Pemeriksaan Kemurnian Isolat HASIL PENELITIAN DAN PEMBAHASAN

F. Pemeriksaan Kemurnian Isolat

Sebelum semua isolat dianalisis lebih lanjut, terlebih dahulu diperiksa kemurniannya agar tidak mengganggu proses analisis reaksi warna dan spektrofotometri UV. Pada pemeriksaan ini digunakan KLT multi eluen dengan fase gerak pertama adalah BAW dan fase gerak kedua adalah asam asetat 15 . Dari KLT dengan fase gerak pertama, yaitu BAW tampak bahwa semua isolat hanya menghasilkan 1 bercak. Masing-masing isolat menghasilkan bercak dengan Rf 0,79 isolat A; 0,77 isolat B; 0,76 isolat C dan 0,76 isolat D. Dan selanjutnya dari KLT dengan fase gerak kedua, yaitu asam asetat 15 juga hanya 1 bercak saja yang muncul pada masing-masing isolat, yaitu dengan Rf 0,40 isolat A; 0,80 isolat B; 0,84 isolat C dan 0,51 isolat D. Hal ini menunjukkan bahwa semua isolat adalah tunggal murni sehingga dapat digunakan untuk analisis selanjutnya. Sebelum dilakukan analisis dengan reaksi warna, terlebih dahulu dilakukan scanning terhadap semua isolat untuk mengetahui hasil spektranya. Dari hasil scanning diperoleh puncak-puncak spektra dengan panjang gelombang tertentu yang sesuai dengan golongan flavonoida tertentu. Hasil puncak-puncak spektra tersebut dianalisis dan dibandingkan dengan acuan. Dari hasil scanning dan hasil KLT pendahuluan maka dapat diketahui prakiraan golongan dari masing-masing isolat Tabel IX. Isolat A dan D mengarah pada golongan flavon atau flavonol dengan 3-OH tersubstitusi. Isolat B mengarah pada golongan flavanon dan dihidroflavonol. Sedangkan isolat C mengarah pada golongan isoflavon. 46 PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI Warna bercak dengan UV 366 nm Puncak spektra Pustaka Markham, 1988 Isolat Tanpa NH 3 Dengan NH 3 Jenis flavonoida yang mungkin Markham, 1988 Pita I nm Pita II nm Pita I nm Pita II nm Golongan 310-350 250-280 Flavon Flavon atau flavonol tersulih pada 3-O mempunyai 5-OH tetapi tanpa 4’-OH bebas Beberapa 6- atau 8-OH flavon dan flavonol tersulih pada 3-O serta mengandung 5-OH Isoflavon, dihidroflavon, biflavonil dan beberapa flavanon yang mengandung 5-OH A Lembayung gelap Perubahan warna sedikit atau tanpa perubahan Khalkon yang mengandung 2- atau 4-OH bebas 343 259 330-360 250-280 Flavonol 3-OH tersubstitusi Perubahan warna sedikit atau tanpa perubahan Isoflavon yang tidak mengandung 5-OH B Fluoresensi biru muda Fluoresensi murup biru muda Isoflavon yang tidak mengandung 5-OH 319 296 300-330 275-295 Flavanon dan dihidroflavonol Perubahan warna sedikit atau tanpa perubahan Isoflavon yang tidak mengandung 5-OH C Fluoresensi biru muda Fluoresensi murup biru muda Isoflavon yang tidak mengandung 5-OH 327 242 310-330 245-275 Isoflavon 310-350 250-280 Flavon Flavon atau flavonol tersulih pada 3-O mempunyai 5-OH tetapi tanpa 4’-OH bebas Beberapa 6- atau 8-OH flavon dan flavonol tersulih pada 3-O serta mengandung 5-OH Isoflavon, dihidroflavon, biflavonil dan beberapa flavanon yang mengandung 5-OH D Lembayung gelap Perubahan warna sedikit atau tanpa perubahan Khalkon yang mengandung 2- atau 4-OH bebas 348 263 330-360 250-280 Flavonol 3-OH tersubstitusi 47 PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

G. Identifikasi Senyawa Flavonoida