3.7.2. Prosedur Pulasan Imunohistokimia COX-2
1. Siapkan preparat berupa potongan tipis jaringan 4µm yang sudah ditempelkan pada objek gelas yang telah di
coating 2. Preparat yang siap dipulas dimasukkan dalam inkubator 1 malam, suhu
38 C
3. Deparafinisasi dengan mencelupkan preparat kedalam cairan xylol
sebanyak 3 kali, masing-masing selama 5 menit 4. Rehidrasi dengan cara mencelupkan secara berurutan dalam Etanol
98 sebanyak 3 kali, masing-masing selama 5 menit, Alkohol 90, 80 dan 70, masing-masing selama 5 menit.
5. Bilas dengan air mengalir selama 5 menit 6. Masukkan kedalam H
2
O
2
0,3 dalam Metanol dingin selama 15 menit 7. Bilas dengan akuades selama 5 menit
8. Masukkan kedalam larutan Bufer Sitrat yang telah dipanaskan sebelumnya dalam
microwave selama 5’ - 2 x 5’
9. Dinginkan selama 20 menit dalam suhu ruangan
10. Bilas dengan akuades selama 5 menit dan keringkan air di sekitar potongan jaringan
11. Tandai disekeliling potongan jaringan yang ingin dipulas dengan Pap
pen 12. Bilas dalam larutan
PBS selama 5 menit
13. Bersihkan dari sisa cairan pencuci 14. Teteskan
blocking serum pada sediaan yang telah ditandai dengan
Pap pen selama 5 menit
Betty : Tampilan Imunohistokimia COX-2 pada Lesi Gastritis, Pre-Kanker dan Kanker Lambung. USU e-Repository © 2008.
15. Bilas dalam larutan PBS
selama 5 menit 16. Bersihkan dari sisa cairan pencuci
17. Teteskan antibodi primer anti COX-2
dengan pengenceran 1:50, inkubasi dalam tempat tertutup dengan suhu ruangan selama 60
menit 18. Bilas
dalam larutan
PBS sebanyak dua kali, masing-masing selama 5
menit 19. Bersihkan dari sisa cairan pencuci
20. Teteskan dengan antibodi sekunder, Biotinylated Universal
, inkubasi dalam tempat tertutup dengan suhu ruangan selama 10 menit
21. Bilas dalam
larutan PBS
sebanyak dua kali, masing-masing selama 5 menit
22. Bersihkan dari sisa cairan pencuci 23. Teteskan dengan
steptavidin-peroxidase conjugate , inkubasi dalam
tempat tertutup pada suhu ruangan selama 10 menit 24. Bilas
dalam larutan
PBS sebanyak dua kali, masing-masing selama 5
menit 25. Bersihkan dari sisa cairan pencuci
26. Teteskan larutan kromogen DAB
selama 5-10 menit 27. Bilas dengan air mengalir selama 5 menit
28. Counterstain
dengan hematoksilin Mayer selama 2 menit 29. Bilas dengan air mengalir
30. Dehidrasi dengan cara : celupkan secara berurutan pada cairan alkohol 70, 80, 90 dan etanol 98 masing-masing 20 celup
Betty : Tampilan Imunohistokimia COX-2 pada Lesi Gastritis, Pre-Kanker dan Kanker Lambung. USU e-Repository © 2008.
31. Masukkan dalam cairan xylol
selama 3 menit 32. Teteskan entelan dan tutup dengan kaca penutup
3.8. Alat Dan Bahan Penelitian 3.8.1
Kategori