Alat Bahan METODE PENELITIAN

BAB III METODE PENELITIAN

Penelitian ini dilakukan secara eksperimental untuk menguji aktivitas antikanker dari ENBA dan EEABA terhadap sel T47D yang dikombinasikan dengan doksorubisin melalui pengujian efek sitotoksik, selektivitas, apoptosis, siklus sel, dan penghambatan ekspresi protein. Tahap awal dilakukan identifikasi bahan tumbuhan sampel, dilanjutkan pengumpulan dan pembuatan simplisia, pembuatan pereaksi, karakterisasi simplisia dan ekstrak, skrining fitokimia simplisia dan ekstrak, dan pembuatan ekstrak n-heksana, ekstrak etilasetat, dan ekstrak etanol dari buah andaliman. Lalu dilakukan pengujian efek sitotoksik ekstrak n-heksana ENBA dan ekstrak etilasetat EEABA buah andaliman serta kombinasi ekstrak dengan doksorubisin, pengujian selektivitas, dan pengujian indeks kombinasi. Selanjutnya kombinasi optimum ENBA dan EEABA dengan doksorubisin dilakukan pengujian apoptosis, siklus sel, dan pengujian ekspresi Bcl-2 dan cox-2.

3.1 Alat

Alat-alat yang digunakan pada penelitian ini adalah alat-alat gelas, autoclave Hirayama, blender Philips, conical tube, eksikator, elisa reader BenMark Biorad, inkubator CO 2 Heraceus, FACScan flow cytometer, inverted microscope Olympus, optilab, krus porselin, laminar air flow Labconco, mikropipet, flask wadah kultur, hemositometer, alat penghitung, neraca kasar Home Line, neraca listrik Vibra AJ, oven Memmert, penangas air Yenaco, rotary evaporator Haake D1, sentrifugator, seperangkat alat penetapan kadar air, seperangkat alat Universitas Sumatera Utara destilasi, cawan porselen alas rata, krus porselen bertutup, desikator, tanur, vortex, 24-well plate, 6-well plate, dan 96-well plate.

3.2 Bahan

Bahan-bahan yang digunakan pada penelitian ini adalah buah andaliman yang sudah matang yang berwarna hijau kemerahan sampai merah tua kecoklatan, etilasetat hasil destilasi, dan bahan kimia yang digunakan kecuali dinyatakan lain adalah berkualitas pro analisis, yaitu: α-naftol, amonium hidroksida, asam asetat anhidrida, asam asetat pekat, asam klorida pekat, asam nitrat pekat, asam sulfat pekat, benzen, besi III klorida, bismut III nitrat, eter, etanol, n-heksana, etilasetat, hepes Sigma, iodium, isopropanol, kalium iodida, kloroform, metanol, natrium hidroksida, natrium sulfat anhidrat, petroleum eter, raksa II klorida, serbuk magnesium, serbuk zinkum, sodium hidrogen sulfat Macalai tesque, timbal II asetat, toluena, air suling, dan dimethyl sulfoxide DMSO Sigma. Sel kanker payudara T47D merupakan koleksi Laboratorium Parasitologi Fakultas Kedokteran UGM. Media Roswell Park Memorial Institute RPMI, media M199, Fetal Bovine Serum FBS 10 vv Gibco, penisillin-streptomisin 2 vv Gibco, dan Fungizone amphoterisin B 0,5. Selain bahan-bahan di atas, digunakan juga larutan 0,25 trypsin-EDTA Gibco, MTT [3-4,5-dimetiltiazol-2-il-2,5 difeniltetrazolium bromida] Sigma dengan konsentrasi 5 mgmL, Phospate Buffer Saline PBS, natrium dodesil sulfat dalam 0,01 N HCl, propium iodida Sigma Aldrich, Annexin V, protein cox-2, dan protein Bcl-2.

3.3 Penyiapan Bahan Uji