18
1. Pengujian penangkapan radikal DPPH
Pengujian dengan cara ini dilakukan dengan mengukur penangkapan radikal sintetik dalam pelarut organik polar seperti metanol atau etanol pada suhu kamar.
Penangkapan radikal DPPH oleh suatu senyawa diikuti dengan mengamati penurunan absorbansi pada 517 nm.
2. Pengujian aktivitas antioksidan dengan sistem linoleat-tiosianat.
Asam linoleat merupakan asam lemak tidak jenuh dengan dua buah ikatan rangkap yang mudah mengalami oksidasi membentuk radikal peroksida. Senyawa
antioksidan akan berperan dalam mengkelat logam fero dan menangkap radikal peroksida.
3. Pengujian dengan asam tiobarbiturat atau TBA Thio Barbituric Acid.
Pengujian ini berdasarkan adanya malonaldehid yang terbentuk dari asam lemak bebas tidak jenuh dengan paling sedikit memiliki 3 ikatan rangkap dua.
Malonaldehid selanjutnya bereaksi dengan asam tiobarbiturat membentuk produk kromogen yang berwarna merah muda yang diukur absorbansinya pada panjang
gelombang 532 nm. Adanya senyawa yang bersifat antioksidan akan menghambat terbentuknya malonaldehid dari asam lemak bebas tidak jenuh.
G. Metode DPPH
Metode DPPH 2,2-Diphenyl-1-picrylhydrazyl merupakan metode yang paling sering digunakan untuk mengukur aktivitas antioksidan pada makanan. DPPH
sangat luas digunakan untuk menguji kemampuan suatu senyawa yang bekerja
19
sebagai penangkap radikal bebas atau donor hidrogen. Metode DPPH dapat digunakan untuk menguji aktivitas antioksidan dari senyawa dalam bentuk aslinya
ataupun dalam campuran Prakash, Rigelhof, and Miller, 2010. Metode DPPH merupakan metode yang mudah, cepat, sensitif, dan akurat untuk mengukur aktivitas
antioksidan pada senyawa tertentu atau ekstrak tanaman Koleva, van Beek, Linssen, de Groot, dan Evstatieva, 2002: Prakash, Rigelhof, and Miller, 2010.
Metode DPPH bertujuan untuk mengetahui parameter yang ekuivalen memberikan 50 efek aktivitas antioksidan. Elektron pada radikal bebas DPPH
memberikan serapan yang kuat pada panjang gelombang maksimum 517 nm dan berwarna ungu. Interaksi antioksidan dengan DPPH adalah dengan adanya donasi
elektron atau atom hidrogen antioksidan akan menetralkan karakter radikal bebas dari DPPH. Jika satu elektron pada radikal bebas DPPH menjadi berpasangan, maka
warna larutan berubah dari ungu menjadi kuning dan absorbansinya menurun secara stoikiometri sesuai dengan jumlah elektron yang diambil pada panjang gelombang
maksimum 517 nm Molyneux, 2004; Dehpour, Ebrahimzadeh, Fazel, dan Mohammad, 2009.
