Defenisi Operasional TINJAUAN PUSTAKA

masing dengan volume 5ml. Kemudian dilakukan sterilisasi menggunakan autoklaf lalu diberi label masing-masing tabung dari a1, a2, a3, a4, a,5, a6, begitupula untuk tabung selanjutnya b, c, d, e, dan f. Media Nutrien Agar yang telah dipanaskan disterilisasi kemudian dituang kedalam cawan petri masing-masing 20 ml. 3.6.1.3 Pembuatan Stok Bakteri Pembuatan stok bakteri ini bertujuan untuk memperbanyak dan meremajakan bakteri uji, yaitu Pseudomonas aeruginosa. Caranya dengan mengambil 1 ose biakan murni bakteri Pseudomonas aeruginosa lalu ditanam pada media Nutrien Agar NA kemudian diinkubasi pada suhu 37 °C selama 24 jam. 3.6.1.4 Persiapan Sampel dan Standar Uji Larutan pembersih lantai X dengan kandungan pine oil 2,5 dan standar uji serbuk fenol disimpan dalam suhu ruangan dan tetap ditutup rapat. Fenol serbuk dijaga agar terhindar dari paparan sinar matahari. Pengenceran larutan pembersih lantai X dengan kandungan pine oil 2,5 menggunakan NaCl 0,9 kedalam 6 konsentrasi yaitu 140, 160, 180, 1100, 1120, dan 1140. 14 Pembuatan larutan fenol dengan cara mencampurkan fenol serbuk 5 gram dengan aquadest sampai volume keduanya mencapai 100 ml kemudian dilakukan pengenceran kedalam enam konsentrasi seperti larutan desinfektan. Perbandingan volume antara aquadest dan bahan uji untuk pengenceran tertera pada lampiran 2. Kemudian memberi label pada masing-masing tabung reaksi A, B, C, D, E, dan F. 3.6.1.5 Persiapan Bakteri Uji Siapkan tabung reaksi berisi 2 ml NaCl fisiologis 0,9 , kemudian tambahkan sebanyak 1 ose biakan Pseudomonas aeruginosa yang telah diremajakan satu hari sebelumnya kedalam tabung tersebut. Setarakan kekeruhannya dengan larutan Mc. Farland III 10 9 kumanml dengan menambahkan NaCl 0.9 sesuai kebutuhan. 3.6.2 Tahap Pengujian Percobaan dilakukan terhadap desinfektan dan fenol dengan menggunakan enam konsentrasi yang telah disiapkan sebelumnya. Suspensi bakteri Pseudomonas 10 9 kumanml yang telah disiapkan sebelumnya diambil sebanyak 0,2 ml dan dimasukkan ke tabung A. Setelah 30 detik kemudian dimasukkan pula 0,2 ml suspensi biakan ke tabung B, demikian seterusnya sampai tabung F. Pemindahan ini menggunakan mikropipet agar volume suspensi bakteri yang ditambahkan akurat dan dilakukan dalam keadaan aseptik untuk menghindari terjadinya kontaminasi. Uji dilanjutkan dengan menambahkan masing-masing satu ose suspensi bakteri Pseudomonas aeruginosa kedalam 36 tabung berisi Nutrien Broth 5 ml yang telah disterilisasi dan diberi label a1, a2, a3, a4, a5, a6 sampai f6 dengan interval waktu 5 menit. Pada waktu memasukkan suspensi bakteri ke tabung F, maka secara bersamaan dilakukan pemindahan satu ose suspensi bakteri dari tabung A ke tabung a1, lalu 30 detik kemudian diikuti dengan pemindahan satu ose suspensi bakteri dari tabung B ke b1, begitu seterusnya sampai pemindahan bakteri dari tabung F ke tabung f6. Pemindahan satu ose suspensi bakteri dilakukan dengan menggunakan ose yang telah difiksasi dan ditunggu beberapa saat sampai ose tidak terlalu panas agar bakteri yang dipindahkan tidak mati karena ose yang telalu panas. Kemudian, setiap selesai pemindahan bakteri dilakukan pencampuran dengan menggunakan vortex. Keterangan interval waktu pemindahan bakteri dapat dilihat pada bagan cara kerja uji koefisien fenol yang tertera pada bagan 3.1. Selanjutnya tabung uji diinkubasi pada suhu 36 °C selama 20 jam. Pembacaan hasil reaksi dinilai dari kekeruhan pada setiap tabung. Jika hasil yang diperoleh adalah keruh positif maka menandakan pada tabung ada pertumbuhan bakteri Pseudomonas aeruginosa. Sedangkan jika tabung reaksi bening negatif menandakan bahwa tidak ada pertumbuhan bakteri