B. Senyawa Fenolik
Senyawa fenolik biasanya terdapat dalam berbagai jenis sayuran, buah- buahan dan tanaman. Turunan senyawa fenol merupakan metabolit sekunder
terbesar yang diproduksi oleh tanaman. Senyawa ini diproduksi dalam tanaman melalui jalur sikimat dan metabolisme fenil propanoid. Senyawaan fenolik dapat
memiliki aktivitas antioksidan, antitumor, antiviral, dan antibiotik Apak et al., 2007.
Senyawa fenolik dalam suatu sampel secara kualitatif dan kuantitatif dapat ditentukan menggunakan metode Folin-Ciocalteu Veeru et al., 2009.
Metode ini menggunakan reagen fenol asam fosfomolibdat-fosfotungstat yang biasa disebut reagen fenol Folin-Ciocalteu. Prinsip metode ini adalah dengan
adanya senyawa yang dapat mereduksi reagen fenol Folin-Ciocalteu, akan menyebabkan terbentuk senyawa yang berwarna biru. Intensitas warna biru yang
terbentuk proporsional dengan jumlah senyawa yang dapat mereduksi dan dapat dideteksi dengan spektrofotometer dengan rentang panjang gelombang 500-750
nm Abul-Fadl, 1949.
C. Antioksidan
1. Radikal bebas
Radikal bebas adalah atom atau molekul yang memiliki elektron tidak berpasangan unpaired electron. Adanya elektron yang tidak berpasangan
menyebabkan senyawa tersebut sangat reaktif mencari pasangan, dengan cara
menyerang dan mengikat elektron molekul yang berada di sekitarnya. Target utama radikal bebas adalah protein, asam lemak tak jenuh dan lipoprotein, serta
unsur DNA termasuk karbohidrat. Dari molekul-molekul target tersebut, yang paling rentan terhadap serangan radikal bebas adalah asam lemak tak jenuh.
Senyawa radikal bebas di dalam tubuh dapat merusak asam lemak tak jenuh ganda pada membran sel sehingga dinding sel menjadi rapuh, merusak basa DNA
sehingga mengacaukan sistem genetika, dan berlanjut pada pembentukan sel kanker Winarsi, 2007.
Sedangkan asam galat sering digunakan dalam berbagai jurnal ilmiah pengujian kandungan fenolik total sebagai ekivalen terhadap kandungan fenolik
total bahan tumbuhan yang diuji Javanmardi, Stushnoff, Locke, dan Vivanco, 2003; Wangcharoen dan Morasuk, 2007 ab; Dehpour et al., 2009; Inglett, Rose,
Chen, Stevenson, dan Biswas, 2009; Veeru et al., 2009.
2. Senyawa antioksidan
Berdasarkan sumbernya,
antioksidan dapat
dibedakan menjadi
antioksidan endogen dan eksogen. Antioksidan endogen terdapat secara alamiah dari dalam tubuh sedangkan antioksidan eksogen dari luar tubuh Percival, 1998.
Antioksidan eksogen sendiri dibedakan menjadi antioksidan alami dan sintetik Miller, 1996.
3. Mekanisme
Secara non-enzimatik, senyawa antioksidan bekerja melalui empat cara, yaitu sebagai berikut:
a Penangkap radikal bebas, misalnya vitamin C dan vitamin E,
b Pengkelat logam transisi, misalnya EDTA, c Inhibitor enzim oksidatif, misalnya aspirin dan ibuprofen, dan
d Kofaktor enzim antioksidan, misalnya selenium sebagai kofaktor glutation peroksidase Huang et al., 2005.
Menurut sumbernya, antioksidan dapat digolongkan menjadi dua macam, yaitu antioksidan sintetik dan alami Gulcin, 2004.
a. Antioksidan sintetik. Antioksidan sintetik merupakan antioksidan yang dibuat melalui sintesis secara kimia, contohnya: ter-butyl hidroquinone
tBHQ, butylated hydroxyanisole BHA, butylated hydroxytoluene BHT, dan propil galat PG Gulcin et al., 2004. Konsentrasi rendah
dari antioksidan tBHQ dan BHA telah lama digunakan untuk mencegah oksidasi dari produk makanan sehingga dapat menstabilkan produk
tersebut nutrisi, rasa, maupun warna. Dalam konsentrasi yang tinggi, tBHQ dapat menyebabkan kanker. Penyebabnya adalah metabolit dari
oksidasi tBHQ, yaitu 2-tertbutyl-1,4-benzoquinone tBBQ dan ROS Gharavi, Haggarty, dan El-Kadi, 2007. Peters, Rivera, Jones, Monks,
dan Lau pada tahun 1996 melaporkan bahwa antioksidan sintetik, yaitu tBHQ
dan 3-tert-butyl-4-
hydroxyanisole dapat
mempromosi karsinogenesis renal dan kandung kemih pada tikus. Walaupun dalam
penelitian tersebut
tidak diketahui
secara pasti
mekanisme karsinogenesisnya. Begitu pula dengan BHA dan BHT, dalam konsentrasi
tinggi dan penggunaan yang lama, BHA dapat menginduksi tumor pada perut hewan uji sedangkan BHT dapat menginduksi tumor pada liver
hewan uji. Semua publikasi juga setuju dengan fakta tersebut. Lain halnya vitamin E yang merupakan antioksidan alami tidak memiliki sifat
karsinogenik. BHT yang diadministrasikan secara kronis terhadap mencit menyebabkan menurunnya konsentrasi alpha isozyme of protein kinase C
PKCa dalam paru-paru sehingga dapat menginisiasi terjadinya tumor Kahl, 1984; dan Malkinson, 1999.
b. Antioksidan alami. Antioksidan alami merupakan antioksidan yang diproduksi langsung oleh tanaman maupun tubuh, contohnya: senyawa
polifenol flavonoid, tanin, katalase dan glutation peroksidase bekerja dengan cara mengubah H
2
O menjadi H
2
O dan O
2
, sedangkan superoksid dismutase bekerja dengan cara mengkatalisis reaksi dismutasi dari
radikal anion superoksida menjadi HO Percival, 1998; Gulcin et al., 2004; Winarsi, 2007.
4. Manfaat antioksidan
Antioksidan bermanfaat dalam mencegah kerusakan oksidatif yang disebabkan radikal bebas dan ROS sehingga mencegah terjadinya berbagai macam
penyakit seperti penyakit kardiovaskuler, jantung koroner, kanker serta penuaan dini Palmer dan Kitchin, 2010. Penambahan antioksidan ke dalam formulasi
makanan, juga efektif mengurangi oksidasi lemak yang menyebabkan ketengikan, toksisitas, dan destruksi biomolekul yang ada dalam makanan Decker, 1998.
5. Metode pengujian antioksidan
Terdapat beberapa metode pengujian aktivitas antioksidan baik secara kualitatif maupun secara kuantitatif. Uji kualitatif untuk mengetahui apakah suatu
senyawa memiliki aktivitas antioksidan dapat dilakukan dengan metode kromatografi baik kromatografi lapis tipis atau kromatografi kertas. Metode ini
dapat untuk memisahkan campuran antioksidan yang kompleks sekalipun. Pereaksi semprot yang digunakan untuk deteksi dapat dibedakan menjadi empat
kelompok, yaitu sebagai berikut. a. Senyawa-senyawa yang dapat membentuk warna ketika tereduksi
kalium permanganat, ferri-sianida, ferri-dipiridil, dan asam fosfomolibdat.
b. Senyawa yang dapat berikatan dengan senyawa fenol, seperti senyawa diazo, pereaksi diazo, magnesium sulfat, aldehid aromatic-anisaldehid,
vanillin dan pereaksi Gibbs yang membentuk indofenol akan membentuk garam berwarna dalam kondisi basa.
c. Radikal bebas stabil yang menerima radikal hidrogen dari antioksidan 1,1-difenil-2-pikrilhidrazil.
d. Senyawa-senyawa yang membentuk senyawa adisi yang berwarna palladium klorida dan pentadium klorida Davidek, 1997.
Pada tahun 2005, Shivaprasad, Mohan, Kharya, Shiradkar, dan Lakshman melaporkan bahwa uji aktivitas antioksidan dapat dilakukan secara
spektrofotometri. Uji tersebut dilakukan secara in-vitro.
D. Metode DPPH
Metode yang paling sering digunakan untuk menguji aktivitas antioksidan tanaman obat adalah metode uji dengan menggunakan radikal bebas
DPPH Shivaprasad et al., 2005. Tujuan metode ini adalah mengetahui parameter konsentrasi yang ekuivalen memberikan 50 efek aktivitas antioksidan
IC50. Hal ini dapat dicapai dengan cara menginterpretasikan data eksperimental dari metode tersebut Molyneux, 2004. DPPH merupakan radikal bebas yang
dapat bereaksi dengan senyawa yang dapat mendonorkan atom hidrogen, dapat berguna untuk pengujian aktivitas antioksidan komponen tertentu dalam suatu
ekstrak Dinis, Maderia, dan Almeida, 1994.
E. Ekstraksi
Ekstrak adalah sediaan pekat yang diperoleh dengan cara mengekstraksi zat aktif dari simplisia nabati atau hewani menggunakan pelarut yang sesuai,
selanjutnya pelarut diuapkan sampai semua atau hampir semua pelarut menguap Direktorat Jenderal Pengawasan Obat dan Makanan RI, 1995.
Dalam memilih cairan penyari, seseorang harus mempertimbangkanbanyak faktor. Cairan penyari yang baik harus memenuhi kriteria berikut ini:
a Murah dan mudah diperoleh, b stabil secara fisika dan kimia,
c bereaksi netral, d tidak mudah menguap dan tidak mudah terbakar,
e selektif, f tidak mempengaruhi zat berkhasiat, dan
g diperbolehkan oleh peraturan yang berlaku Anonim, 1986. Metode penyarian yang digunakan tergantung dari wujud dan kandungan
zat dari bahan yang akan disari. Cara penyarian dapat dibedakan menjadi: infundasi, maserasi, perkolasi, dan penyarian berkesinambungan Anonim, 1986.
F. Kesahihan Metode Analisis
Kategori