UIN Syarif Hidayatullah Jakarta
percobaan yang sesuai yang berfungsi untuk memisahkan masing –
masing komponen. Kolom umumnya dibuat dari stainlesteel dan biasanya dioperasikan pada temperatur kamar, tetapi bisa juga digunakan
temperatur lebih tinggi Putra, 2004. f. Komputer, integrator, dan rekorder
Alat pengumpul data seperti komputer, integrator, atau rekorder dihubungkan dengan detektor. Alat ini akan mengukur sinyal elektronik
yang dihasilkan oleh detektor lalu memplotkannya sebagai suatu kromatogram yang selanjutnya dapat dievaluasi oleh seorang analis
Rohman dan Gandjar, 2007.
2.4.3 Teknik pemisahan dalam KCKT
Sistem isokratik yaitu suatu teknik pemisahan dimana selama proses analisis berlangsung, fase gerak atau komposisi fase gerak tidak berubah
yang berarti polaritasnya juga tetap. Sedangkan sistem gradient adalah suatu teknik pemisahan dimana
selama analisis berlangsung komposisi fase gerak berubah secara periodik. Teknik ini dilakukan dengan tujuan memisahkan campuran dengan
polaritas yang sangat beragam.
2.4.4 Metode analisis dalam KCKT
Metode analisis KCKT dapat dilakukan secara kualitatif dan kuantitatif. Analisis kualitatif merupakan cara yang terbaik adalah dengan
menggunakan metode waktu retensi :
Keterangan : t
Ri
= waktu retensi komponen zat t
Rst
= waktu retensi standar Data waktu retensi khas tetapi tidak spesifik, artinya terdapat lebih dari
satu komponen zat yang mempunyai waktu retensi yang sama Rohman dan Gandjar, 2007.
Analisis kuantitatif memiliki tahapan adalah sebagai berikut : membuat spektrum serapan komponen
– komponen yang ada dalam
UIN Syarif Hidayatullah Jakarta
sampel, mencari panjang gelombang optimum untuk campuran komponen zat dalam sampel, dan mencari fase gerak yang sesuai agar komponen
– komponen tersebut terpisah Rohman dan Gandjar, 2007.
Dasar perhitungan kuantitatif untuk suatu komponen yang dianalisis adalah mengukur luas puncaknya. Ada beberapa metode yang dapat
digunakan, yaitu : a. Baku luar Baku eksternal
Metode kuntitatif yang paling umum untuk menetapkan konsentrasi senyawa yang tidak diketahui konsentrasinya dalam suatu
sampel adalah dengan menggunakan plot kalibrasi menggunakan baku eksternal. Larutan
– larutan ini ditunjuk sebagai larutan eksternal karena larutan
– larutan ini disiapkan dan dianalisa secara terpisah dari kromatogram senyawa tertentu yang ada dalam sampel. Sampel yang
mengandung senyawa tertentu yang akan ditetapkan konsentrasinya dan telah disiapkan, selanjutnya diinjeksikan dan dianalisis dengan
cara yang sama Rohman dan Gandjar, 2007. Senyawa atau senyawa-senyawa yang akan ditetapkan kadarnya,
idealnya jumlah baku sama dengan jumlah bahan yang akan dianalisis, selanjutnya membandingkan kromatogram baku dengan kromatogram
sampel Putra, 2004.
Keterangan : Cs = konsentrasi sampel
Cst = konsentrasi standar As = luas puncak sampel
Ast = luas puncak standar Bila bekerja dengan metoda ini, respons detektor harus linier
untuk setiap senyawa pada kisaran range konsentrasi yang digunakan, dan juga kita harus menginjeksikan bila secara manual
jumlah yang sama untuk setiap komponen pada kedua kromatografi, sehingga berhasilnya operasi dari metoda ini tergantung pada
kemampuan menginjeksi sampel dengan presisi yang bagus Putra, 2004.
UIN Syarif Hidayatullah Jakarta
b. Baku dalam Baku internal Baku internal merupakan senyawa yang berbeda dengan analit,
meskipun demikian senyawa ini harus terpisah dengan baik selama proses pemisahan Rohman dan Gandjar, 2007.
Pada metode ini pada sampel ditambahkan zat tertentu konsentrasi
yang diketahui.
Kromatogram yang
diperoleh dibandingkan dengan kromatogram sampel atau campuran senyawa
dalam sampel Putra, 2004. Baku inetrnal dapat menghilangkan pengaruh karena adanya
perubahan – perubahan pada ukuran sampel atau konsentrasi karena
variasi instrumen Rohman dan Gandjar, 2007. Selain itu, metoda ini mempunyai keuntungan dibanding dengan metoda baku luar karena
metode ini mengkompensasi variasi volume injeksi dan juga untuk perubahan yang kecil dari sensitivitas detektor yang bisa terjadi
karena itu tidak perlu menginjeksi dalam jumlah yang sama setiap waktu, maka metoda ini biasanya mempunyai presisi yang lebih baik
dari pada menggunakan baku luar Putra, 2004.
2.5 Validasi metode
