Meanwhile, the best treatment of callus fresh weight found in 2,4-D 400 µM and BAP 25 µM. Percentage of the culture that formed embriogenic callus is 44,44% and produced yellow callus 55,56%, yellow brown callus 30,56% and brown callus 13,88%.

(5)

DAFTAR ISI

Halaman

Persetujuan i

Abstrak ii

Abstract iii

Daftar Isi iv

Daftar Tabel vi

Daftar Gambar vii

Daftar Lampiran viii

BAB 1. PENDAHULUAN

1.1. Latar Belakang 1

1.2. Permasalahan 2

1.3. Tujuan Penelitian 2

1.4. Hipotesis 3

1.5. Manfaat Penelitian 3

BAB 2. TINJAUAN PUSTAKA

2.1. Botani Tanaman Kelapa Sawit 4

2.2. Kultur Jaringan Kelapa Sawit 5

2.3. Eksplan 6

2.4. Media Kultur Jaringan 7

2.5. Zat Pengatur Tumbuh 8

2.5.1. Auksin 8

2.5.2. Sitokinin 9

BAB 3. METODE PENELITIAN

3.1. Waktu dan Tempat 11

3.2. Bahan dan Alat 11

3.3. Rancangan Percobaan 11

3.4. Cara Kerja 12

3.4 1. Sterilisasi Alat dan Bahan 12

3.4.2. Pembuatan Media 13

3.4.3. Sterilisasi Eksplan 13

3.4.4. Penanaman Eksplan 14

3.4.5. Pemeliharaan Kultur Bunga Kelapa Sawit 14

3.4.6. Parameter pengamatan 14

3.5. Analisis Data 15

BAB 4. HASIL DAN PEMBAHASAN

4.1. Persentase Kultur yang Membentuk Kalus 16 4.2. Waktu Pertumbuhan Kalus Bunga Betina Kelapa Sawit 18

(6)

4.3. Persentase Kultur yang Membentuk Kalus Embriogenik 19

4.4. Warna Kalus 21

4.5. Berat Basah Kalus 22

BAB 5. KESIMPULAN DAN SARAN

5.1. Kesimpulan 24

5.2. Saran 24

DAFTAR PUSTAKA 25

(7)

DAFTAR TABEL

Nomor

Tabel Judul Halaman

4.1. Persentase Kultur yang Membentuk Kalus 17 4.2. Rata-rata Waktu Tumbuh Kalus (Hari) pada Perlakuan

Kombinasi 2,4-D dan BAP

19 4.3. Rata-rata Berat Basah Kalus (g) pada Perlakuan

Kombinasi 2,4-D dan BAP

(8)

DAFTAR GAMBAR

Nomor

Gambar Judul Halaman

3.1. Bunga betina kelapa sawit 12

4.1. Kalus bunga betina kelapa sawit dalam kultur in vitro 16

4.2. Eksplan mati dalam kultur in vitro 19

4.3. Kalus embriogenik 20

4.4. Hubungan persentase kultur membentuk kalus embriogenik dengan kombinasi ZPT

21 4.5. Warna kalus kelapa sawit (Elaeis guineensis Jacq.) pada

perlakuan kombinasi 2,4-D dan BAP

(9)

DAFTAR LAMPIRAN

Nomor

Lamp. Judul Halaman

1. Persentase Data Pengamatan Kultur yang Membentuk Kalus

29 2. Data Pengamatan Waktu Tumbuh Kalus (Hari Setelah

Tanam)

30 3. Persentase Kultur yang Membentuk Kalus Embriogenik 32

4. Data Pengamatan Warna Kalus 33

5. Persentase Warna Kalus 34

6. Data Pengamatan Berat Basah Kalus (g) 35

7. Komposisi Media Murashige-Skoog (MS) 37

(10)

PERTUMBUHAN EKSPLAN BUNGA BETINA KELAPA SAWIT (Elaeis

guineensis Jacq.) PADA MEDIA MS DENGAN KOMBINASI 2,4-D DAN

BAP

ABSTRAK

(11)

THE EFFECT OF 2,4-D AND BAP COMBINATION IN MS MEDIA ON THE GROWTH OF THE IMMATURE INFLORESCENCES OF OIL

PALM (Elaeis guineensis Jacq.) ABSTRACT

The research of “The Effect of 2,4-D and BAP Combination in MS Media on The Growth of The Immature Inflorescences of Oil Palm (Elaeis guineensis Jaqc.)”

(12)

BAB 1 PENDAHULUAN

1.1. Latar Belakang

Tanaman kelapa sawit (Elaeis guineensis Jacq.) merupakan tanaman penghasil minyak nabati yang mempunyai kekhasan tersendiri dari tanaman kelapa umumnya dan memiliki nilai ekonomi yang cukup tinggi. Menurut Sunarko (2012), produksi minyak sawit di Indonesia terus mengalami peningkatan. Tahun 1997, produksi minyak kelapa sawit hanya 5,5 juta ton. Tahun 2007, produksi meningkat menjadi 17,3 juta ton. Tahun 2011, produksi minyak sawit lebih dari 20 juta ton. Kenaikan produksi ini terutama disebabkan oleh pertambahan luas areal perkebunan kelapa sawit, perbaikan bibit, dan pengelolaan kebun kelapa sawit yang semakin intensif.

Penyediaan bibit kelapa sawit selama ini dilakukan dengan dua cara, yaitu secara generatif dan vegetatif. Perbanyakan generatif menggunakan benih dari biji hasil persilangan Dura dengan Pisifera (Lubis, 1992). Perbanyakan secara vegetatif, salah satunya dilakukan dengan teknik kultur jaringan. Keunggulan dari teknik kultur jaringan adalah mampu menghasilkan banyak bibit dalam waktu yang relatif singkat (Ginting & Fatmawati, 2003).

Dalam kultur jaringan, ada dua golongan zat pengatur tumbuh (ZPT) yang penting yaitu sitokinin dan auksin. Penambahan auksin atau sitokinin eksogen mengubah level ZPT endogen sel (Gunawan, 1992). Dalam penelitian ini digunakan auksin asam 2,4-diklorofenoksiasetat (2,4-D) yang bersifat stabil karena tidak mudah mengalami kerusakan oleh cahaya maupun pemanasan pada saat sterilisasi (Hendaryono & Wijayani, 1994). Sitokinin yang digunakan adalah benzil amino purin (BAP). Menurut Noggle & Fritz (1983), BAP memiliki sifat aktif dan struktur yang mirip dengan kinetin dan juga aktif dalam proliferasi dan pertumbuhan kalus.

Bahan tanaman yang dikulturkan disebut eksplan. Eksplan yang digunakan pada penelitian ini adalah bunga betina kelapa sawit. Keunggulan eksplan dari

(13)

bunga yaitu tidak terlalu merusak pohon induk (ortet), dan memiliki jumlah individu bunga yang banyak. Kelemahan eksplan dari bunga adalah induksi kalus membutuhkan waktu lama (Ginting & Fatmawati, 2003). Pengurangan waktu untuk induksi kalus dapat dilakukan dengan pemberian kombinasi hormon dan konsentrasi hormon yang sesuai. Oleh karena itu, dilakukan penelitian ini.

Penelitian kultur kelapa sawit dari eksplan bunga betina sudah pernah dilakukan Guedes et al., (2011). Penelitian tersebut dilakukan dengan penambahan 2,4-D dengan konsentrasi (0; 225; 450; dan 675 µ M). Dari hasil penelitian diperoleh dengan penambahan 2,4-D 225 µM dapat menginduksi kalus embriogenik terbaik pada eksplan. Perlakuan BAP dengan konsentrasi (0; 25; dan 50 µM) tidak memberikan efek signifikan. Dari hasil penelitian diperoleh dengan penambahan BAP 25 µM memberikan hasil terbaik dalam menginduksi kalus embriogenik eksplan bunga kelapa sawit.

Berdasarkan penelitian tersebut, maka dalam penelitian ini eksplan bunga kelapa sawit dikulturkan dalam media Murashige dan Skoog (MS) dengan kombinasi 2,4-D dan BAP. Media kultur diberi perlakuan 2,4-D dengan konsentrasi (0; 325; 400; dan 475 µ M) dan BAP dengan konsentrasi (0; 25; 50; dan 75 µM).

1.2. Permasalahan

Perbanyakan benih kelapa sawit dengan teknik kultur jaringan saat ini telah banyak dilakukan. Namun, untuk induksi dan pertumbuhan kalus membutuhkan waktu yang lama. Oleh karena itu, dalam penelitian ini digunakan berbagai konsentrasi 2,4-D dan BAP terhadap inisiasi dan pertumbuhan eksplan bunga betina kelapa sawit. Adapun permasalahan yang dikaji dari penelitian ini adalah berapa konsentrasi 2,4-D dan BAP yang tepat untuk mempersingkat waktu dalam menginduksi dan pertumbuhan bunga betina kelapa sawit dalam kultur in vitro. 1.3. Tujuan Penelitian

Tujuan penelitian ini adalah untuk mendapatkan kombinasi 2,4-D dan BAP optimum terhadap pertumbuhan eksplan bunga betina kelapa sawit dengan kultur

(14)

1.4. Hipotesis

Kombinasi hormon 2,4-D dan BAP yang tepat dapat menginduksi pertumbuhan kalus dan memacu pertumbuhan eksplan bunga betina kelapa sawit dengan kultur

in vitro pada media MS. 1.5. Manfaat Penelitian

Penelitian ini bermanfaat untuk mengetahui kombinasi 2,4-D dan BAP optimum terhadap pertumbuhan eksplan bunga betina kelapa sawit dengan kultur in vitro

pada media MS. Sebagai informasi untuk penelitian selanjutnya dan dapat bermanfaat bagi perbanyakan tanaman kelapa sawit (Elaeis guineensis Jacq.).

(15)

BAB 2

TINJAUAN PUSTAKA

2.1. Botani Tanaman Kelapa Sawit

Tanaman kelapa sawit disebut dengan nama latin Elaeis guineensis Jacq. Elaeis

berasal dari Elaion yang dalam bahasa Yunani berarti minyak. Guineensis berasal dari kata Guinea yaitu Pantai Barat Afrika dan Jacq singkatan dari Jacquin seorang botanis dari Amerika (Soehardjo et al., 1998). Menurut Pandey (1981), tanaman kelapa sawit diklasifikasikan sebagai berikut:

Kingdom : Plantae

Divisi : Spermatophyta

Subdivisi : Angiospermae

Kelas : Monocotyledonae

Ordo : Arecales

Famili : Arecaceae

Genus : Elaeis

Spesies : Elaeis guineensis Jacq.

Tanaman kelapa sawit tumbuh tegak lurus dan dapat mencapai ketinggian pohon sampai 20 m. Tanaman ini berumah satu atau monoecious yaitu bunga jantan dan bunga betina terdapat pada satu pohon. Bunga jantan terdapat pada tandan bunga jantan dan bunga betina terdapat pada tandan bunga betina. Masing-masing tandan terletak terpisah dan keluar dari ketiak pelepah (Soehardjo et al., 1998). Walaupun demikian, kadang-kadang dijumpai juga bunga jantan dan betina pada satu tandan (hermaprodit) (Pahan, 2006).

Rangkaian bunga terdiri dari batang poros dan cabang-cabang meruncing yang disebut spikelet. Jumlah spikelet dalam rangkaian dapat mencapai 200 buah. Batang poros bunga jantan lebih panjang daripada bunga betina, namun jumlah spikeletnya hampir sama. Jumlah bunga tiap spikelet pada bunga jantan lebih banyak, yaitu sekitar 700 – 1.200 buah. Kadang-kadang pada tanaman kelapa

(16)

sawit terbentuk rangkaian bunga yang hermaprodit, terutama pada tanaman yang masih muda (Fauzi et al., 2002).

2.2. Kultur Jaringan Kelapa Sawit

Kultur jaringan tanaman adalah suatu teknik isolasi bagian-bagian tanaman, seperti jaringan, organ, ataupun embrio, lalu dikultur pada medium buatan yang steril sehingga bagian-bagian tanaman tersebut mampu beregenerasi dan berdiferensiasi menjadi tanaman lengkap (Winata, 1987). Yusnita (2003), menambahkan bahwa berdasarkan bagian tanaman yang dikulturkan secara lebih spesifik terdapat beberapa tipe kultur, yaitu kultur kalus, kultur suspensi sel, kultur akar, kultur pucuk tunas, kultur embrio, kultur ovul, kultur anter, dan kultur kuncup bunga. Teknik kultur jaringan pada saat ini telah berkembang menjadi teknik perkembangbiakan tumbuhan yang sangat penting pada berbagai spesies tumbuhan (Pandiangan & Subarnas, 2011).

Setiap sel mampu tumbuh dan berkembang menjadi tumbuhan normal jika dikulturkan pada nutrisi dan lingkungan yang tepat. Totipotensi yang awal masih sekitar totipotensi morfologi. Berdasarkan teori totipotensi inilah berkembang sampai pada totipotensi kimia. Pada saat ini sudah dikembangkan produksi senyawa kimia atas dasar totipotensi kimia tersebut. Senyawa kimia pada tanaman utuh alami dapat dihasilkan juga secara in vitro atau kultur jaringan tumbuhan (Zulkarnain, 2009).

Pemanfaatan utama dari kultur jaringan pada awalnya adalah untuk mendapatkan tanaman baru dalam jumlah banyak dengan waktu relatif singkat, yang mempunyai sifat fisiologi dan morfologi sama persis dengan induknya. Teknik kultur jaringan tumbuhan diharapkan dapat memperoleh tumbuhan baru yang bersifat unggul. Perbanyakan tumbuhan secara besar-besaran telah dibuktikan keberhasilannya pada perkebunan kelapa sawit dan tebu di Sumatera (Pandiangan & Subarnas, 2011).

Permintaan dunia terhadap komoditas kelapa sawit Indonesia cenderung meningkat. Hal ini mendorong adanya berbagai upaya peningkatan produksi kelapa sawit, antara lain penggunaan teknologi tinggi dalam pembudidayaan dan pengolahannya. Teknologi kultur jaringan (tissue culture) merupakan satu cara

(17)

untuk mendapatkan klon kelapa sawit dengan perlakuan khusus dari bahan biakan yang berupa jaringan muda (Fauzi et al., 2002).

Penggunaan teknik kultur jaringan pada tanaman kelapa sawit terbukti memberikan beberapa keuntungan, di antaranya dalam waktu singkat dapat dihasilkan bibit dalam jumlah banyak. Selain itu, bibit dari kultur jaringan memiliki sifat yang sama dengan induknya. Keuntungan lain adalah dapat meningkatkan produksi (Fauzi et al., 2002). Jambak (2011), perbanyakan kelapa sawit melalui kultur jaringan mampu meningkatkan produksi mencapai 25-30%, mengingat variasi produksi antar tanaman cukup tinggi yang dapat mencapai antara 60-100% dari produksi rata-rata. Produk komersil 5-6 ton minyak seperti sekarang akan dapat ditingkatkan menjadi 7-9 ton per/ha/tahun.

2.3. Eksplan

Pada prinsipnya, tahapan perbanyakan bibit kelapa sawit dengan kultur jaringan dimulai dari sepotong jaringan daun muda atau akar sebagai bahan tanaman (eksplan). Potongan-potongan jaringan daun muda diambil dari pohon induk. Pohon induk harus berasal dari hasil pengamatan mulai umur 3-9 tahun, telah dilakukan analisis tandan dan pengamatan karakter yang lain (Fauzi et al., 2002).

Seleksi bahan eksplan yang cocok merupakan faktor penting yang menentukan keberhasilan program kultur jaringan. Untuk memulai sistem kultur jaringan yang baru dengan spesies atau kultivar tanaman yang baru pula, seringkali menghendaki analisis yang sistematis terhadap potensi eksplan dari setiap tipe jaringan (Hartman et al., 1990). Oleh karena itu, Pierik (1997) mengemukakan tiga aspek utama yang harus diperhatikan dalam seleksi bahan eksplan, yaitu genotip, umur, dan kondisi fiosiologis bahan tersebut.

Potongan-potongan jaringan tersebut kemudian disemai dalam media tertentu dan akan membentuk kalus primer. Kalus primer tersebut yang dijadikan sumber perbanyakan dengan cara membentuk struktur baru dalam tahapan menuju tanaman utuh dengan proses embriogenesis somatis. Kalus primer terbentuk dalam jangka waktu 3-4 bulan dalam media cair. Setelah kalus terbentuk, dipindahkan ke media dan kurang lebih dalam waktu 2 bulan terbentuk embryoid (semacam embrio). Embryoid dipindahkan ke tabung, setelah 4 bulan tunas-tunas

(18)

daun mulai muncul dan tunas-tunas berakar sehingga akan terbentuk tanaman baru (planlet). Bibit yang berasal dari teknik kultur jaringan disebut klon (Fauzi et al., 2002).

Eksplan diambil dari bunga betina kelapa sawit. Menurut Guedes et al.

(2011),bunga dewasa menjadi salah satu yang paling menjanjikan, karena jumlah bunga yang banyak dan bunga dapat diperoleh dari tanaman dewasa tanpa menyebabkan utama kerusakan pada pohon induk. Bunga dewasa biasanya dilindungi oleh spatha sehingga mengurangi penggunaan desinfektan.

2.4. Media Kultur Jaringan

Media merupakan salah satu faktor penentu keberhasilan perbanyakan tanaman secara kultur jaringan. Berbagai komposisi media kultur telah diformulasikan untuk mengoptimalkan pertumbuhan dan perkembangan tanaman yang dikulturkan. Media kultur secara fisik dapat berbentuk cair atau padat (Yusnita, 2003).

Apabila suatu eksplan dikulturkan, jaringan eksplan tersebut mengalami perubahan-perubahan yang dinyatakan oleh Hartmann et al., (1990), sebagai situasi kritis. Di samping kekurangan suplai air dan mineral sebagai akibat menurun tekanan akar, tanaman pun kehilangan karbohidrat karena tidak ada daun-daun yang menyediakan gula ke dalam sistem floem, juga terjadi gangguan yang menyeluruh pada sistem regulasi hormon tanaman.

Kebutuhan nutrisi untuk pertumbuhan kultur in vitro yang optimal bervariasi antar spesies ataupun antar varietas. Bahkan, jaringan yang berasal dari bagian tanaman yang berbeda, berbeda kebutuhan nutrisinya. Tidak ada satu pun medium dasar yang berlaku universal untuk semua jenis jaringan dan organ. Meskipun demikian, medium dasar Murashige dan Skoog (MS) yang direvisi Murashige dan Skoog tahun 1962 adalah yang paling luas penggunaannya dibandingkan dengan media dasar lainnya (Zulkarnain, 2009). Taji et al., (1995), menambahkan bahwa pada medium MS yang direvisi banyak digunakan, terutama pada mikropropagasi tanaman dikotil dengan hasil yang memuaskan. Hal itu dikarenakan medium MS memiliki kandungan garam-garam dan nitrogen yang lebih tinggi daripada media lain.

(19)

2.5. Zat Pengatur Tumbuh

Fitohormon adalah senyawa-senyawa yang dihasilkan oleh tanaman tingkat tinggi secara endogen. Senyawa tersebut berperan merangsang dan meningkatkan pertumbuhan serta perkembangan sel, jaringan, dan organ tanaman menuju arah diferensiasi tertentu. Senyawa-senyawa lain yang memiliki karakteristik yang sama dengan hormon, tetapi diproduksi secara eksogen, dikenal sebagai zat pengatur tumbuh (ZPT). Didalam teknik kultur jaringan, kehadiran ZPT sangat nyata pengaruhnya (Pierik, 1997).

Auksin dan sitokinin berperan penting dalam manipulasi pertumbuhan tumbuhan dalam kondisi yang terkontrol dengan baik. Kebanyakan eksplan menghasilkan sejumlah auksin dan sitokinin endogen (endogenus). Dalam kultur jaringan, ZPT tambahan (eksogenus) diberikan untuk memperoleh efek pertumbuhan. Sebagai panduan umum, auksin atau sitokinin atau keduanya ditambahkan ke dalam kultur untuk memperoleh respons pertumbuhan (Pandiangan & Subarnas, 2011).

Zat pengatur tumbuh yang biasa digunakan antara lain auksin, sitokinin, dan giberelin. Hormon-hormon ini sering digunakan karena mempunyai kemampuan untuk merangsang pertumbuhan eksplan dan mempengaruhi pertumbuhan akar. Dari ketiga jenis hormon ini yang paling sering digunakan adalah auksin dan sitokinin (Wetherell, 1982).

2.5.1. Auksin

Auksin adalah sekelompok senyawa yang berfungsi merangsang pemanjangan sel-sel pucuk yang spektrum aktivitasnya menyerupai IAA (indole-3-acetic acid). Pierik (1997), menyatakan bahwa pada umumnya auksin meningkatkan pemanjangan sel, pembelahan sel, dan pembentukan akar adventif. Auksin berpengaruh pula untuk menghambat pembentukan tunas adventif dan tunas aksilar, dalam medium kultur dibutuhkan untuk meningkatkan embriogenesis somatik pada kultur suspensi sel. Konsentrasi auksin yang rendah akan meningkatkan pembentukan akar adventif, sedangkan auksin konsentrasi tinggi akan merangsang pembentukan kalus dan menekan morfogenesis (Smith, 1992).

(20)

Pemberian 2,4-D pada konsentrasi 10-7 – 10-5 M tanpa sitokinin sangat efektif untuk induksi proliferasi kalus pada kebanyakan kultur (Dodds & Roberts, 1985). Menurut Gamborg et al., (1976), senyawa tersebut dapat menekan organogenesis dan sebaiknya tidak digunakan pada kultur yang melibatkan inisiasi pucuk dan akar. Sementara itu, Pierik (1997) menganjurkan untuk membatasi penggunaan 2,4-D pada kultur in vitro karena 2,4-D dapat meningkatkan peluang terjadinya mutasi genetik dan menghambat fotosintesis pada tanaman yang diregenerasikan.

2.5.2. Sitokinin

Sitokonin adalah senyawa yang dapat meningkatkan pembelahan sel pada jaringan tanaman serta mengatur pertumbuhan dan perkembangan tanaman, sama halnya dengan kinetin (6-furfurylaminopurine). Peranan auksin dan sitokinin sangat nyata dalam pengaturan pembelahan sel, pemanjangan sel, diferensiasi sel, dan pembentukan organ (Zulkarnain, 2009).

Pemberian sitokinin ke dalam medium kultur jaringan penting untuk menginduksi perkembangan dan pertumbuhan eksplan. Senyawa tersebut dapat meningkatkan pembelahan sel, proliferasi pucuk, dan morfogenesis pucuk (Smith, 1992). Bahkan menurut George & Sherrington (1984), apabila ketersediaan sitokinin di dalam medium kultur sangat terbatas maka pembelahan sel pada jaringan yang dikulturkan akan terhambat. Akan tetapi, apabila jaringan tersebut disubkulturkan pada medium dengan kandungan sitokinin yang memadai maka pembelahan sel akan berlangsung secara sinkron.

Sitokinin yang paling banyak digunakan pada kultur in vitro adalah kinetin, benziladenin (BA atau BAP), dan zeatin. Zeatin adalah sitokinin yang disintesis secara alamiah, sedangkan kinetin dan BA adalah sitokinin sintetik (Zulkarnain, 2009). Menurut Torres (1989), menyatakan bahwa tipe morfogenesis pada kultur in vitro tergantung pada rasio serta kondisi auksin dan sitokinin. Inisiasi akar, embriogenesis, dan induksi pembentukan kalus umumnya terjadi bila terdapat rasio yang tinggi antara auksin dan sitokinin sedangkan proliferasi pucuk adventif dan pucuk aksilar apabila rasio tersebut rendah.

(21)

Penambahan auksin atau sitokinin ke dalam media kultur dapat meningkatkan konsentrasi hormon endogen di dalam sel sehingga menjadi faktor memicu dalam proses tumbuh dan perkembangan jaringan (Poonsapaya et al., 1989). Pada penelitian Kumar et al., (2012), menyatakan induksi kalus Calamus travancorius terbaik terdapat pada penambahan 2,4-D 10 mg/L, NAA 4 mg/L, dan IBA 5 mg/L pada media MS. Sedangkan penelitian Aslam dan Khan (2009) pada eksplan pucuk P h o e n i x d a c t y l i f e r a, menyatakan penambahan 2,4-D dengan konsentrasi 45,24 µM dapat memicu indusi kalus tertinggi. Dan penambahan BAP 7,84 µM dapat memicu regenerasi tunas tertinggi.

(22)

BAB 3

METODE PENELITIAN

3.1. Waktu dan Tempat

Penelitian ini dilaksanakan pada bulan Maret 2013 – Desember 2013. Penelitian dilakukan di Laboratorium Kultur Jaringan Departemen Biologi, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Universitas Sumatera Utara, Medan. 3.2. Bahan dan Alat

Bahan tanaman yang digunakan dalam penelitian ini adalah bunga betina tanaman kelapa sawit yang diperoleh dari kebun percobaan pusat penelitian kelapa sawit (PPKS) Bukit Sentang Desa Securai Utara Kecamatan Babalan Kabupaten Langkat sebagai sumber eksplan. Bahan kimia yang digunakan adalah bahan-bahan penyusun media MS (Murashige dan Skoog, 1962), 2,4-D, BAP, HCl 0,1N, NaOH 0,1N, sukrosa, agar, arang aktif, larutan pemutih (NaOCl 5,25%), detergen, fungisida, alkohol 70%, antibiotik, akuades, spiritus, dan HgCl2.

Alat yang digunakan pada penelitian ini adalah erlenmeyer, gelas ukur, pipet serologi, propipet, pH-meter, autoklaf, entkas, laminar air flow, rak kultur, kertas saring, aluminium foil, plastik, karet, botol selai, shaker, botol kultur, alat diseksi, beaker glass, neraca digital, mikroskop, bunsen, cawan petri, kain hitam, mancis, dan handsprayer.

3.3. Rancangan Percobaan

Penelitian ini menggunakan metode percobaan dengan rancangan acak lengkap (RAL), faktorial dengan 2 faktor, yaitu:

Faktor 1 (A) : Perlakuan media MS dengan penambahan ZPT 2,4-D A0 : Konsentrasi 0 µM (sebagai kontrol)

A1 : Konsentrasi 325 µM A2 : Konsentrasi 400 µM A3 : Konsentrasi 475 µM

(23)

Faktor 2 (B) : Perlakuan media MS dengan penambahan ZPT BAP B0 : Konsentrasi 0 µM (sebagai kontrol)

B1 : Konsentrasi 25 µM B2 : Konsentrasi 50 µM B3 : Konsentrasi 75 µM

Sehingga diperoleh kombinasi perlakuan 4 X 4 = 16 perlakuan untuk masing-masing kelompok percobaan dengan masing-masing-masing-masing ulangan sebanyak 3 kali. Rincian kombinasi perlakuan sebagai berikut:

A0B0 A1B0 A2B0 A3B0 A0B1 A1B1 A2B1 A3B1 A0B2 A1B2 A2B2 A3B2 A0B3 A1B3 A2B3 A3B3 Sehingga diperoleh jumlah total sebanyak 48 botol.

Gambar 3.1. Bunga betina kelapa sawit: (a) Rangkaian bunga betina; (b) Spikelet; (c) Individu bunga betina

3.4. Cara Kerja

3.4.1. Sterilisasi Alat dan Bahan

Seluruh alat gelas dan alat diseksi yang digunakan dicuci dengan air bersih dan dikeringkan. Alat-alat tersebut dibungkus kertas dan disterilisasi bersamaan dengan akuades dalam botol selai yang telah ditutup aluminium foil dalam autoklaf pada suhu 1210C dengan tekanan 15 psi selama 60 menit. Alat dan

(24)

bahan disimpan di ruang pemeliharaan kultur yang telah aseptik dengan cara disemprot setiap hari dengan menggunakan alkohol 70%. Suhu ruangan tetap dijaga berkisar 250C±20C dengan pengaturan AC.

3.4.2. Pembuatan Media

Media yang digunakan adalah media MS (Lampiran 7 halaman 38) yang diberi perlakuan tanpa penambahan 2,4-D untuk perlakuan A0, dengan penambahan 2,4-D sebanyak 325 µM untuk perlakuan A1, 400 µM untuk perlakuan A2, 475 µM untuk perlakuan A3. Tanpa penambahan BAP untuk perlakuan B0, dengan penambahan BAP sebanyak 25 µM untuk perlakuan B1, 50 µM untuk perlakuan B2, 75 µM untuk perlakuan B3. Tahap awal pembuatan media adalah pembuatan larutan stok terlebih dahulu yaitu hara makro, mikro, iron, dan vitamin. Unsur-unsur lain ditimbang sesuai kebutuhan seperti sukrosa dan agar. Pembuatan media sebanyak 1000 ml.

Unsur-unsur hara makro, mikro, iron, vitamin, sukrosa, ZPT dimasukkan ke dalam gelas piala dan ditambah dengan akuades sehingga volume menjadi 1000 ml. Pada media tersebut ditambahkan arang aktif 3 mg/l kemudian ZPT 2,4-D dan BAP sesuai dengan perlakuan. Keasaman media diukur dengan menggunakan pH meter sekitar 5,8. Untuk mendapatkan keasaman yang diharapkan, ditambah dengan HCl 0,1 N atau NaOH 0,1 N. Ke dalam media dimasukkan agar, lalu dipanaskan hingga larutan menjadi bening. Larutan tersebut dituang ke dalam botol kultur lalu ditutup dengan aluminium foil dan plastik kemudian diikat dengan karet. Media diautoklaf pada suhu 1210C dengan tekanan 15 psi selama 10 menit, media disimpan di ruang kultur lebih kurang selama 1 minggu sebelum digunakan.

3.4.3. Sterilisasi Eksplan

Eksplan berupa bunga betina kelapa sawit dibersihkan dengan air mengalir hingga bersih. Selanjutnya eksplan direndam dalam larutan fungisida 2 g/l dan dishaker

pada 100 rpm selama 30 menit. Eksplan dibilas dengan akuades steril, dan direndam dalam larutan antibiotik. Eksplan dibilas dengan akuades, lalu dimasukkan dalam larutan pemutih 10% selama 10 menit lalu dibilas 3 kali

(25)

dengan akuades steril. Kemudian eksplan direndam kembali dengan larutan HgCl2 1 g/l selama 15 menit lalu dibilas 3 kali dengan akuades steril. Eksplan dikeringkan di atas kertas saring steril dalam cawan petri.

3.4.4. Penanaman Eksplan

Sebelum melakukan penanaman diusahakan agar ruangan dalam keadaan bersih. Penanaman dilakukan di dalam Laminar Air Flow (LAF) yang telah disterilisasi dengan UV. Alat-alat diseksi, lampu bunsen dan alkohol 70% dipersiapkan terlebih dahulu. Salah satu sisi bunga betina dilukai lalu satu per satu ditanam dalam media. Botol media hanya diisi oleh satu eksplan saja. Setiap kali melakukan penyayatan pisau terlebih dahulu dicelupkan ke dalam alkohol 70% lalu pisau dibakar. Botol berisi eksplan kemudian ditutup dengan aluminium foil

dan diikat dengan karet.

3.4.5. Pemeliharaan Kultur Bunga Kelapa Sawit

Eksplan yang telah ditanam di dalam botol kultur diletakkan pada rak pemeliharaan dengan kondisi ruangan yang steril. Botol kultur diletakkan di ruang tanpa cahaya. Botol-botol yang berisi eksplan tersebut disusun dengan rapi sehingga memudahkan dalam pengamatan. Ruangan diupayakan dalam keadaan steril atau dengan menyemprotkan alkohol 70% setiap harinya sampai eksplan membentuk kalus.

3.4.6. Parameter Pengamatan

Parameter yang diamati dalam penelitian ini adalah:

a. Waktu pertumbuhan eksplan bunga betina kelapa sawit

Pertumbuhan kultur bunga betina kelapa sawit diamati pada hari awal tumbuhnya kalus.

b. Persentase kultur yang membentuk kalus (%)

Persentase eksplan berkalus =

c. Persentase kultur yang membentuk kalus embriogenik (%)

Persentase kalus embriogenik =

(26)

d. Warna kalus

e. Berat basah kultur (g)

Berat basah kultur dihitung pada akhir penelitian.

3.5. Analisis Data

Data dianalisis dengan Análisis of Variance (ANOVA). Jika terdapat perbedaan yang nyata (p>0.05), dilanjutkan dengan Duncan New Multiple Range Test (DNMRT) (Sastrosupadi, 2004).

(27)

BAB 4

HASIL DAN PEMBAHASAN

4.1. Persentase Kultur yang Membentuk Kalus

Kalus merupakan sekumpulan sel yang belum berdiferensiasi dan tumbuh dari proliferasi sel-sel yang tidak terorganisasi. Kalus terbentuk akibat pelukaan pada permukaan eksplan dan pengaruh perlakuan ZPT yang diberikan pada medium kultur (Zulkarnain, 2009). Kalus diinisiasi secara in vitro dengan meletakkan bagian kecil tanaman (eksplan) pada medium pertumbuhan pada kondisi aseptik (George & Sherington, 1984).

Gambar 4.1. Kalus bunga betina kelapa sawit dalam kultur in vitro: a. kalus; b. eksplan bunga betina kelapa sawit; c. media

Gambar 4.1. dapat dilihat eksplan mengalami pembengkakan. Pembengkakan tersebut merupakan interaksi eksplan dengan media tumbuh, ZPT, dan lingkungan tumbuh. Kalus mulai terbentuk pada bagian bawah eksplan yang bersentuhan dengan media. Hal ini dipengaruhi oleh proses pengambilan nutrisi medium eksplan. Penyerapan unsur hara lebih baik karena terjadi kontak langsung antara eksplan dan nutrisi media. Kalus muncul pada bagian yang terluka karena adanya rangsangan dari jaringan pada eksplan untuk menutupi luka. Hal ini sesuai dengan pendapat Santoso (2001), kalus terbentuk pada tanaman yang mengalami pelukaan dan dapat pula terbentuk akibat tanaman mengalami stres.

Pengamatan kultur yang membentuk kalus dapat dilihat pada Lampiran 1 a b

(28)

adalah 75% yaitu sebanyak 36 dari 48 botol perlakuan. Pengaruh perlakuan 2,4-D dan BAP terhadap persentase kultur yang hidup ditampilkan pada Tabel 4.1. Tabel 4.1. Persentase Kultur yang Membentuk Kalus

ZPT BAP

Rataan

2,4-D B0 B1 B2 B3

A0 0

(0%) 0 (0%) 0 (0%) 0 (0%) 0 (0%)

A1 3

(100%) 3 (100%) 3 (100%) 3 (100%) 12 (100%)

A2 3

(100%) 3 (100%) 3 (100%) 3 (100%) 12 (100%)

A3 3

(100%) 3 (100%) 3 (100%) 3 (100%) 12 (100%) Rataan 9

(75%) 9 (75%) 9 (75%) 9 (75%) 36 (75%) Keterangan : Konsentrasi A0 (0 µM), A1 (325 µM), A2 (400 µM), A3 (475 µM)

Konsentrasi B0 (0 µM), B1 (25 µM), B2 (50 µM), B3 (75 µM)

Berdasarkan Tabel 4.1. dapat dilihat bahwa pada perlakuan tanpa ZPT 2,4-D (A0) tidak menunjukkan adanya pertumbuhan kalus. Sedangkan pada perlakuan dengan penambahan 2,4-D menunjukkan adanya pertumbuhan kultur menjadi kalus sebesar 100% pada masing-masing perlakuan. Hal ini mungkin disebabkan kurangnya hormon auksin endogen yang terkandung dalam eksplan tersebut sehingga membutuhkan ZPT auksin yang tinggi untuk merangsang pembelahan sel menjadi kalus.

Komponen media yang mempengaruhi proses regenerasi tanaman secara

in vitro salah satunya adalah komposisi ZPT (Taji et al. 2002). Morfogenesis kalus tergantung pada keseimbangan auksin dan sitokinin di dalam media. Interaksi antara ZPT endogen tanaman dan ZPT eksogen yang diserap dalam media dapat menentukan arah perkembangan kalus (Asnawati et al. 2002).

Menurut Pierik (1997), sangat sulit untuk menerapkan teknik kultur jaringan pada upaya perbanyakan tanaman tanpa melibatkan ZPT. Zat pengatur tumbuh 2,4-D efektif untuk memacu pembentukan kalus karena aktivitasnya yang kuat untuk memacu proses dediferensiasi sel, menekan organogenesis serta menjaga pertumbuhan kalus(Gati & Mariska, 1992).

(29)

4.2 Waktu Pertumbuhan Kalus Bunga Betina Kelapa Sawit

Data pengamatan waktu pertumbuhan kalus bunga betina kelapa sawit dan tabel daftar sidik ragam dapat dilihat pada Lampiran 2 halaman 30. Berdasarkan tabel sidik ragam, dapat dilihat bahwa perlakuan ZPT 2,4-D (A) memberikan pengaruh berbeda sangat nyata terhadap waktu pertumbuhan kalus bunga betina kelapa sawit sedangkan perlakuan BAP (B) maupun interaksi (AxB) dari kedua zat pengatur tumbuh memberikan pengaruh yang tidak berbeda nyata. Rata-rata waktu tumbuh kalus pada perlakuan kombinasi 2,4-D dan BAP dapat dilihat pada Tabel 4.2.

Tabel 4.2. Rata-rata Waktu Tumbuh Kalus (Hari) pada Perlakuan Kombinasi 2,4-D dan BAP

ZPT BAP

Rataan

2,4-D B0 B1 B2 B3

A0 - - - - -

A1 124 127 131 129 128c

A2 113 114 110 113 112b

A3 93 97 96 99 96a

Rataan 110 113 112 114

Dari Tabel 4.2., dapat diketahui bahwa waktu tercepat dalam pertumbuhan kalus pada perlakuan A3B0 dengan perlakuan 2,4-D 475 µM tanpa BAP. Hal ini sesuai dengan penelitian yang dilakukan oleh Teixeira et al. (1994), pertumbuhan kalus membutuhkan waktu dua sampai tiga bulan pada media MS dengan penambahan 2,4-D 475 µM. Verdeil et al. (1994) menambahkan, pada tanaman kelapa sawit membutuhkan waktu tiga sampai empat bulan. Dan penelitian Fki et al. (2011), pada tanaman kurma membutuhkan waktu empat sampai delapan bulan untuk induksi kalus. Hal ini menjadi karakteristik umum Arecaceae yang dibudidayakan secara in vitro, termasuk tanaman kelapa sawit. Menurut Sujatha & Prabakaran (2001), ZPT dari kelompok auksin seperti 2,4-D sangat dibutuhkan untuk induksi kalus. Selain itu, auksin juga dapat menyebabkan sel yang telah terdiferensiasi mampu mengalami dediferensiasi.

Induksi kalus dipengaruhi oleh konsentrasi 2,4-D yang digunakan. Semakin tinggi konsentrasi 2,4-D yang digunakan induksi kalus semakin cepat. Pemberian 2,4-D pada konsentrasi tinggi tanpa sitokinin sangat efektif untuk induksi proliferasi kalus pada kebanyakan kultur (Dodds & Roberts, 1985).

(30)

Menurut Masmoudi et al. (2011), penambahan sitokinin eksogen seperti BAP tidak diperlukan untuk induksi kalus pada tanaman monokotil.

Menurut Poonsapaya et al. (1989), penambahan auksin ke dalam media kultur dapat meningkatkan konsentrasi ZPT endogen di dalam sel menjadi faktor pemicu dalam proses pertumbuhan dan perkembangan jaringan. Teixeira et al. (1994) menambahkan, media MS dengan penambahan arang aktif dan ZPT 2,4-D memberikan hasil terbaik untuk induksi kalus kelapa sawit.

Pada kultur tanpa penambahan 2,4-D tidak adanya pertumbuhan kalus dan warna eksplan menjadi coklat (browning). Hal ini mungkin terjadi karena eksplan hanya dipacu oleh hormon endogen sehingga tidak mampu untuk menginduksi pembentukan kalus dan menyebabkan eksplan mati. Hal ini sesuai dengan penelitian yang dilakukan oleh Teixeira et al. (1994), subkultur eksplan ke dalam media tanpa 2,4-D menyebabkan pertumbuhan menjadi lambat dan adanya peningkatan akumulasi fenolik menyebabkan eksplan browning dan mati. Eksplan

browning sering membuat tidak terjadinya pertumbuhan dan perkembangan eksplan (Santoso & Nursandi, 2001).

Gambar 4.2. Eksplan mati dalam kultur in vitro: a. eksplan browning; b. media

4.3. Persentase Kultur yang Membentuk Kalus Embriogenik

Kalus embriogenik adalah kalus yang memiliki potensi untuk menghasilkan embrio somatik baik secara langsung (embrio somatik primer) maupun secara tidak langsung (embrio somatik sekunder). Kalus embriogenik memiliki ciri selnya berukuran kecil, berwarna kuning mengkilat, dan sitoplasma padat (Lestari, 2007).

(31)

Gambar 4.3. Kalus embriogenik dengan perbesaran 40 kali

Pengamatan kultur yang membentuk kalus embriogenik dapat dilihat pada Lampiran 3 halaman 32. Hubungan persentase kultur membentuk kalus embriogenik dengan kombinasi ZPT dapat dilihat pada Gambar 4.4.

Gambar 4.4. Hubungan persentase kultur membentuk kalus embriogenik dengan kombinasi ZPT

Dari Gambar 4.4. dapat dilihat persentase kultur yang membentuk kalus embriogenik terdapat pada perlakuan A1B0, A1B2, dan A1B3 sebesar 100 %, sedangkan pada perlakuan A0B0, A0B1, A0B2, A0B3, A2B3, A3B0, A3B2, dan A3B3 tidak terlihat adanya kalus embriogenik. Menurut Wattimena et al. (1988), pada umumnya untuk menginduksi kalus embriogenik diperlukan auksin dan sitokinin. Perbandingan kedua ZPT auksin dan sitokinin yaitu konsentrasi auksin dalam media harus lebih tinggi dibandingkan konsentrasi sitokinin (Suryowinoto, 1991).

0 20 40 60 80 100 120

A0 A1 A2 A3

P er se n tas e K al u s E m b riogeni k ( % ) Perlakuan B0 B1 B2 B3

(32)

Menurut Indrianto (2002), insiasi kalus embriogenik terjadi sebagai respon dari stres akibat pangaruh konsentrasi auksin. Auksin 2,4-D memiliki kontribusi untuk meningkatkan kalus embriogenik kelapa sawit (Abdullah et al., 2005). Berbagai hasil penelitian menunjukkan bahwa konsentrasi 2,4-D yang tepat, efektif untuk induksi kalus embriogenik. Zat pengatur tumbuh tersebut merupakan auksin sintetis yang cukup kuat dan tahan terhadap degradasi karena reaksi enzimatik dan fotooksidasi (Purnamaningsih, 2002).

Oleh karena itu, untuk menstimulasi pertumbuhan lebih lanjut dari embrio somatik perlu mentransfer kultur embriogenik pada medium yang rendah atau tanpa auksin. Salah satu mekanisme dimana auksin dapat mengatur embriogenesis adalah melalui pengasaman sitoplasma dan dinding sel (Zimmerman, 1993). 4.4. Warna Kalus

Pengamatan warna kalus dilakukan di akhir penelitian. Warna kalus yang tumbuh bervariasi, yaitu kuning, kuning coklat, coklat. Warna kalus yang paling banyak tumbuh adalah kuning dengan persentase sebesar 55,56%, sedangkan warna kuning coklat 30,56% dan warna coklat 13,88% (Lampiran 5 halaman 34).

(a) (b) (c)

Gambar 4.5. Warna kalus kelapa sawit (Elaeis guineensis Jacq.) pada perlakuan kombinasi 2,4-D dan BAP: (a) kuning; (b) kuning coklat; (c) coklat

Warna kalus yang paling baik adalah kalus yang berwarna kuning. Hal ini sejalan dengan pernyataan Keese et al. (1991), kalus yang paling baik adalah kalus yang berwarna kuning karena kalus ini memiliki ciri-ciri kalus yang kompak dan bernodul serta bersifat embriogenik. Sedangkan kalus yang tidak baik adalah kalus yang berwarna coklat. Dari data di atas didapatkan warna kalus berwarna coklat terdapat pada perlakuan auksin 475 µM. Menurut Gray (2005), auksin 2.4-D dapat menstimulasi gas etilen dalam konsentrasi rendah dapat meningkatkan

(33)

pertumbuhan dan perkembangan embrio somatik, tetapi jika konsentrasi etilen terlalu tinggi dapat menghambat pertumbuhan dan perkembangan embrio yang akhirnya dapat menyebabkan browning pada kultur kalus embriogenik.

Kalus berwarna coklat mengalami peningkatan pada konsentrasi 2,4-D 475 µM. Konsentrasi 2,4-D yang ditambahkan ke dalam media tergolong tinggi untuk masa kultur yang panjang. Auksin 2,4-D memicu eksplan menghasilkan senyawa fenol sebagai mekanisme pertahanan diri. Menurut Kardhinata (1999), kalus yang berwarna cokelat menyebabkan pertumbuhan dan perkembangan kalus terhambat. Apabila kalus telah berubah menjadi coklat maka kalus tidak dapat melakukan aktivitas sehingga menyebabkan kematian. Hal ini kemungkinan disebabkan oleh terhambatnya difusi nutrien, penguapan air yang mengakibatkan penimbunan metabolit yang bersifat racun bagi kalus dan nutrisi telah habis. Wattimena (1988) menambahkan, sitokinin berperan dalam memperlambat proses senesen sel dengan menghambat perombakan butir-butir klorofil dalam protein dalam sel.

4.5. Berat Basah Kalus

Pengamatan berat basah kalus dilakukan di akhir penelitian. Data pengamatan berat basah kalus bunga betina kelapa sawit dan tabel daftar sidik ragam dapat dilihat pada Lampiran 6 halaman 35. Berdasarkan tabel sidik ragam tersebut, dapat dilihat bahwa perlakuan ZPT 2,4-D (A) memberikan pengaruh berbeda sangat nyata sedangkan perlakuan BAP (B) maupun interaksi (AxB) memberikan pengaruh yang tidak berbeda nyata. Pengaruh rata-rata berat basah kalus pada perlakuan kombinasi 2,4-D dan BAP dapat dilihat pada Tabel 4.3.

Tabel 4.3. Rata-rata Berat Basah Kalus (g) pada Perlakuan Kombinasi 2,4-D dan BAP

ZPT BAP

Rataan

2,4-D B0 B1 B2 B3

A0 - - - - -

A1 0,299 0,372 0,393 0,384 0,362b

A2 0,418 0,455 0,433 0,401 0,427c

A3 0,260 0,269 0,283 0,264 0,269a

Rataan 0,326 0,365 0,370 0,350

(34)

Interaksi substansi pertumbuhan dan ZPT tersebut akan meningkatkan jumlah dan ukuran sel dalam jaringan tumbuhan tersebut. Auksin dan sitokinin yang diberikan pada perbandingan yang tepat dapat menginisiasi pembelahan sel dan meningkatkan pertumbuhan sel. Hal ini terjadi pada perlakuan A2B1 memiliki berat basah tertinggi dengan nilai 0,455 g, sedangkan berat basah terendah pada perlakuan A3B0 dengan nilai 0,260 g. Hal ini menunjukkan bahwa pada kombinasi A2B1 merupakan kombinasi yang tepat dalam menginisiasi pembelahan sel dan meningkatkan pertumbuhan eksplan bunga betina kelapa sawit.

Pada perlakuan A1B0, A1B1, A1B2, A2B0, A2B1, dan A2B2 terdapat peningkatan berat basah kalus. Berat basah kalus yang besar ini disebabkan karena kandungan air yang tinggi. Berat basah yang dihasilkan sangat tergantung pada kecepatan sel-sel tersebut membelah diri, memperbanyak diri dan dilanjutkan dengan pembesaran kalus.

Menurut Gati & Mariska (1992), bahwa aktivitas auksin dan sitonikin dalam pembelahan sel dirangsang oleh adanya auksin. Perbedaan berat basah antar kalus disebabkan oleh perbedaan kemampuan tiap jaringan dalam menyimpan air dan unsur hara meliputi difusi, osmosis, dan pengaturan tekanan turgor sel (Sriyanti, 2000).

Perlakuan A3B0 memiliki berat basah yang rendah. Hal ini dikarenakan terlalu tingginya konsentrasi 2,4-D menyebabkan kalus berubah warna menjadi coklat dan mengalami kematian. Kematian kalus dengan kondisi mencoklat atau

browning disebabkan oleh senyawa fenol yang dihasilkan eksplan mengalami oksidasi menyebabkan kematian. Hal ini sesuai dengan Daisy (1994), menyatakan bahwa senyawa fenol akan teroksidasi membentuk quinon yang memiliki sifat racun terhadap sel-sel tanaman dan dapat menyebabkan kematian pada sel- sel tanaman tersebut. George & Sherrington (1984) menambahkan, pemakaian 2,4-D dalam konsentrasi tinggi dapat menghambat pertumbuhan bahkan mematikan sel pada kalus maupun jaringan tanaman yang ditumbuhkan.

(35)

BAB 5

KESIMPULAN DAN SARAN

5.1. Kesimpulan

Adapun kesimpulan yang diperoleh dari penelitian ini adalah:

1. Pemberian zat pengatur tumbuh 2,4-D 475 µM tanpa BAP dapat memacu induksi kalus bunga betina kelapa sawit (Elaeis guineensis Jacq.).

2. Pemberian zat pengatur tumbuh 2,4-D 400 µM dan BAP 25 µM efektif untuk memacu pertumbuhan kalus bunga betina kelapa sawit (Elaies guineensis

Jacq.) ditandai dengan kenaikan berat basahnya yaitu 0,455 g. 5.2. Saran

Perlu adanya penelitian lanjutan untuk mendapatkan konsentrasi dan jenis ZPT lain yang optimum dalam menginisiasi dan pertumbuhan eksplan bunga betina kelapa sawit (Elaies guineensis Jacq.).

(36)

DAFTAR PUSTAKA.

Abdullah R., A. Zainal, W. Y. Heng, L. C. Li, Y. C. Beng, L. M. Phing, S. A. Sirajuddin, W. Y. S. Ping, J. L. Joseph, S. A. Jusoh, M. R. Muad, Y. L. Huey. 2005. Immature embryo: a usefull tool for oil palm (Elaeis guineensis Jacq.) genetic transformation studies. Electron J. Biotechnol. 8:24-34.

Aslam, J. and S. A. Khan. 2009. In vitro micropropagation of khalas date palm (Phoenix dactylifera L.), an important fruit plant. Journal of Fruit and Ornamental Plant Research. 17(1): 15-27.

Asnawati, G. A. Wattimena, M. Machmud, dan A. Purwito. 2002. Studi regenerasi dan produksi protoplas mesofil daun beberapa klon tanaman kentang (Solanum tuberosum L.). Buletin Agronomi. 20(3): 87-91.

Basiron, Y. 2004. Sawit Penyumbang Utama Bekalan Minyak Dunia. Berita Harian (Berita Sawit) September.

Daisy, Wijayani. 1994. Kultur Jaringan Tanaman. Kanisius. Yogyakarta.

Dodds, J. H. and L. W. Roberts. 1985. Experiments in Plant Tissue Culture. Cambrige. Cambridge University Press.

Fauzi, Y., Y. E. Widyastuti, I. Satyawibawa dan R. Hartono. 2002. Kelapa Sawit Budi Daya, Pemanfaatan Hasil dan Limbah, Analisis Usaha dan Pemasaran. Jakarta. Penebar Swadaya.

Fki, L., R. Masmoudi, W. Kriaa, A. Mahjoub, B. Sghaier, R. Mzid, A. Mliki, A. Rival, and N. Drira, 2011. Date Palm Micropropagation Via Somatic Embryogenesis. France: UMR Diade.

Gamborg, O. L., T. Murashige, T. A. Thorpe and I. K. Vasil. 1976. Plant tissue culture media. In Vitro. 12: 473-478.

Gati, E. dan Mariska, I. 1992. Pengaruh Auksin dan Sitokinin Terhadap Kalus

Mentha piperita Linn. Buletin Litri. 3: 1-4.

George, E. F. and P. D. Sherrington. 1984. Plant Propagation by Tissue Culture. England. Eastern Press.

Ginting, D. L. dan Fatmawati. 2003. Pengaruh genotip terhadap pembentukan kalus pada kultur jaringan kelapa sawit. Jurnal Penelitian Kelapa Sawit. 11(1): 39-45.

(37)

Gray, D.J. 2005. Propagation from nonmeristematic tissue: nonzygotic embryogenesis. 187-200. In : R.N. Trigiano and D.J. Gray (Eds). Plant Development and Biotechnology. CRC Press. United States of America. Guedes, R. S., T. L. Silva, Z. G. Luis and J. E. S. Pereira. 2011. Initial

requirements for embriogenic calluses initiation in thin cell layers explants for immature female oil palm inflorescences. African Journal of Biotechnology. 10(52): 10774-10780.

Gunawan, L. W. 1992. Teknik Kultur Jaringan. Bogor. Laboratorium Kultur Jaringan Tanaman PAU Bioteknologi IPB.

Hartmann, H. T., D. E. Kester and F. T. Davis-Jr. 1990. Plant Propagation: Principle and Practices. New Jersey. Prentice Hall International, Inc. Hendaryono, D.P dan A. Wijayani. 1994. Teknik Kultur Jaringan. Yogyakarta.

Kanisius.

Indrianto, A. 2002. Kultur jaringan tumbuhan. Yogyakarta. UGM Press.

Kardhinata, E. H. 1999. Induksi Kalus Embrio Kedelai pada Media MS dengan Penambahan NAA dan Air Kelapa. [Skripsi]. Medan: Universitas Sumatera Utara.

Keese, J. R., Rupert, E. A. and Carter, G. E. 1991. Physiologia Plantarum. An International Journal For Plant Biology. 81(4): 513-520.

Kumar, H. N., S. D. Preethi and J. B. Chauhan. 2012. Studies on the in vitro propagation of Calamus travancoricus. Asian Journal of Plant Science and Research. 2(2): 173-179.

Lestari EG. 2007. Kultur Jaringan: Menjawab Persoalan Pemenuhan Kebutuhan akan Peningkatan Kualitas Bibit Unggul dan Perbanyakannya secara Besar-Besaran. Bogor. Ganang Dwi Kartika.

Lubis, A.U. 1992. Kelapa Sawit (Elaeis guineensis Jacq) di Indonesia. Pematang Siantar. Pusat Penelitian Perkebunan Marihat Bandar Kuala Pematang Siantar-Sumatera Utara.

Noggle, G. R. and G. J. Fritz. 1983. Introductory Plant Physiology. New Jersey. Prentice Hall, Inc.

Pahan, I. 2006. Panduan Lengkap Kelapa Sawit Manajemen Agribisnis dari Hulu hingga Hilir. Jakarta. Penebar Swadaya.

(38)

Pandey, B. P. 1981. A Textbook of Botany Angiosperms Taxonomy, Anatomy, Embryology (Including Tissue Culture) and Economic Botany. New Delhi. S. Chand and Company LTD.

Pandiangan, D. dan A. Subarnas. 2011. Produksi Katarantin melalui Kultur Jaringan. Bandung. Lubuk Agung.

Pierik, R. L. M. 1997. Plant Tissue Culture as Motivation for The Symposium.

Papers Landbouwhogeschool Wageningen. 9: 3-13.

Poonsapaya, P. M. W., Nabors, W. Kersi and M. Vajrabhaya. l989. A comparison of methods for callus culture and plant regeneration of RD-25 rice (Oryza sativa L.) in vitro laboratoris. Plant Cell Tiss. Org. Cult. 16(3): 175-186. Purnamaningsih, R. 2002. Regenerasi Tanaman melalui Embriogenesis Somatik

dan Beberapa Gen yang Mengendalikannya. Buletin AgroBio. 5(2): 51-58. Salisbury, F. B. dan C. W. Ross. 1995. Fisiologi Tumbuhan. Jilid ke-3. Edisi ke-4.

Bandung. Institut Teknologi Bandung.

Santoso, U. dan F. Nursandi. 2001. Kultur Jaringan Tanaman. Malang. UMM Press.

Sastrosupadi, A. 2004. Rancangan Percobaan Praktis Bidang Pertanian. Edisi Revisi. Yogyakarta. Kanisius.

Soehardjo, H., H. Halil, R. Ishak, A. Purba, E. Lubis, S. Budiana dan Kusmahadi. 1998. Vademecum Kelapa Sawit. Pematang Siantar. PT. Perkebunan Nusantara IV (Persero).

Smith, R. H. 1992. Plant Tissue Culture: Techniques and Experiments. New York. Academic Press Inc.

Sriyanti D P. 2000. Pelestarian tanaman nilam (Pogostemon heyneanus Benth.) melalui kultur mikrostek. Biosmart. Vol. 2(2): 21-25

Sujatha, M. and A.J. Prabakaran. 2001. High frequency embryogenesis in immature zygotic embryos of sunflower. Plant Cell Tissue and Organ Cult. 65: 23-29.

Sunarko. 2012. Membangun Kebun Mini Kelapa Sawit di Lahan 2 Hektare. Jakarta. AgroMedia Pustaka.

Suryowinoto, M. 1991. Budidaya Jaringan Terobosan Bermanfaat dalam Bioteknologi. Yogyakarta. UGM Press.

Taji, A. M., W. A. Dodd and R. R. Williams. 1995. Plant Tissue Culture Practice. Armidale. University of New England.

(39)

Taji, A., P. Kumar and P. Lakshmanan. 2002. In Vitro Plant Breeding. New York. Haworth Press Inc.

Teixeira, J. B., M. R. Sondahl and E. G. Kirby. 1994. Somatic embryogenesis from immature inflorescences of oil palm. Plant Cell Reports. 13: 247-250.

Torres, K. C. 1989. Tissue Culture Techniques for Horticultural Crops. New York. Van Nostrand Reinhold.

Verdeil, J. C., C. Huet, F. Grosdemange, and J. Buffard-Morel. 1994. Plant regeneration from cultured immature inflorescences of coconut (Cocos nucifera L.): evidence for somatic embryogenesis. Plant Cell Reports. 13:218-221.

Wattimena, G.A. 1988. Zat Pengatur Tumbuh Tanaman. Bogor. IPB.

Wetherell, D.F. 1982. Pengantar Propagasi Tanaman secara In Vitro. diterjemahkan oleh Koensoemardiyah. Wayne New Jersey. Avery Publishing Group Inc.

Winata, L. 1987. Teknik Kultur Jaringan. Bogor. Pusat Antar Universitas Institut Pertanian Bogor.

Yusnita. 2003. Kultur Jaringan Cara Memperbanyak Tanaman Secara Efisien. Jakarta. PT. Agromedia Pustaka.

Zulkarnain. 2009. Kultur Jaringan Tanaman. Jakarta. Bumi Aksara.

Zimmerman, J. L. 1993. Somatic embryogenesis: a model for early development in higher plants. The Plant Cell. 5: 1411-1423.

(40)

LAMPIRAN

Lampiran 1. Persentase Data Pengamatan Kultur yang Membentuk Kalus

Perlakuan Ulangan Total

I II III

A0B0 0 0 0 0

A0B1 0 0 0 0

A0B2 0 0 0 0

A0B3 0 0 0 0

A1B0 1 1 1 3

A1B1 1 1 1 3

A1B2 1 1 1 3

A1B3 1 1 1 3

A2B0 1 1 1 3

A2B1 1 1 1 3

A2B2 1 1 1 3

A2B3 1 1 1 3

A3B0 1 1 1 3

A3B1 1 1 1 3

A3B2 1 1 1 3

A3B3 1 1 1 3

Total 36

Keterangan:

1 = Kalus Tumbuh 0 = Kalus Tidak Tumbuh

% Kalus Tumbuh =

x 100% =

x 100% = 75%

% Kalus Tidak Tumbuh =

x 100%

x 100% = 25%

(41)

Lampiran 2. Data Pengamatan Waktu Tumbuh Kalus (Hari Setelah Tanam)

Perlakuan Ulangan Rataan

I II III

A0B0 - - - -

A0B1 - - - -

A0B2 - - - -

A0B3 - - - -

A1B0 124 131 116 123,7

A1B1 128 129 124 127,0

A1B2 134 128 132 131,3

A1B3 123 137 128 129,3

A2B0 109 117 112 112,7

A2B1 117 109 115 113,7

A2B2 113 114 103 110,0

A2B3 107 112 121 113,3

A3B0 94 97 88 93,0

A3B1 101 95 94 96,7

A3B2 98 93 97 96,0

A3B3 98 96 102 98,7

Daftar Sidik Ragam Waktu Tumbuh Kalus

SK DB JK KT Fhit F Tabel

f5% f1% Perlakuan 11 6222,222 565,657 22,958** 2,216 3,094 Auksin (A) 2 6050,056 3025,028 122,775** 3,402 5,613 Sitokinin (B) 3 76,000 25,333 1,028tn 3,008 4,718

AxB 6 96,167 16,028 0,651tn 2,508 3,666

Galat 24 591,333 24,639 - - -

Total 46 13035,778 - - - -

Keterangan : ** : berbeda sangat nyata tn : Tidak berbeda nyata

(42)

Tes Post Hoc Auksin 2,4-D Duncana,b

2,4-D N Subset

1 2 3

A3 12 96,0833

A2 12 112,4167

A1 12 127,8333

Sig. 1,000 1,000 1,000

Sitokinin BAP Duncana,b

BAP N Subset

B0 9 109,7778

B2 9 112,4444

B1 9 112,4444

B3 9 113,7778

(43)

Lampiran 3. Persentase Kultur yang Membentuk Kalus Embriogenik

Perlakuan Ulangan Total

I II III

A0B0 - - - -

A0B1 - - - -

A0B2 - - - -

A0B3 - - - -

A1B0 1 1 1 3

A1B1 0 1 1 2

A1B2 1 1 1 3

A1B3 1 1 1 3

A2B0 1 1 0 2

A2B1 0 0 1 1

A2B2 0 1 0 1

A2B3 0 0 0 0

A3B0 0 0 0 0

A3B1 0 1 0 1

A3B2 0 0 0 0

A3B3 0 0 0 0

Total 16

Keterangan:

1 = Kalus Embriogenik 0 = Kalus non Embriogenik - = Tidak Tumbuh Kalus

% Kalus Embriogenik =

x100% = 44,44%

% Kalus tidak Embriogenik =

x100% = 55,56%

(44)

Lampiran 4. Data Pengamatan Warna Kalus

Perlakuan Ulangan

I II III

A0B0 - - -

A0B1 - - -

A0B2 - - -

A0B3 - - -

A1B0 Kuning Kuning Kuning

A1B1 Kuning Kuning Kuning

A1B2 Kuning Kuning Kuning

A1B3 Kuning Kuning Kuning

A2B0 Kuning Kuning Kuning

A2B1 Kuning Coklat Kuning Kuning

A2B2 Kuning Coklat Kuning Coklat Kuning A2B3 Kuning Coklat Kuning Coklat Kuning Coklat

A3B0 Coklat Kuning Kuning Coklat

A3B1 Kuning Coklat Kuning Coklat

A3B2 Coklat Kuning Coklat Coklat

(45)

Lampiran 5. Persentase Warna Kalus

Perlakuan Warna Kalus Total

Kuning Kuning Coklat Coklat

A0B0 - - - -

A0B1 - - - -

A0B2 - - - -

A0B3 - - - -

A1B0 3 - - 3

A1B1 3 - - 3

A1B2 3 - - 3

A1B3 3 - - 3

A2B0 3 - - 3

A2B1 2 1 - 3

A2B2 1 2 - 3

A2B3 - 3 - 3

A3B0 1 1 1 3

A3B1 1 1 1 3

A3B2 - 1 2 3

A3B3 - 2 1 3

Total 20 11 5 36

% Kalus warna kuning =

x 100% =

x 100% = 55,56%

% Kalus warna kuning coklat =

x 100% =

x 100% = 30,56%

% Kalus warna coklat =

x 100% =

x 100% = 13,88%

(46)

Lampiran 6. Data Pengamatan Berat Basah Kalus (g)

Perlakuan Ulangan Rataan

I II III

A0B0 - - - -

A0B1 - - - -

A0B2 - - - -

A0B3 - - - -

A1B0 0,302 0,220 0,376 0,299

A1B1 0,322 0,371 0,423 0,372

A1B2 0,307 0,545 0,327 0,393

A1B3 0,407 0,352 0,393 0,384

A2B0 0,484 0,376 0,395 0,418

A2B1 0,499 0,403 0,462 0,455

A2B2 0,441 0,350 0,509 0,433

A2B3 0,464 0,354 0,384 0,401

A3B0 0,196 0,304 0,279 0,260

A3B1 0,335 0,246 0,225 0,269

A3B2 0,224 0,377 0,249 0,283

A3B3 0,251 0,232 0,309 0,264

Daftar Sidik Ragam Berat Basah Kalus

SK DB JK KT Fhit F Tabel

f5% f1%

Perlakuan 11 0,173 0,016 3,308** 2,216 3,094

Auksin (A) 2 0,151 0,076 15,876** 3,402 5,613 Sitokinin (B) 3 0,011 0,004 0,747tn 3,008 4,718

AxB 6 0,011 0,002 0,400tn 2,508 3,666

Galat 24 0,114 0,005 - - -

Total 46 0,46 - - - -

Keterangan : ** : berbeda sangat nyata tn : Tidak berbeda nyata

(47)

Tes Post Hoc Auksin 2,4-D Duncana,b

2,4-D N Subset

1 2 3

A3 12 0,268917

A1 12 0,362083

A2 12 0,426750

Sig. 1,000 1,000 1,000

Sitokinin BAP Duncana,b

BAP N Subset

B0 9 0,325778

B3 9 0,349556

B1 9 0,365111

B2 9 0,369889

(48)

Lampiran 7. Komposisi Media Murashige-Skoog (MS)

Bahan Kimia Konsentrasi dalam Media (mg/l) Makro Nutrien

NH4NO3 KNO3 CaCl2.H2O MgSO4.7H2O KH2PO4

1650,000 1900,000 440,000 370,000 170,000 Iron

Na2EDTA FeSO4.7H2O

37,000 27,800 Mikro Nutrien

MnSO4.4H2O ZnSO4.7H2O H3BO3 KI

NaMoO4.2H2O CuSO4.5H2O CoCl.6H2O

22,300 8,600 6,200 0,830 0,250 0,025 0,025 Vitamin Glycine Nicotine Acid Pyrodoxin HCl Thyamine HCl 2,000 0,500 0,500 0,100 Myo-inositol Sukrosa Agar 100,000 30.000,000 7000,000

(49)

Lampiran 8. Alur Kerja

Pembuatan Media MS

dimasukkan hara makro, mikro, iron, vitamin, ke dalam erlenmeyer dan ditambah akuades hingga 2000 ml.

dibagi ke 16 perlakuan.

ditambahkan ZPT sesuai perlakuan. ditambahkan arang aktif 0,375 g.

diukur derajat keasaman (pH) larutan setiap perlakuan dengan menggunakan pH meter sebesar 5,8.

ditambahkan masing-masing media dengan 0,875 g agar sambil dimasak.

dimasukkan media ke dalam botol-botol kultur dengan volume lebih kurang 10 ml.

ditutup aluminium foil kemudian diikat dengan karet.

disterilkan botol berisi tersebut dengan autoklaf pada tekanan 15 psi, suhu 1210C selama 10 menit.

disimpan dalam rak kultur dalam ruangan AC. Unsur Hara

(50)

Pengkulturan Bunga Betina pada Media MS

dibersihkan dengan air mengalir hingga bersih. direndam dalam larutan fungisida 2 g/L. dibilas dengan akuades steril.

direndam dengan larutan antibiotik. dibilas dengan akuades steril.

direndam dengan larutan pemutih 10 % selama 10 menit. dibilas 3 kali dengan akuades steril

direndam dengan HgCl2 1 g/L selama 15 menit. dibilas 3 kali dengan akuades steril

dikeringkan di atas kertas saring steril dalam cawan petri.

dilukai salah satu sisi bunga betina satu per satu. ditanam dalam media MS sesuai perlakuan

ditutup dengan aluminium foil botol yang berisi eksplan. disusun pada rak kultur

diamati dan dipelihara hingga terbentuk kalus

Bunga Betina

Bunga Betina Steril

(1)

Lampiran 5. Persentase Warna Kalus

Perlakuan Warna Kalus Total

Kuning Kuning Coklat Coklat

A0B0 - - - -

A0B1 - - - -

A0B2 - - - -

A0B3 - - - -

A1B0 3 - - 3

A1B1 3 - - 3

A1B2 3 - - 3

A1B3 3 - - 3

A2B0 3 - - 3

A2B1 2 1 - 3

A2B2 1 2 - 3

A2B3 - 3 - 3

A3B0 1 1 1 3

A3B1 1 1 1 3

A3B2 - 1 2 3

A3B3 - 2 1 3

Total 20 11 5 36

% Kalus warna kuning =

x 100%

= 55,56%

% Kalus warna kuning coklat =

x 100%

= 30,56%

% Kalus warna coklat =

x 100%

= 13,88%

(2)

Lampiran 6. Data Pengamatan Berat Basah Kalus (g)

Perlakuan Ulangan Rataan

I II III

A0B0 - - - -

A0B1 - - - -

A0B2 - - - -

A0B3 - - - -

A1B0 0,302 0,220 0,376 0,299

A1B1 0,322 0,371 0,423 0,372

A1B2 0,307 0,545 0,327 0,393

A1B3 0,407 0,352 0,393 0,384

A2B0 0,484 0,376 0,395 0,418

A2B1 0,499 0,403 0,462 0,455

A2B2 0,441 0,350 0,509 0,433

A2B3 0,464 0,354 0,384 0,401

A3B0 0,196 0,304 0,279 0,260

A3B1 0,335 0,246 0,225 0,269

A3B2 0,224 0,377 0,249 0,283

A3B3 0,251 0,232 0,309 0,264

Daftar Sidik Ragam Berat Basah Kalus

SK DB JK KT Fhit F Tabel

f5% f1%

Perlakuan 11 0,173 0,016 3,308** 2,216 3,094

Auksin (A) 2 0,151 0,076 15,876** 3,402 5,613 Sitokinin (B) 3 0,011 0,004 0,747tn 3,008 4,718

AxB 6 0,011 0,002 0,400tn 2,508 3,666

Galat 24 0,114 0,005 - - -

Total 46 0,46 - - - -

Keterangan : ** : berbeda sangat nyata tn : Tidak berbeda nyata

(3)

Tes Post Hoc Auksin 2,4-D Duncana,b

2,4-D N Subset

1 2 3

A3 12 0,268917

A1 12 0,362083

A2 12 0,426750

Sig. 1,000 1,000 1,000

Sitokinin BAP Duncana,b

BAP N Subset

B0 9 0,325778

B3 9 0,349556

B1 9 0,365111

B2 9 0,369889

Sig. 0,227

(4)

Lampiran 7. Komposisi Media Murashige-Skoog (MS)

Bahan Kimia Konsentrasi dalam Media (mg/l) Makro Nutrien

NH4NO3

KNO3

CaCl2.H2O

MgSO4.7H2O

KH2PO4

1650,000 1900,000 440,000 370,000 170,000 Iron

Na2EDTA

FeSO4.7H2O

37,000 27,800 Mikro Nutrien

MnSO4.4H2O

ZnSO4.7H2O

H3BO3

NaMoO4.2H2O

CuSO4.5H2O

CoCl.6H2O

22,300 8,600 6,200 0,830 0,250 0,025 0,025 Vitamin Glycine Nicotine Acid Pyrodoxin HCl Thyamine HCl 2,000 0,500 0,500 0,100 Myo-inositol Sukrosa Agar 100,000 30.000,000 7000,000

Ph 5,8

(5)

Lampiran 8. Alur Kerja

Pembuatan Media MS

dimasukkan hara makro, mikro, iron, vitamin, ke dalam erlenmeyer dan ditambah akuades hingga 2000 ml.

dibagi ke 16 perlakuan.

ditambahkan ZPT sesuai perlakuan. ditambahkan arang aktif 0,375 g.

diukur derajat keasaman (pH) larutan setiap perlakuan dengan menggunakan pH meter sebesar 5,8.

ditambahkan masing-masing media dengan 0,875 g agar sambil dimasak.

dimasukkan media ke dalam botol-botol kultur dengan volume lebih kurang 10 ml.

ditutup aluminium foil kemudian diikat dengan karet.

disterilkan botol berisi tersebut dengan autoklaf pada tekanan 15 psi, suhu 1210C selama 10 menit.

disimpan dalam rak kultur dalam ruangan AC. Unsur Hara

Media MS

(6)

Pengkulturan Bunga Betina pada Media MS

dibersihkan dengan air mengalir hingga bersih. direndam dalam larutan fungisida 2 g/L. dibilas dengan akuades steril.

direndam dengan larutan antibiotik. dibilas dengan akuades steril.

direndam dengan larutan pemutih 10 % selama 10 menit. dibilas 3 kali dengan akuades steril

direndam dengan HgCl2 1 g/L selama 15 menit.

dibilas 3 kali dengan akuades steril

dikeringkan di atas kertas saring steril dalam cawan petri.

dilukai salah satu sisi bunga betina satu per satu. ditanam dalam media MS sesuai perlakuan

ditutup dengan aluminium foil botol yang berisi eksplan. disusun pada rak kultur

diamati dan dipelihara hingga terbentuk kalus

Bunga Betina

Bunga Betina Steril

Kalus

Pertumbuhan Eksplan Bunga Betina Kelapa Sawit (Elaeis guineensis Jacq.) Pada Media MS Dengan Kombinasi 2,4D Dan BAP