3.6.2 Pemeriksaan Sampel di Laboratorium
Setibanya di Laboratorium, daging sapi beku dan tidak beku diperiksa
kandungan bakterinya melalui tahapan pemeriksaan seperti dibawah ini.
Adapun tahapan pemeriksaan sampel daging sapi adalah sebagai berikut :
3.6.2.1 Menghitung TPC koloni Mikroorganisme
1. Alat dan bahan
a. Alat
1. Serological pipet
2. Alu dan lumpang
3. Tabung reaksi
4. Cawan petri
5. Colony counter
6. Pro pipet
7. Gelas ukur
b. Bahan
1. Daging sapi beku
2. Daging sapi tidak beku
2. Media : Nutrient agar NA
3. Cara kerja menghitung koloni Mikroorganisme
1. Sampel daging sapi beku terlebih dahulu dicairkan dengan cara
menyiramkan air pada daging sapi, kemudian timbang sampel daging sapi beku dan tidak beku masing-masing sebanyak 10
gram kemudian di campur dengan 90 ml Nacl Steril. Dihaluskan
Universitas Sumatera Utara
dengan menggunakan alu dan lumpang yang telah disterilkan sampai daging sapi hancurtercampur dengan Nacl.
2. Dengan menggunakan pipet steril, ambil 1 ml suspensi diatas
masukkan kedalam 9 ml Nacl steril untuk memperoleh pengenceran 10
1.
Kemudian dari pengenceran 10
1
diambil 1 ml suspensi diatas masukkan ke dalam 9 ml Nacl untuk memperoleh
pengenceran 10
2
. Demikian seterusnya sampai pengenceran 10
6
3. Dari hasil pengenceran 10
.
1
sampai 10
6
hanya pengenceran 10
3
, 10
4
, 10
5
4. Tambahkan 20 ml media nutrien agar pada masing-masing cawan
petri kemudian di kocok dan tunggu sampai beku. yang di ambil masing-masing 1 ml dan ditempatkan pada 3
cawan petri yang steril.
5. Kemudian inkubasikan selama 24 jam dengan suhu 37
6. Hitung jumlah koloni per gram sampel dengan menggunakan
Colony Counter. Caranya, pertama tekan tombol Colony Counter ke posisi On kemudian letakkan cawan petri yang berisi biakan
coloni bakteri pada daging sapi diatas Colony Counter. Tekan tiap koloni bakteri yang terlihat di cawan petri dengan menggunakan
spidol atau pena tinta cair, tiap koloni ditekan satu kali. Jumlah koloni bakteri dapat dilihat pada penghitung yang terdapat pada
Colony Counter. c pada
inkubator.
Universitas Sumatera Utara
3.6.2.2 Pemeriksaan Most Probable Number MPN bakteri Escherichia coli a. Uji Pendugaan
1. Alat dan Bahan : a. Alat
1. Tabung reaksi 2. Tabung Durham
3. Pipet volume 4. Inkubator.
b. Bahan 1. Daging sapi
2. Kapas 2. media : LB Laktosa Broth
3. Cara Kerja: 1.
Sampel sebanyak 10 gr dimasukkan kedalam gelas ukur. 2.
Ditambahkan NaCl 90 ml, aduk hingga homogen. 3.
Membuat pengenceran dari sampel yang akan diperiksa mulai dari pengenceran 10
-1
4. Menyediakan 9 tabung reaksi.
.
5. Menyediakan sampel sebanyak 10 ml, 1 ml, dan 0,1 ml.
6. Mengambil larutan sebanyak masing-masing 10 ml untuk 3 tabung
berisi LBDS, kemudian mengambil larutan sebanyak masing- masing 1 ml untuk 3 tabung yang berisi LBSS dan masing-masing
Universitas Sumatera Utara
0,1 ml untuk 3 tabung berisi LBSS. Inkubasi dengan suhu 37
7. Menghitung jumlah tabung reaksi yang positif ditandai dengan
adanya gas pada tabung durham atau kekeruhan. Melihat daftar MPN untuk menghitung jumlah bakteri per ml kemudian kalikan
dengan 1pengenceran ditengah. C
selama 2 x 24 jam.
b. Uji Penegasan
Kategori