Penetapan Kadar Fenilbutazon dan Propifenazon dalam Tablet secara Spektrofotometri Derivatif

Lampiran 1. Gambar Sampel X

Gambar 1. Tablet Sampel X

Gambar 2 Tablet X yang telah digerus homogen

Lampiran 2. Komposisi Tablet X Daftar Spesifikasi Sampel

No. Reg : DKL 7812422316A1 Expire Date : November 2015

Komposisi : Phenylbutazone…………... 125 mg Propifenazon……….… 125 mg

Lampiran 3. Gambar Alat

Gambar 3 Spektrofotometer UV-Vis (Shimadzu 1800)

Gambar 4 Neraca analitik (Mettler Toledo)

Lampiran 4. Perhitungan Pembuatan NaOH 0,1N

N = ���� ��

�

1000 �� ������� 0,1 = gram

40

x

1000 1000 gram NaOH = 4 gram

Lampiran 5. Bagan Alir Prosedur Penelitian

← dipipet 5 mL

← dimasukkan ke dalam labu tentukur 50 mL

← dilarutkan dan dicukupkan dengan NaOH LIB II Fenilbutazon 100 μg/mL

3 μg/mL 4,5 μg/mL 6 μg/mL 7,5 μg/mL 9 μg/mL Fenilbutazon

← ditimbang 50 mg

← dimasukkan ke dalam labu tentukur 50 mL

← dilarutkan dan dicukupkan dengan NaOH 0,1N LIB I Fenilbutazon 1000 μg/mL

←dipipet 0,6 mL ←dimasukkan ke dalam labu 10 mL ←ditambahka n NaOH 0,1 N sampai garis tanda ←dipipet 0,45 mL ←dimasukk an ke dalam labu 10 mL ←ditambahk an NaOH 0,1 N sampai garis tanda

← dipipet 0,3 mL

← dimasukkan ke dalam labu 10 mL

← ditambahkan NaOH 0,1 N sampai garis tanda

←dipipet 0,75 mL

←dimasukka n ke dalam labu 10 mL ←ditambahka n NaOH 0,1 N sampai garis tanda

← dipipet 0,9 mL

← dimasukka n ke dalam labu 10 mL

← ditambahk an NaOH 0,1 N sampai garis tanda

Lampiran 5. (Lanjutan)

← dipipet 5 mL

← dimasukkan ke dalam labu tentukur 50 mL

← dilarutkan dan dicukupkan dengan NaOH LIB II Propifenazon 100 μg/mL

5 μg/mL 8 μg/mL 10 μg/mL 13 μg/mL 15 μg/mL Propifenazon

← ditimbang 50 mg

← dimasukkan ke dalam labu tentukur 50 mL

← dilarutkan dan dicukupkan dengan NaOH 0,1N LIB I Propifenazon 1000 μg/mL

←dipipet 1,0 mL

←dimasukka n ke dalam labu 10 mL ←ditambahk an NaOH 0,1 N sampai garis tanda

← dipipet 0,8 mL

← dimasukka n ke dalam labu 10 mL

← ditambahk an NaOH 0,1 N sampai garis tanda

← dipipet 0,5 mL

← dimasukka n ke dalam labu 10 mL

← ditambahk an NaOH 0,1 N sampai garis tanda

← dipipet 1,3 mL

← dimasukka n ke dalam labu 10 mL

← ditambahka n NaOH 0,1 N sampai garis tanda

←dipipet 1,5 mL

←dimasukka n ke dalam labu 10 mL

←ditambahk an NaOH 0,1 N sampai garis tanda

Lampiran 5. (Lanjutan)

Larutan Standar Fenilbutazon (3; 4,5; 6; 7,5; 9) μg/mL

←diukur serapan pada λ 200-400 nm

←ditransformasikan ke serapan derivat pertama

←ditentukan zero crossing

←ditentukan panjang gelombang analisis

λ = 247 nm

Persamaan Regresi Y= 0.0001414X - 0.00005

Lampiran 5. (Lanjutan)

Larutan Standar Propifenazon (5; 8; 10; 13; 15) μg/mL

←diukur serapan pada λ 200-400 nm

←ditransformasikan ke serapan derivat pertama

←ditransformasikan ke serapan derivat kedua

←ditentukan zero crossing

←ditentukan panjang gelombang analisis

λ= 264 nm

Persamaan Regresi Y= 0.00022X + 0.00006

Lampiran 5. (Lanjutan)

←ditimbang

←digerus dalam lumpang sampai halus dan homogen

Nilai Absorbansi

Kadar Serbuk 20 Tablet

←ditimbang setara 50 mg fenilbutazon

← dihitung kesetaraan propifenazon yang terkandung didalamnya (penimbangan dilakukan sebanyak 6 kali pengulangan)

←dimasukkan kedalam labu tentukur 100 mL

←dilarutkan dengan NaOH 0,1N

←dihomogenkan dengan sonikator selama 15 menit

←dicukupkan dengan NaOH 0,1N sampai garis tanda

←disaring , dibuang ± 10 mL filtrat pertama

←ditampung filtrat selanjutnya

←dipipet 0,25 mL

←dimasukkan kedalam labu tentukur 25 mL

←dicukupkan dengan NaOH 0,1N sampai garis tanda

←diukur serapan pada derivat pertama; panjang

Lampiran 6. Kurva Serapan Baku Fenilbutazon dan Baku Propifenazon

Gambar 6Kurva serapan fenilbutazon konsentrasi 3 μg/mL

Gambar 7 Kurva serapan fenilbutazon konsentrasi 4,5 μg/mL

Lampiran 6. (Lanjutan)

Gambar 9 Kurva serapan fenilbutazon konsentrasi 7,5 μg/mL

Gambar 10 Kurva serapan fenilbutazon konsentrasi 9 μg/mL

Lampiran 6. (Lanjutan)

Gambar 12 Kurva serapan propifenazon konsentrasi 8 μg/mL

K

Gambar 13 Kurva serapan propifenazon konsentrasi 10 μg/mL

Lampiran 6. (Lanjutan)

Gambar 15 Kurva serapan propifenazon konsentrasi 15 μg/mL

Lampiran 7. Kurva Serapan Derivat Pertama Fenilbutazon dan Propifenazon

Lampiran 7. (Lanjutan)

Gambar 17 Kurva serapan derivat pertama fenilbutazon konsentrasi 4,5 μg/mL

Gambar 18 Kurva serapan derivat pertama fenilbutazon konsentrasi 6 μg/mL

Lampiran 7. (Lanjutan)

Gambar 20 Kurva serapan derivat pertama fenilbutazon konsentrasi 9 μg/mL

Gambar 21 Kurva serapan derivat propifenazon konsentrasi 5 μg/mL

Lampiran 7. (Lanjutan)

Gambar 23 Kurva serapan derivat pertama propifenazon konsentrasi 10 μg/mL

Gambar 24 Kurva serapan derivat pertama propifenazon konsentrasi 13 μg/mL

Lampiran 8. Data Kalibrasi Baku Fenilbutazon, Persamaan Regresi dan Koefisien Korelasi

Kalibrasi Serapan Derivat Pertama Fenilbutazon pada Panjang Gelombang 247 nm

No. Konsentrasi (μg/mL) (X) Absorbansi (Y)

1. 0,0000 0,00000

2. 3,0000 0,00421

3. 4,5000 0,00615

4. 6,0000 0,00847

5. 7,5000 0,01056

6. 9,0000 0,01271

Perhitungan Persamaan Garis Regresi

No. X Y XY X2` Y2

1. 0,0000 0,00000 0,00000 0,00000 0,0000000000 2. 3,0000 0,00421 0,01263 9,00000 0,0000177241 3. 4,5000 0,00615 0,02767 20,25000 0,0000378225 4. 6,0000 0,00847 0,05082 36,00000 0,0000717409 5. 7,5000 0,01056 0,07920 56,25000 0,0001115136 6. 9,0000 0,01271 0,11439 81,00000 0,0001615441

ΣX = 30

X

� =5

ΣY = 0,04210

Y

� = 0,00702

ΣXY = 0,28471

ΣY2 = 202,5

Σ Y2 = 0,0004003452

�=(∑ ��)−(∑ �)(∑ �)/�

(∑ �2₎₋(∑ �)2 �

=(0,28471 )−(30)(0,04210 )/6

(202,5)−(30)²/6 = 0,001414

��=���+�

�= �� − ���= (0,00702)−(0,001414)(5) =−0.00005

Lampiran 8. (Lanjutan)

Perhitungan Koefisien Korelasi (⥾)

⥾ = (∑ ��)−(∑ �)(∑ �)/�

��(∑ �2_{)−(∑ �)}2_{/���(∑ �}2_{)−(∑ �)}2_/��

⥾ = (0,28471 ) – (30)(0,04210 ) /6

�[(202,5)−(30)2_{/6][(0,0004003452 )−(0,04210 )}2_/6]

⥾ = 0,07421

0,07422

⥾ = 0,9998

Maka, koefisien korelasi dari data kalibrasi serapan derivat pertama fenilbutazon pada panjang gelombang 247nm adalah 0,9998.

Lampiran 9. Data Kalibrasi Propifenazon, Persamaan Regresi dan Koefisien Korelasi

Kalibrasi Serapan Derivat Pertama Propifenazon Pada Panjang Gelombang 264 nm

No. Konsentrasi (μg/mL) (X) Absorbansi (Y)

1. 0,00000 0,00000

2. 5,00000 0,00125

3. 8,00000 0,00189

4. 10,00000 0,00233

5. 13,00000 0,00294

6. 15,00000 0,00339

Perhitungan Persamaan Garis Regresi

No. X Y XY` X2 Y2

1. 0,00000 0,00000 0,00000 0,00000 0,00000 2. 5,00000 0,00125 0,00625 25,00000 1,5625.10-6 3. 8,00000 0,00189 0,01512 64,00000 3,5721.10-6 4. 10,00000 0,00233 0,02330 100,00000 5,4289.10-6 5. 13,00000 0,00294 0,03822 16900000 8,6436.10-6 6. 15,00000 0,00339 0,05085 225,00000 11,4921.10-6

ΣX = 51

X

� =8,5

ΣY = 0,01180

Y

� = 0,00196

ΣXY =

0,13374 ΣX 2

= 583 ΣY 2

= 30,6992.10-6

�=(∑ ��)−(∑ �)(∑ �)/�

(∑ �2_{)−(∑ �)}2_/� =

(0,13374 )−(51)(0,01180 )/6

(583)−(512_)/6 = 0,000224

��=���+�

�= �� − ���= (0,00196)−(0,000224)(8,5 ) = 0,00006

Lampiran 9. (Lanjutan)

Perhitungan Koefisien Korelasi (⥾)

⥾ = (∑ ��)−(∑ �)(∑ �)/�

��(∑ �2_{)−(∑ �)}2_{/���(∑ �}2_{)−(∑ �)}2_/��

⥾ = (0,13374 )−(51)(0,01180 )/6

�[(583)−512_{/6][(30,6992.10}−6_{)−(0,01180 )}2_/6]

⥾ = 0,20064

0,20081

⥾ = 0,99915

Maka, koefisien korelasi dari data kalibrasi serapan derivat pertama propifenazon pada panjang gelombang 264 nm adalah 0,99915.

Lampiran 10. Perhitungan Batas Deteksi (Limit of Detection,LOD) dan Batas Kuantitasi (Limit of Quantitation,LOQ) Fenilbutazon

Persamaan garis regresinya adalah �= 0,001414� −0,00005

No. X Y Yi Y-Yi (10-5) (Y-Yi)2 (10-10)

1 0,0000 0,00000 -0,00005 5 25

2 3,0000 0,00421 0,00419 2 4

3 4,5000 0,00615 0,00631 -16 256

4 6,0000 0,00847 0,00843 4 16

5 7,5000 0,01056 0,01055 1 1

6 9,0000 0,01271 0,01268 3 9

Σ(Y-Yi)2 311

�� = �∑(�−��)2

�−2 =�

311.10−10

6−2 = 8,8175.10

-5

���= 3 × ��

����� =

3 × 8,8175 .10−5

0,001414 = 0,1871 μg/mL

���= 10 × _{�����}��= 10 × 1,6583 .10−5

Lampiran 11. Perhitungan Batas Deteksi (Limit of Detection,LOD) dan Batas Kuantitasi (Limit of Quantitation,LOQ) Propifenazon

Persamaan garis regresinya adalah Y = 0,00022X + 0,00006

No. X Y Yi Y-Yi (10-5) (Y-Yi)2 (10-10)

1 0,00000 0,00000 0,00006 -6 36

2 5,00000 0,00125 0,00116 9 81

3 8,00000 0,00189 0,00182 7 49

4 10,00000 0,00233 0,00226 7 49

5 13,00000 0,00294 0.00292 2 4

6 15,00000 0,00339 0,00336 3 9

Σ (Y-Yi)2 228

��= �∑(�−��)2

�−2 =�

228.10−10

6−2 = 7,5498 .10

-5

���= 3 × _{�����}�� = 3 × 7,5498 .10−5

0,00022 = 1,0295 μg/mL

���= 10 × _{�����}��= 10 × 7,5498 .10−5

Lampiran 12. Kurva Serapan Derivat Pertama Sampel

Gambar 26 Kurva serapan sampel X-1

Lampiran 12. (Lanjutan)

Gambar 28 Kurva serapan sampel X-3

Lampiran 12. (Lanjutan)

Gambar 30 Kurva serapan sampel X-5

Lampiran 13. Hasil Analisis Kadar Fenilbutazon dan Propifenazon dalam Tablet 1. Kadar Fenilbutazon dalam Sediaan tablet

Nama Sediaan Penimban gan(g) Setara (mg) Absorbansi pada λ = 247nm

Konsentra si teoritis (μg/mL)

Konsent rasi perolehan (μg/mL) Kadar % Tablet X

0,2721 49,9600 0,00684 4,9960 4,8730 97,93 0,2721 49,9600 0,00760 4,9960 5,0600 101,69 0,2730 50,1211 0,00721 5,0120 5,1340 102,85 0,2738 50,2680 0,00685 5,0270 4,8800 97,46 0,2724 50,0100 0,00688 5,0010 4,9000 98,37 0,2723 49,9900 0,00738 4,9990 5,2500 105,44 2. Kadar Propifenazon dalam Sediaan Tablet

Nama Sediaan Penimban gan (g) Setara (mg) Absorba nsi pada

λ=264 nm

Konsentr asi teoritis (μg/mL)

Konsentra si perolehan( μg/mL) Kadar % Tablet X

0,2721 49,9600 0,00112 4,9960 4,8182 96,25 0,2721 49,9600 0,00112 4,9960 4,8182 96,25 0,2730 50,1211 0,00113 5,0120 4,8636 96,84 0,2738 50,2680 0,00113 5,0270 4,8636 96,56 0,2724 50,0100 0,00113 5,0010 4,8636 97,06 0,2723 49,9900 0,00114 4,9990 4,9091 98,00

Lampiran 14. Contoh Perhitungan Kadar Fenilbutazon dan Propifenazon dalam Sediaan Tablet

Berat 20 tablet = 13,6170 g

Ditimbang analit setara dengan 50 mg fenilbutazon, maka jumLah analit yang ditimbang adalah;

x1= 50 mg

(20 x 125 mg) x 13,6170g

= 0,2723g

Kemudian dihitung kesetaraan Propifenazon yang terkandung dalam 0,2723g analit ini.

x2= 0,2723 g

(13,6170 g) x (20 x 125 mg) = 49,9926 mg

Dilarutkan analit yang ditimbang dengan NaOH 0,l N dengan kuantitatif dalam labu tentukur 100 mL sampai garis tanda. Larutan kemudian dihomogenkan dengan pengaduk ultrasonik selama 15 menit. Larutan tersebut kemudian disaring, lebih kurang 10 mL filtrat pertama dibuang. Filtrat selanjutnya ditampung.

Konsentrasi analit fenilbutazon

=

50 mg

(100 mL)

x 1000

μg = 500 μg/mL Konsentrasi analit propifenazon

=

49,9926 mg

(100 mL) x 1000 μg = 499,926 μg/mL Kemudian dari larutan filtrat ini, dipipet 0,25mL dan dimasukkan kedalam labu tentukur 25 mL dan diencerkan dengan NaOH 0,1 N hingga garis tanda.

Konsentrasi fenilbutazon sampel = 500

μg /mL _{x 0,25 mL}

(25 mL )

=

5 μg/mL Konsentrasi propifenazon sampel = 499,926μg/mL x 0,25 mL

Lampiran 14. (Lanjutan)

Berat serbuk yang ditimbang adalah 0,2721 g, maka terlebih dahulu dihitung kesetaraan dengan fenilbutazon dan propifenazon.

Kesetaraan dengan fenilbutazon = 0,2721 g

13,6170 g x (20 x 125mg) = 49,9600 mg Konsentrasi =49,9600 mg

100 mL x 1000 μg = 499,6 μg/mL Konsentrasi akhir teoritis fenilbutazon

= 499,6μg/mL

25 mL x 0,25 mL = 4,996 μg/mL Kesetaraan dengan propifenazon = 0,2721 mg

13,6170 g x (20 x 125mg) = 49,9600 mg Konsentrasi = 49,9600 mg

100 mL x 1000 μg = 499,6 μg/mL Konsentrasi akhir teoritis propifenazon

= 499,6μg/mL

25 mL x 0,25 mL = 4,996 μg/mL

Absorbansi fenilbutazon pada derivat pertama pada panjang gelombang 247 nm adalah 0,00684.

Kadar dihitung dari persamaan regresi pada panjang gelombang analisis fenilbutazon. Y= 0,001414X - 0,00005

Konsentrasi perolehan: Y = 0,001414X - 0,00005

0,00684 = 0,001414X - 0,00005 0,00684 + 0,00005 = 0,001414X

X = 0,00689 0,001414 X = 4,8730 μg/mL

Lampiran 14. (Lanjutan)

Kadar fenilbutazon = 4,8730 μg/mL

4,9960 μg/mL x 100,4 % = 97,93%

Absorbansi propifenazon pada derivat pertama pada panjang gelombang 264 nm adalah 0,00112.

Kadar dihitung dari persamaan regresi pada panjang gelombang analisis propifenazon Y = 0,00022X + 0,00006

Konsentrasi perolehan: Y = 0,00022X + 0,00006 0,00112 = 0,00022X + 0,00006

0,00112-0,00006 = 0,00022X X = 0,00106

0,00022 X = 4,8182 μg/mL Kadar propifenazon = 4,8182 μg/mL

Lampiran 15. Perhitungan Statistik Fenilbutazon pada Tablet X

SD =

�

∑��−��

2

�−1

=

�

51,6344

6−1

=

�

51,6344

5 = 3,2135

Pada interval kepercayaan 99% dengan nilai α = 0,01, dk = n-1= 5, maka t(α/2,dk) = 4,0321

Data diterima jika t hitung < t tabel t hitung 1 =

�

�−�

�� √�⁄

�

=

�

−2,69

3,2135⁄√6

�

= 2,0504 t hitung 2 =

�

�−�

�� √�⁄

�

=

�

1,07

3,2135⁄√6

�

= 0,8156 t hitung 3 =

�

�−�

�� √�⁄

�

=

�

2,23

3,2135⁄√6

�

= 1,6998 t hitung 4 =

�

�−�

�� √�⁄

�

=

�

−3,16

3,2135⁄_√6

�

= 2,4087

No. X

Kadar (%) (� − �) (� − �)

2

1 97,93 -2,69 7,2361

2 101,69 1,07 1,1449

3 102,85 2,23 4,9729

4 97,46 -3,16 9,9856

5 98,37 -2,25 5,0625

6 105,44 4,82 23,2324

Lampiran 15. (Lanjutan) t hitung 5 =

�

�−�

�� √�⁄

�

=

�

−2,25

3,2135⁄√6

�

= 1,7151 t hitung 6 =

�

�−�

�� √�⁄

�

=

�

4,82

3,2135⁄√6

�

= 3,6741

Dari hasil perhitungan tersebut diperoleh bahwa semua t hitung < t tabel, maka semua data tersebut diterima.

Kadar Fenilbutazon dalam tablet X:

μ = � ± (t_{α/2, dk)} x SD/√n)

= 100,62 ± (4,0321 x 3,2135/√6) = (100,62 ± 5,29)%

Lampiran 16. Perhitungan Statistik Propifenazon pada Tablet X

SD =

�

∑��−��

2

�−1

=

�

2,1679

6−1

=

�

2,1679

5 = 0,4336

Pada interval kepercayaan 99% dengan nilai α = 0,01, dk = n-1= 5, maka t(α/2,dk) = 4,0321

Data diterima jika t hitung < t tabel t hitung 1 =

�

�−�

�� √�⁄

�

=

�

−0,58

0,4336⁄√6

�

= 3,2765 t hitung 2 =

�

�−�

�� √�⁄

�

=

�

−0,58

0,4336⁄_√6

�

= 3,2765 t hitung 3 =

�

�−�

�� √�⁄

�

=

�

0,02

0,4336⁄_√6

�

= 0,1130

No. X

Kadar (%) (� − �) (� − �)2

1 96,25 -0,58 0,3364

2 96,25 -0,58 0,3364

3 96,85 0,02 0,0004

4 96,56 -0,27 0,0729

5 97,06 0,23 0,0529

6 98,00 1,17 1,3689

Lampiran 16. (Lanjutan) t hitung 4 =

�

�−�

�� √�⁄

�

=

�

−0,27

0,4336⁄√6

�

= 1,5254 t hitung 5 =

�

�−�

�� √�⁄

�

=

�

0,23

0,4336⁄√6

�

= 1,2994 t hitung 6 =

�

�−�

�� √�⁄

�

=

�

1,17

0,4336⁄_√6

�

= 6,6095

Dari hasil perhitungan tersebut diperoleh bahwa t hitung 6 > t tabel, maka data ke 6 tersebut ditolak.

Data ke 6 ditolak, maka :

SD =

�

∑��−��

2

�−1

=

�

0,7990

5−1

=

�

0,7990

4 = 0,4469

Pada interval kepercayaan 99% dengan nilai α = 0,01, dk = n-1= 4, maka t_(α/2,dk) = 4,60409

No. X

Kadar (%) (� − �) (� − �)2

1 96,25 -0,58 0,3364

2 96,25 -0,58 0,3364

3 96,85 0,02 0,0004

4 96,56 -0,27 0,0729

5 97,06 0,23 0,0529

Lampiran 16. (Lanjutan)

Data diterima jika t hitung < t tabel t hitung 1 =

�

�−�

�� √�⁄

�

=

�

−0,58

0,4469⁄_√5

�

= 2,9029 t hitung 2 =

�

�−�

�� √�⁄

�

=

�

−0,58

0,4469⁄_√5

�

= 2,9029 t hitung 3 = � �−�

��⁄√��

=

�

0,02

0,4469⁄�5� = 0,1001

t hitung 4 =

�

�−� �� √�⁄

�

=

�

−0,27

0,4469⁄√5

�

= 1,3513 t hitung 5 =

�

�−�

�� √�⁄

�

=

�

0,23

0,4469⁄√5

�

= 1,1511

Dari hasil perhitungan tersebut diperoleh bahwa semua t hitung < t tabel, maka semua data tersebut diterima.

Kadar Propifenazon dalam Tablet X:

μ = � ± (tα/2, dk) x SD/√n)

= 96,6 ± (4,60409 x 0,4469/√5) = (96,6 ± 0,92) %

Lampiran 17. Kurva Serapan X pada Uji Perolehan Kembali

Gambar 32 Kurva serapan perolehan kembali 80%-1 pada tablet X

Lampiran 17. (Lanjutan)

Gambar 34 Kurva serapan perolehan kembali 80%-3 pada tablet X

Lampiran 17. (Lanjutan)

Gambar 36 Kurva serapan perolehan kembali100 %-2 pada tablet X

Lampiran 17. (Lanjutan)

Gambar 38 Kurva serapan perolehan 120%-1 pada tablet X

Lampiran 17. (Lanjutan)

Lampiran 18. Data Hasil Persen Perolehan Kembali Fenilbutazon pada Tablet X dengan Metode Penambahan Baku (Standard Addition Method)

No Konsentra si (%) Penimbang an (g) Absorbansi pada λ= 247 nm Konsentrasi Baku yang ditambahk an (mg) Persen perolehan kembali (%) Setelah penambahan baku (mg) Sebelum penambahan baku (mg) 1. 80

0,1527 0,00562 40,0990 28,2105 12,0480 98,68

2. 0,1527 0,00562 40,0990 28,2105 12,0480 98,68

3. 0,1524 0,00561 40,0280 28,1551 12,0480 98,55

4.

100

0,1905 0,00705 50,2120 35,1985 15,0600 99,69

5. 0,1908 0,00703 50,0710 35,2539 15,0600 98,39

6. 0,1910 0,00704 50,1410 35,2909 15,0600 98,61

7.

120

0,2287 0,00847 60,2540 42,1864 18,0720 99,98

8. 0,2289 0,00846 60,1840 42,2789 18,0720 99,08

Lampiran 19. Data Hasil Persen Perolehan Kembali Propifenazon pada Tablet X dengan Metode Penambahan Baku (Standard AdditionMethod)

No Konsentra si (%)

Penimbang an (g)

Absorbansi pada λ=

213,8 nm Konsentrasi Bakuyang ditambahk an (mg) Persen perolehan kembali (%) Setelah penambahan baku (mg) Sebelum penambahan baku (mg) 1. 80

0,1527 0,00092 39,0910 27,0816 11,9760 100,28

2. 0,1527 0,00092 39,0910 27,0816 11,9760 100,28

3. 0,1524 0,00092 39,0910 27,0284 11,9760 100,72

4.

100

0,1905 0,00113 48,6360 33,7855 14,9700 99,20

5. 0,1908 0,00114 49,0910 33,8387 14,9700 101,88

6. 0,1910 0,00114 49,0910 33,8742 14,9700 101,65

7.

120

0,2287 0,00134 58,1820 40,5603 17,9640 98,09

8. 0,2289 0,00135 58,6360 40,5958 17,9640 100,42

Lampiran 20. Contoh Perhitungan Persentase Perolehan Kembali (%recovery) Sampel yang digunakan adalah tablet X

Berat 20 tablet X = 13,6170 g

Berat kesetaraan penimbangan sampel pada penetapan kadar = 50 mg

Perolehan 80%

Fenilbutazon 80% = 80

100 x 50 mg = 40 mg Analit fenilbutazon 70% = 70

100 x 40 mg = 28 mg Penimbangan serbuk analit setara 28 mg fenilbutazon Sampel yang ditimbang = 28 mg

20x125 mg x 13,6170 g = 0,1525 g Baku fenilbutazon 30% yang ditambahkan = 30

100 x 40 mg = 12 mg Jumlah analit propifenazon dalam serbuk yang ditimbang :

=0,1525 g

13,6170 g x (20 x 125 mg) = 27,9981 mg Baku propifenazon 30% yang ditambahkan :

= = 12 mg

Perolehan100%

Fenilbutazon 100% = 100

100 x 50 mg = 50 mg Analit fenilbutazon 70% = 70

100 x 50 mg = 35 mg Penimbangan serbuk analit setara 35 mg fenilbutazon

      mg mg mgx 125 40 125 100 30

Lampiran 20. (Lanjutan)

Sampel yang ditimbang = 35 mg

20x125 mg x 13,6170 g = 0,1906 g Baku fenilbutazon 30% yang ditambahkan = 30

100 x 50 mg = 15 mg Jumlah analit propifenazon dalam serbuk yang ditimbang :

=0,1906 g

13,6170 g x (20 x 125 mg) = 34,9930 mg Baku propifenazon 30 % yang ditambahkan :

= = 15 mg

Perolehan 120%

Fenilbutazon 120% = 120

100 x 50 mg = 60 mg Analit fenilbutazon 70% = 70

100 x 60 mg = 42 mg Penimbangan serbuk analit setara 42 mg fenilbutazon Sampel yang ditimbang = 42 mg

20x125 mg x 13,6170 g = 0,2288 g Baku fenilbutazon 30% yang ditambahkan = 30

100x 60 mg = 18 mg Jumlah analit propifenazon dalam serbuk yang ditimbang :

=0,2288 g

13,6170 g x (20 x 125 mg) = 42,0063 mg Baku propifenazon 30% yang ditambahkan :

= = 18 mg

      mg mg mgx 125 50 125 100 30       mg mg mgx 125 60 125 100 30

Lampiran 20. (Lanjutan)

Contoh perhitungan % perolehan kembali pada perolehan 80%

Misalnya absorbansi analisis (Y) : Penimbangan sampel = 0,1527 g Fenilbutazon (247 nm) = 0,00562 Propifenazon (264 nm) = 0,00092

A. Fenilbutazon

Persamaan regresi pada panjang gelombang analisis fenilbutazon (λ=247 nm):

Y = 0,001414X - 0,00005 Konsentrasi fenilbutazon:

Y = 0,001414X - 0,00005 0,00562 = 0,001414X - 0,00005 0,00562 + 0,00005 = 0,001414X

X = 0,00562 +0,00005 0,001414 X = 4,0099 μg/mL

JumLah awal setelah penambahan bahan baku (CF):

= Konsentrasi Fenilbutazon (μg/mL) x Volume (mL) x faktor pengenceran = 4,0099 μg/mL x 100 mL x (100)

= 40099 μg = 40,099 mg

Lampiran 20. (Lanjutan)

JumLah sampel sebelum penambahan bahan baku (CA): CA = Penimbangan Sampel

A x (B x C)

Keterangan :

A = Berat sampel yang akan ditimbang setara 28 mg analit fenilbutazon 70% B = Analit fenilbutazon 70%

C = Kadar rata-rata sampel CA =

0,1527 �

0,1525 � x (28 mg x 100,62%) = 28,2105 mg

JumLah baku yang ditambahkan (C*A) = D x E Keterangan :

D = Baku fenilbutazon 30% (yang ditambahkan) E = % kadar baku fenilbutazon dari sertifikat analisis

C*A = 12 x 100,4% = 12,048 mg Maka % perolehan kembali fenilbutazon:

% perolehan kembali = CF−CA

C∗_A x 100 % Keterangan:

CF = JumLah awal setelah penambahan bahan baku CA = JumLah sampel sebelum penambahan bahan baku C*A = JumLah baku yang ditambahkan

Lampiran 20. (Lanjutan)

% perolehan kembali = 40,099 mg – 28,2105 mg

12,0480 mg x 100%

= 98,68%

B. Propifenazon

Persamaan regresi pada panjang gelombang analisis propifenazon (λ= 264 nm):

Y = 0,00022X + 0,00006

Konsentrasi propifenazon : Y = 0,00022X + 0,00006

0,00092 = 0,00022X + 0,00006 0,00092 - 0,00006 = 0,00022X

X = 0,00092−0,00006 0,00022 X = 3,9091 μg/mL JumLah awal setelah penambahan bahan baku (CF):

= Konsentrasi Propifenazon (μg/mL) x Volume (mL) x faktor pengenceran = 3,9091 μg/mL x 100 mL x (100)

= 39091 μg = 39,091 mg

Lampiran 20. (Lanjutan)

JumLah sampel sebelum penambahan bahan baku (CA): CA =

Penimbangan Sampel

A x (B x C)

Keterangan :

A = Berat sampel yang akan ditimbang setara 28 mg analit fenilbutazon 70% B = JumLah propifenazon dalam serbuk analit yang ditimbang

C = Kadar rata-rata sampel

CA = 0,1527 g

0,1525 g x (27,9981 mg x 96,6%) = 27,0816 mg

JumLah baku yang ditambahkan (C*A) = D x E Keterangan :

D = Baku propifenazon 30% (yang ditambahkan) E = % kadar baku propifenazon dari sertifikat analisis

C*A = 12 x 99,8% = 11,976 mg Maka % perolehan kembali propifenazon:

% perolehan kembali = CF−CA

C∗_A x 100 % Keterangan:

CF = JumLah awal setelah penambahan bahan baku CA = JumLah sampel sebelum penambahan bahan baku C*A = JumLah baku yang ditambahkan

% perolehan kembali = 39,091 mg – 27,0816 mg

11,976 mg x 100%

Lampiran 21. Perhitungan Rata-Rata, Standar Deviasi dan Relatif Standar deviasi Perolehan Kembali Fenilbutazon pada Tablet X

No Kadar Perolehan Kembali [X] (%) Xi-X (Xi-X)2

1 98,68 0,30 0,0900

2 98,68 0,30 0,0900

3 98,55 0,43 0,1849

4 99,69 -0,71 0,5041

5 98,39 0,59 0,3481

6 98,61 0,37 0,1369

7 99,98 -1,00 1,0000

8 99,08 -0,10 0,0100

9 99,18 -0,20 0,0400

Xi = 98,98 Ʃ = 2,4040

SD = �∑(Xi−X�)2

n−1

=

�

2,4040

8

=

0,55

RSD = ��_�� x 100% = 0,5482

98,98 x 100% = 0,55%

Lampiran 22. Perhitungan Rata-Rata, Standar Deviasi dan Relatif Standar deviasi Perolehan Kembali Propifenazon pada Tablet X

SD =

�

∑(Xi−X�) 2

n−1

=

�

10,6402 8 = 1,15

RSD = SD

X� x 100%

= 1,1533

100,34 x 100% = 1,15%

No Kadar Perolehan

Kembali [X] (%) Xi-X (Xi–X)

2

1. _100,28 0,06 _0,0036

2. _100,28 0,06 0,003

6

3. _100,72 -0,38 0,144

4

4. _99,20 1,14 1,299

6

5. _101,88 -1,54 2,371

6

6. _101,65 -1,31 1,716

1

7. _98,09 2,25 5,062

5

8. _100,42 -0,08 0,006

4

9. _100,52 -0,18 0,032

4

Lampiran 25. Sertifikat Pengujian Propifenazon

DAFTAR PUSTAKA

Anderson, R. J., Bendell, D.J., dan Groundwater, P. W. (2004). Organic Spectroscopic Analysis. UK : The Royal Society of Chemistry. Halaman 7-8.

Depkes, RI. (1979). Farmakope Indonesia. Edisi Ketiga. Jakarta : Departemen Kesehatan Republik Indonesia. Halaman 748.

Ditjen, POM. (2010). Farmakope Indonesia. Edisi Keempat. Jakarta : Departemen Kesehatan Republik Indonesia. Halaman 945.

Ermer, J., dan Mcb. Miller, J.H. (2005). Method Validation in Pharmaceutical Analysis, A Guide to Best Practice. Weinheim: Wiley-VCH. Halaman 63, 80.

Fatimah, Is. (2003). Analisis Fenol Dalam Sampel Air Menggunakan Spektrofotometri Derivatif. Logika. 9, (10) : 21-29.

Harmita. (2004). Petunjuk Pelaksanaan Validasi Metode dan Cara Perhitungannya.

Majalah Ilmu Kefarmasian. I, (3):117-135.

Himly, M., Schmid, B.J., Pittertshatscer, K., Bohle, B., Grubmayr, K., Ferreira, F., dan Ebner, H. (2003). Ig E-mediated Immediate-type Hypersensitivity to the Pyrazolone Drug Propyphenazone. Journal Allergy Clin Immunol. 111(4) : 882-888.

IAI. (2011). Informasi Spesialite Obat Indonesia. Volume 46. Jakarta: Ikatan Apoteker Indonesia. Halaman 14.

Karpinska, J. (2012). Macro To Nano Spectroscopy. Croatia : InTech. Halaman 256.

Kee, J. L dan Hayes, E. R. (1996). Farmakologi : Pendekatan Proses Keperawatan. Jakarta : EGC. Halaman 311-312.

Kus, S., Marczenko, Z., dan Obarski, N. ( 1996). Derivative UV/VIS Spectrophotometry in Analytical Chemistry. Chem. Anal. (Warsaw). 41 : 899-927.

Moffat, A.C., Osselton, M.D., dan Widdop, B. (2011). Clarke’s Analysis of Drugs and Poisons. Fourth Edition. London: Pharmaceutical Press. Halaman 1914, 1977.

Nurhidayati L. (2007). Spektrofotometri Derivatif dan Aplikasinya dalam Bidang Farmasi. Jurnal Ilmu Kefarmasian Indonesia 5(2) : 93-99

Ojeda, C. B., dan Rojas, F. S. (2012). Recent Applications In Derivative Ultraviolet/Visible Absorption Spectrophotometry. Microchemical

Journal. 106 (2013) : 1-16.

Patel, P.N., Samanthula, G., Shrigod,V., Modh, S. C., dan Chaudhari, J. R. ( 2013). RP-HPLC Method for Determination of Several NSAIDs and Their Combination Drugs. Chromatography Research International. 10(2013) : 1-13.

Rohman, A. (2007). Kimia Farmasi Analisis. Yogyakarta: Pustaka Pelajar. Halaman 18, 224, 229-233, 240-243, 463 dan 466-468.

Satiadarma, K., Mulja, M., Tjahjono, D.H., dan Kartasasmita, R.E. (2004). Asas Pengembangan Prosedur Analisis. Surabaya: Airlangga University Press. Halaman 47, 49, 87-88, 94-97.

Sastrohamidjojo, H. (1985). Spektroskopi. Yogyakarta: Liberty Yogyakarta. Halaman 39.

Soponar, F., Staniloae, D., Moise, G., Szanszlo, B., dan David, V. (2012). Simultaneous Determination of Paracetamol, Propyphenazone and Caffeine From Pharmaceutical Preparation In The Presence of Related Substances Using A Validated HPLC-Dad Method. Revue Roumaine de Chimie. 58(4-5): 433-440.

Sudjana. (2005). Metode Statistika. Bandung: Penerbit Tarsito. Halaman 93, 145, 201, 225.

The Department of Health. (2002). British Pharmacopoeia. Volume 1. London : The Stationery Office. Halaman 1345.

Tjay, T. H., dan Rahardja, K. (2007). Obat- Obat Penting. Jakarta: PT. Elex Media Komputindo. Halaman 317.

Watson, D.G. (2009). Analisis Farmasi : Buku Ajar untuk Mahasiswa Farmasi dan Praktisi Kimia Farmasi. Edisi Kedua. Jakarta : Buku Kedokteran EGC. Halaman 19.

Willard, H. H., Merritt, L. L., Dean, J. A., dan Settle, F. A. (1988). Instrumental

Methods Analysis. Seventh Edition. California : Wadsworth, Inc.

BAB III

METODE PENELITIAN

3.1 Waktu dan Tempat Penelitian

Penelitian ini termasuk jenis penelitian deskriptif. Penelitian ini dilakukan pada bulan Mei sampai dengan Juli 2015 di Laboratorium Penelitian Fakultas Farmasi Universitas Sumatera Utara.

3.2 Alat

Alat-alat yang digunakan dalam penelitian ini adalah spektrofotometer UV-Visible, Personal Computer (PC) yang dilengkapi software UV Probe 2.42 (UV-1800 Shimadzu), neraca analitik (Mettler Toledo), kuvet, kertas saring, bola karet, spatula, alat-alat gelas dan alat-alat lainnya yang diperlukan dalam penyiapan sampel.

3.3 Bahan

Bahan yang digunakan adalah NaOH 0,1 N, Baku Fenilbutazon (Dexa Medica), Baku Propifenazon (Xinhua Pharm), Sampel Tablet X.

3.4 Pengambilan Sampel

Pengambilan sampel dilakukan secara purposif, yaitu ditentukan atas dasar pertimbangan bahwa sampel yang terambil mempunyai karakteristik yang sama dengan yang diteliti. Sampel yang digunakan yaitu tablet yang dijual dipasaran dengan merk X yang mengandung fenilbutazon 125 mg dan propifenazon 125 mg.

3.5 Prosedur Penelitian

3.5.1 Pembuatan Natrium Hidroksida 0,1 N (Depkes, RI., 1979)

Dilarutkan sebanyak 4 g NaOH dalam akuades bebas CO2 kemudian dicukupkan sampai 1000 mL.

3.5.2 Pembuatan Larutan Induk Baku dan Larutan Standar 3.5.2.1 Pembuatan Larutan Induk Baku Fenilbutazon

Ditimbang dengan seksama 50 mg baku fenilbutazon kemudian dimasukkan ke dalam labu tentukur 50 mL, dilarutkan dengan NaOH 0,1N hingga larut, dicukupkan volume dengan NaOH 0,1 N sampai garis tanda sehingga didapatkan larutan dengan konsentrasi 1000 μg/mL (LIB I). Dari larutan LIB I dipipet 5 mL dimasukkan ke dalam labu tentukur 50 mL, dicukupkan dengan NaOH 0,1 N sampai garis tanda sehingga didapatkan larutan dengan konsentrasi

100 μg/mL (LIB II).

3.5.2.2 Pembuatan Larutan Induk Baku Propifenazon

Ditimbang dengan seksama 50 mg baku propifenazon kemudian dimasukkan ke dalam labu tentukur 50 mL, dilarutkan dengan NaOH 0,1N hingga larut, dicukupkan volume dengan NaOH 0,1 N sampai garis tanda sehingga didapatkan larutan dengan konsentrasi 1000 μg/mL (LIB I). Dari larutan LIB I dipipet 5 mL dimasukkan ke dalam labu tentukur 50 mL, dicukupkan dengan NaOH 0,1 N sampai garis tanda sehingga didapatkan larutan dengan konsentrasi

100 μg/mL (LIB II).

3.5.2.3 Pembuatan Larutan Standar Fenilbutazon

Dipipet LIB II fenilbutazon (konsentrasi 100 μg/mL) sebanyak 0,3 mL; 0,45 mL; 0,6 mL; 0,75 mL; dan 0,9 mL. Masing- masing dimasukkan ke dalam

Kemudian dikocok sampai homogen sehingga diperoleh larutan dengan konsentrasi 3 μg/mL; 4,5 μg/mL; 6 μg/mL; 7,5 μg/mL; dan 9 μg/mL.

3.5.2.4 Pembuatan Larutan Standar Propifenazon

Dipipet LIB II propifenazon (konsentrasi 100 μg/mL) sebanyak 0,5 mL; 0,8 mL; 1,0 mL; 1,3 mL; dan 1,5 mL. Masing- masing dimasukkan ke dalam labu tentukur 10 mL, lalu diencerkan dengan NaOH 0,1N hingga garis tanda. Kemudian dikocok sampai homogen sehingga diperoleh larutan dengan konsentrasi 5 μg/mL; 8 µg/mL, 10 μg/mL; 13 µg/mL; dan 15 μg/mL.

3.5.3 Pembuatan Spektrum Serapan Maksimum

3.5.3.1 Pembuatan Spektrum Serapan Maksimum Fenilbutazon

Dipipet sebanyak 3,25 mL dari LIB II fenilbutazon (konsentrasi = 100

μg/mL) lalu dimasukan ke dalam labu tentukur 50 mL. Kemudian diencerkan dengan pelarut NaOH 0,1N hingga garis tanda, lalu dikocok sampai homogen untuk memperoleh larutan fenilbutazon dengan konsentrasi 6,5 μg/mL. Diukur serapannya pada panjang gelombang 200-400 nm.

3.5.3.2 Pembuatan Spektrum Serapan Maksimum Propifenazon

Diambil sebanyak 5,5 mL dari LIB II propifenazon (konsentrasi = 100

μg/mL) kemudian dimasukan ke dalam labu tentukur 50 mL untuk diencerkan dengan pelarut NaOH 0,1 N hingga garis tanda, lalu dikocok sampai homogen untuk memperoleh larutan dengan konsentrasi 11 μg/mL. Diukur serapannya pada panjang gelombang 200-400 nm.

3.5.4 Pembuatan Spektrum Serapan Derivatif

3.5.4.1 Pembuatan Spektrum Serapan Derivatif Fenilbutazon

Dibuat spektrum serapan (tanpa diderivatkan) dari larutan standar fenilbutazon dengan konsentrasi 3 μg/mL; 4,5 μg/mL; 6 μg/mL; 7,5 μg/mL; dan 9

μg/mL pada panjang gelombang 200-400 nm. Kemudian spektrum ditransformasikan menjadi spektrum serapan derivat pertama dengan Δλ = 2 nm.

3.5.4.2 Pembuatan Spektrum Serapan Derivatif Propifenazon

Dibuat spektrum serapan (tanpa diderivatkan) dari larutan standar Propifenazon dengan konsentrasi 5 μg/mL; 8 μg/mL; 10 μg/mL; 13 μg/mL; dan 15 μg/mL pada panjang gelombang 200 – 400 nm. Kemudian spektrum ditransformasikan menjadi spektrum serapan derivat pertama dengan Δλ = 2 nm.

3.5.5 Penentuan Zero Crossing

Penentuan zero crossing diperoleh dengan menumpangtindihkan spektrum serapan masing-masing derivat dalam berbagai konsentrasi larutan. Zero crossing

masing-masing zat ditunjukkan oleh panjang gelombang yang memiliki serapan nol pada berbagai konsentrasi.

3.5.6 Penentuan Panjang Gelombang Analisis

Dibuat larutan fenilbutazon dengan konsentrasi 5 μg/mL, larutan propifenazon dengan konsentrasi 5 μg/mL, dan larutan campuran fenilbutazon 5

μg/mL dan propifenazon 5 μg/mL. Kemudian ketiga larutan ini diukur serapannya pada panjang gelombang 200 – 400 nm. Selanjutnya ditransformasikan menjadi spektrum serapan derivat pertama dari masing-masing zat tunggal dan dari campuran fenilbutazon dan propifenazon. Spektrum serapan derivat pertama dari larutan zat tunggal dan campuran keduanya ditumpangtindihkan. Yang dipilih untuk menjadi panjang gelombang analisis adalah yang pada panjang gelombang tertentu, serapan tunggal salah satu senyawa nol sedangkan serapan tunggal senyawa pasangannya dan campuran keduanya hampir sama atau persis sama. Karena pada panjang gelombang tersebut dapat secara selektif mengukur serapan

3.5.7 Pembuatan dan Penentuan Linearitas Kurva Kalibrasi

3.5.7.1 Pembuatan dan Penentuan Linearitas Kurva Kalibrasi Fenilbutazon

Dibuat larutan standar fenilbutazon dengan konsentrasi 3 μg/mL; 4,5

μg/mL; 6 μg/mL; 7,5 μg/mL; dan 9 μg/mL, kemudian diukur serapan derivat pertama (Δλ = 2 nm) pada panjang gelombang analisis yang telah ditentukan. Kemudian dilakukan analisis hubungan antara konsentrasi dan nilai serapan sehingga diperoleh persamaan regresi linear y = ax + b. Dan berdasarkan nilai serapan pada panjang gelombang analisis, dilakukan pula perhitungan limit deteksi / limit of detection (LOD) dan limit kuantitasi / limit of quantitation (LOQ).Untuk menentukan batas deteksi (LOD) dan batas kuantitasi (LOQ) dapat digunakan rumus (Sudjana, 2005) :

�� =�∑(�−��)2

�−2

��� = _{�����}3��

��� = 10×_{�����}��

Keterangan : SB = Simpangan baku

LOD = Limit of Detection LOQ = Limit of Quantitation

3.5.7.2 Pembuatan dan Penentuan Linearitas Kurva Kalibrasi Propifenazon

Dibuat larutan standar propifenazon dengan konsentrasi 5 μg/mL; 8

μg/mL; 10 μg/mL; 13 μg/mL dan 15 μg/mL, kemudian diukur serapan derivat pertama (Δλ = 2 nm) pada panjang gelombang analisis yang telah ditentukan. Kemudian dilakukan analisis hubungan antara konsentrasi dan nilai serapan sehingga diperoleh persamaan regresi linear y = ax + b.Dan berdasarkan nilai serapan pada panjang gelombang analisis, dilakukan perhitungan limit deteksi /

limit of detection (LOD) dan limit kuantitasi / limit of quantitation (LOQ).

Perhitungan untuk menentukan LOD dan LOQ seperti rumus sebelumnya.

3.5.8 Penentuan Kadar Fenilbutazon dan Propifenazon dalam Tablet

Dua puluh tablet yang mengandung fenilbutazon 125 mg dan propifenazon 125 mg ditimbang lalu digerus dalam lumpang sampai halus dan homogen. Kemudian ditimbang seksama sejumLah serbuk setara dengan 50 mg fenilbutazon, kemudian dari berat sampel yang ditimbang setara 50 mg fenilbutazon ini dihitung kesetaraan propifenazon yang terkandung di dalamnya (penimbangan serbuk sebanyak 6 kali pengulangan), dimasukkan ke dalam labu tentukur 100 mL dan ditambahkan pelarut NaOH 0,1 N sampai garis tanda. Larutan kemudian dihomogenkan dengan pengaduk ultrasonik selama 10 menit. Larutan tersebut kemudian disaring, lebih kurang 10 mL filtrat ini dibuang kemudian filtrat penyaringan selanjutnya ditampung, dipipet sebanyak 0,25 mL ke dalam labu 25 mL, dan diencerkan dengan NaOH 0,1 N hingga garis tanda. Diukur serapanya pada panjang gelombang 200-400 nm, kemudian spektrumnya diderivatkan pada derivat pertama; Δλ= 2 nm; panjang gelombang 247 nm dan 264 nm.

3.5.9 Analisis Data Penetapan Kadar Secara Statistik

Data perhitungan kadar fenilbutazon dan propifenazon dianalisis secara statistik dengan menggunakan uji T. Menurut Sudjana (2005) rumus yang digunakan adalah :

SD =

(

)

1 -n

X

-Xi 2

Untuk mencari t hitung digunakan rumus: t hitung =

n SD X Xi / −

Data diterima jika -ttabel < thitung < ttabel pada interval kepercayaan 99% dengan nilai

α = 0,01. Keterangan :

SD = standard deviation / simpangan baku Xi = kadar dalam satu perlakuan

−

X _{= Kadar rata-rata dalam satu sampel (mg/100g)}

n = jumLah pengulangan

α = tingkat kepercayaan

Untuk menghitung kadar fenilbutazon dan propifenazon sebenarnya dalam sampel secara statistik dapat digunakan rumus (Sudjana, 2005) :

µ = X ± (t(α/2, dk) x SD / √n )

Keterangan : SD = standard deviation / simpangan baku

−

X _{= Kadar rata-rata dalam satu sampel}

n = jumLah perlakuan

t = harga ttabel sesuai dengan derajat kepercayaan

3.5.10 Uji Validasi 3.5.10.1 Uji Akurasi

Uji akurasi dilakukan dengan metode penambahan bahan baku yaitu dengan membuat 3 konsentrasi analit sampel dengan rentang spesifik 80%, 100%, 120%. Dimana pada masing-masing rentang spesifik digunakan 70% sampel dan 30% baku yang akan ditambahkan (Harmita, 2004).

Dua puluh tablet yang mengandung fenilbutazon 125 mg dan propifenazon 125 mg ditimbang lalu digerus dalam lumpang sampai halus dan homogen. Pada masing-masing rentang spesifik, ditimbang seksama sejumLah serbuk setara

dengan 70 % analit fenilbutazon dalam sampel yang ditimbang setara 50 mg, kemudian dari berat serbuk yang ditimbang setara 70 % fenilbutazon ini dihitung kesetaraan propifenazon yang terkandung di dalamnya, kemudian dimasukkan ke dalam labu tentukur 100 mL. Ditambahkan baku fenilbutazon dan baku propifenazon masing-masing sebanyak 30%, lalu ditambahkan pelarut NaOH 0,1 N sampai garis tanda. Larutan kemudian dihomogenkan dengan pengaduk ultrasonik selama 10 menit. Larutan tersebut kemudian disaring, lebih kurang 10 mL filtrat ini dibuang kemudian filtrat penyaringan selanjutnya ditampung, dipipet sebanyak 0,25 mL ke dalam labu 25 mL, dan diencerkan dengan NaOH 0,1 N hingga garis tanda (Faktor Pengenceran = 25/0,25 = 100 kali).

Kemudian campuran sampel dan baku diukur serapannya pada panjang gelombang 200 – 400 nm, selanjutnya spektrum serapan ditransformasikan menjadi spektrum serapan derivat pertama dengan Δλ 2 nm pada panjang gelombang analisis fenilbutazon dan propifenazon masing-masing 247 nm dan264 nm. Menurut Harmita (2004), persen perolehan kembali dapat dihitung dengan menggunakan rumus sebagai berikut:

% perolehan kembali = CF − CA

C_A∗

x

100 %

Keterangan:

CF = Konsentrasi sampel setelah penambahan bahan baku CA = Konsentrasi sampel sebelum penambahan bahan baku C*A = JumLah baku yang ditambahkan

3.5.10.2 Uji Presisi

Presisi diukur sebagai simpangan baku relatif atau koefisien variasi. Presisi merupakan ukuran yang menunjukkan derajat kesesuaian antara hasil uji

homogen. Nilai simpangan baku relatif yang memenuhi persyaratan menunjukkan adanya keseksamaan metode yang dilakukan (Harmita, 2004).

Menurut Rohman (2007), uji presisi (keseksamaan) ditentukan dengan parameter RSD dengan rumus :

RSD = ��

� x 100%

Keterangan : � = Kadar rata-rata sampel SD = Standard Deviation RSD = Relative Standar Deviation

BAB IV

HASIL DAN PEMBAHASAN

4.1 Penentuan Kurva Serapan Maksimum

Penentuan kurva serapan maksimum dilakukan pada panjang gelombang 200–400 nm. Hasil penentuan kurva serapan maksimum fenilbutazon dan propifenazon masing-masing dapat dilihat dari Gambar 4.1 dan 4.2. Kurva tumpang tindih serapan maksimum fenilbutazon dan propifenazon dapat dilihat pada Gambar 4.3.

Gambar 4.1 Kurva serapan maksimum fenilbutazon 6,5 μg/mL.

Dari Gambar 4.1 diatas dapat dilihat serapan maksimum fenilbutazon terdapat pada panjang gelombang 264 nm.

Gambar 4.2 Kurva serapan maksimum propifenazon 11 µ g/mL.

Gambar 4.3 Kurva tumpang tindih serapan maksimum fenilbutazon dan propifenazon.

4.2 Penentuan Kurva Serapan

Hasil penentuan kurva serapan dibuat dengan membuat larutan fenilbutazon dengan konsentrasi 3 µg/mL; 4,5 µg/ mL; 6 µg/ mL; 7,5 µg/ mL; dan 9 µg/ mL dan larutan propifenazon dengan konsentrasi 5 µg/ mL, 8 µg/ mL, 10 µg/ mL, 13 µg/ mL, dan 15 µg/ mL, kemudian dibuat kurva serapan pada panjang gelombang 200-400 nm. Kurva serapan dari masing-masing zat pada berbagai konsentrasi tersebut ditumpangtindihkan. Kurva tumpang tindih serapan fenilbutazon dan propifenazon masing-masing dapat dilihat pada Gambar 4.4 dan 4.5.

Gambar 4.4 Kurva tumpang tindih serapan fenilbutazon

Fenilbutazon 6,5 µg/mL Propifenazon 11 µg/mL

3 µg/mL

4,5 µg/mL

6 µg/mL

7,5 µg/mL

Gambar 4 . 5 Kurva tumpang tindihserapan propifenazon

4.3 Penentuan Kurva Serapan Derivat

4.3.1 Penentuan Kurva Serapan Derivat Pertama

Hasil kurva tumpang tindih serapan fenilbutazon dan propifenazon derivat pertama dapat dilihat pada Gambar 4.6 dan 4.7.

4.4 Penentuan Zero crossing pada Serapan Derivat Pertama

Hasil penentuan zero crossing pada derivat pertama diperoleh dengan menumpangtindihkan spektrum serapan derivat pertama pada masing-masing zat dari berbagai konsentrasi larutan. Zero crossing pada spektrum derivat pertama dari masing-masing zat ditunjukkan oleh panjang gelombang yang memiliki serapan nol pada berbagai konsentrasi. Zero crossing fenilbutazon dan propifenazon pada kurva serapan derivat pertama masing-masing dapat dilihat pada Gambar 4.6 dan 4.7.

5 µg/mL 8 µg /mL 10 µg /mL 13 µg /mL 15 µg /mL

Gambar 4.6 Zero Crossing fenilbutazon pada serapan derivat pertama

Gambar 4.7 Zero Crossing propifenazon pada serapan derivat pertama

Dari Gambar 4.6 dan Gambar 4.7 dapat dilihat bahwa hasil tumpang tindih serapan fenilbutazon terdapat pada panjang gelombang 264 nm dan propifenazon terdapat pada panjang gelombang 247 nm, 255,6 nm dan 266,4 nm.

4.5 Penentuan Panjang Gelombang Analisis

Hasil penentuan panjang gelombang analisis dilakukan dengan cara membuat larutan fenilbutazon dengan konsentrasi 5 µg/mL, propifenazon dengan

266,4 nm 264 nm

247 nm

255,6 nm

3 µg/mL

4,5 µg/mL

6 µg/mL

7,5 µg/mL

9 µg/mL

5 µg/mL 8 µg /mL 10 µg /mL 13 µg /mL 15 µg /mL

konsentrasi 5 µg/mL, dan larutan campuran fenilbutazon dan propifenazon dengan konsentrasi masing-masing 5 µg/mL. Kemudian dibuat spektrum serapan derivat pertama dari masing-masing larutan zat tunggal dan campuran zat. Spektrum serapan derivat pertama dari larutan zat tunggal dan campuran keduanya ditumpangtindihkan. Kurva serapan derivat pertama fenilbutazon konsentrasi 5 µg/mL, propifenazon konsentrasi 5 µg/mL dan campuran keduanya dapat dilihat masing-masing pada Gambar 4.8, 4.9 dan 4.10. Kurva tumpang tindih serapan derivat pertama fenilbutazon dan propifenazon konsentrasi 5 µg/mL dapat dilihat pada Gambar 4.11.

Gambar 4.8 Kurva serapan fenilbutazon konsentrasi 5 µg/mL

Gambar 4.10 Kurva serapan campuran fenilbutazon dan propifenazon konsentrasi 5 µg/mL

Gambar 4.11 Kurva tumpang tindih serapan fenilbutazon dan propifenazon pada derivat pertama

Dari Gambar 4.11 dapat dilihat hasil tumpang tindih serapan derivat pertama fenilbutazon dan propifenazon diperoleh zero crossing pada panjang gelombang 237,6 nm; 247nm; 255,4nm; dan 266,2 nm untuk fenilbutazon. Sedangkan pada panjang gelombang 221,2 nm dan 264 nm untuk propifenazon.

Untuk menentukan panjang gelombang analisis pada spektrum serapan pada derivat dilakukan dengan mengamati panjang gelombang yang menunjukkan serapan senyawa pasangannya nol dan serapan senyawa lain dan campurannya memiliki nilai serapan sama atau hampir sama. Kurva tumpang tindih serapan

266,2 nm

Fenilbutazon 5 µg/mL

Propifenazon 5 µg/mL

237,6 nm

247 nm

255,4 nm

264 nm 221,2 nm

derivat pertama fenilbutazon 5 μg/mL, propifenazon 5 μg/mL dan campuran fenilbutazon 5 μg/mL dan propifenazon 5 μg/mL dapat dilihat pada Gambar 4.12. Spektrum panjang gelombang analisis fenilbutazon dan propifenazon dapat dilihat pada Gambar 4.13 dan 4.14.

Gambar 4.12 Kurva tumpang tindih serapan derivat pertama fenilbutazon, propifenazon dan campuran fenilbutazon dan propifenazon

Gambar 4.13 Panjang gelombang analisis fenilbutazon λ = 247 nm

264 nm 247 nm

Fenilbutazon 5 µg/mL Propifenazon 5 µg/mL Campuran fenilbutazon 5 µg/mL dan Propifenazon 5 µg/mL

Fenilbutazon 5 µg/mL Propifenazon 5 µg/mL

Campuran fenilbutazon 5 µg/mL dan Propifenazon 5 µg/mL

Fenilbutazon 5 µg/mL Propifenazon 5 µg/mL

Campuran fenilbutazon 5 µg/mL dan Propifenazon 5 µg/mL

Panjang gelombang analisis ditentukan dengan cara menumpangtindihkan spektrum serapan masing-masing derivat fenilbutazon, propifenazon dan campuran fenilbutazon dan propifenazon. Selanjutnya ditentukan panjang gelombang dimana absorbansi salah satu zat berada pada nilai nol, sedangkan zat lain memiliki nilai serapan sama atau hampir sama dengan campurannya. Pada serapan derivat pertama, panjang gelombang analisis untuk fenilbutazon dan propifenazon dapat ditemukan, sehingga penetapan kadar campuran fenilbutazon dan propifenazon pada sediaan tablet bisa dilakukan pada derivat pertama.

Setelah spektrum serapan derivat pertama dari kedua zat dan campuran ditumpangtindihkan, didapatkan panjang gelombang analisis untuk fenilbutazon pada 247 nm dan propifenazon pada 264 nm. Panjang gelombang analisis dan absorbansi pada derivat pertama dapat dilihat pada Tabel 4.1.

Tab el 4.1 Panjang Gelombang Analisis dan Absorbansi pada Derivat Pertama Panjang

Gelombang (nm)

Absorbansi Fenilbutazon

5 μg/mL

Propifenazon 5 μg/mL

Campuran Fenilbutazon dan

Propifenazon

221,2 0,0000 -0,0008 -0,0058

237,6 0,0069 0,0000 0,0062

247 0,0073 0,0000 0,0072

255,4 0,0042 0,0000 0,0043

264 0,0000 0,0013 0,0013

266,2 -0,0019 0,0000 -0,0020

Berdasarkan Tabel 4.1 diperoleh panjang gelombang analisis fenilbutazon dan propifenazon yang digunakan masing-masing adalah 247 nm dan 264 nm. Penentuan panjang gelombang analisis didasarkan pada nilai absorbansi ketiga larutan pada panjang gelombang tersebut.

nol, sedangkan nilai absorbansi untuk fenilbutazon dan larutan campuran kedua zat tersebut memiliki nilai serapan hampir sama yaitu masing-masing 0,0073 dan 0,0072. Panjang gelombang analisis propifenazon yang dipakai adalah 264 nm karena pada panjang gelombang tersebut, nilai absorbansi dari fenilbutazon adalah nol, sedangkan untuk propifenazon dan larutan campuran kedua zat tersebut memiliki nilai serapan yang sama yaitu 0,0013. Dari semua titik zero crossing, pada panjang gelombang 247 nm dan 264 nm yang menunjukkan nilai absorbansi lebih besar daripada yang lainnya serta bernilai positif. Karena pada panjang gelombang tersebut dapat secara selektif mengukur serapan senyawa pasangannya dan memiliki serapan yang paling besar. Pada serapan yang paling besar, serapannya lebih stabil sehingga kesalahan analisis dapat diperkecil. Prinsip ini dibutuhkan untuk memperkecil kesalahan analisis sampel seperti yang diutarakan oleh (Nurhidayati, 2007).

4.6 Hasil Penentuan Linearitas Kurva Kalibrasi 4.6.1 Kurva Kalibrasi

Linearitas kurva kalibrasi menunjukkan hubungan yang linier antara absorbansi dengan konsentrasi. Persamaan regresi fenilbutazon, Y = 0,001414X - 0.00005 dengan korelasi r = 0,9998 dan propifenazon, Y = 0.00022X + 0,00006 dengan korelasi r = 0,9991. Nilai r > 0,995 menunjukkan adanya korelasi linier antara X dan Y (Moffat, et al., 2011). Kurva kalibrasi fenilbutazon dan propifenazon pada masing-masing panjang gelombang 247 nm dan 264 nm dapat dilihat pada Gambar 4.15 dan 4.16. Data kalibrasi, persamaan regresi dan koefisien korelasi dapat dilihat pada Lampiran 8 dan Lampiran 9.

Gambar 4.15 Kurva kalibrasi fenilbutazon pada panjang gelombang 247 nm

Gambar 4.16 Kurva kalibrasi propifenazon pada panjang gelombang 264 nm

4.6.2 Batas Deteksi dan Batas Kuantitasi

Batas deteksi dan batas kuantitasi dihitung dari persamaan regresi yang diperoleh dari kurva kalibrasi. Batas deteksi fenilbutazon dan propifenazon adalah 0,1871 μg/mL dan 1,0295 μg/mL secara berturut-turut dan batas kuantitasi fenilbutazon dan propifenazon adalah 0,6236 μg/mL dan 3,4317 μg/mL secara berturut-turut. Perhitungan batas deteksi dan batas kuantitasi tersebut dapat dilihat pada Lampiran 10 dan Lampiran 11.

konsentrasi (µg/mL)

Hal tersebut menunjukkan bahwa penentuan kadar fenilbutazon dengan

konsentrasi 5 μg/mL dan propifenazon dengan konsentrasi 5 μg/mL dapat dideteksi dan diukur menggunakan metode spektrofotometri derivatif.

Batas deteksi adalah konsentrasi analit terendah dalam sampel yang masih dapat dideteksi. Batas kuantitasi didefenisikan sebagai konsentrasi analit terendah dalam sampel yang masih dapat memenuhi kriteria cermat dan seksama (Rohman, 2007).

4.7 Hasil Penentuan Kadar Fenilbutazon dan Propifenazon dalam Sediaan Tab let

Penentuan penetapan kadar fenilbutazon dan propifenazon dalam tablet yang beredar diapotik mengandung masing-masing fenilbutazon 125 mg dan propifenazon 125 mg. Sedangkan pengukuran fenilbutazon dan propifenazon baku pada sediaan masing-masing fenilbutazon 5 μg/mL dan propifenazon 5 μg/mL.

Sampel yang telah dipreparasi kemudian diukur pada panjang gelombang 200 – 400 nm. Selanjutnya spektrum hasil serapan ditransformasikan menjadi spektrum serapan derivat pertama dengan Δλ = 2 nm. Berdasarkan spektrum tersebut dapat ditentukan absorbansi fenilbutazon dan propifenazon pada panjang gelombang analisis yang telah diperoleh sebelumnya, yaitu panjang gelombang 247 nm dan 264 nm. Contoh perhitungan penetapan kadar fenilbutazon dan propifenazon dapat dilihat pada Lampiran 14.

Data hasil perhitungan kadar fenilbutazon dan propifenazon pada sediaan dagang X setelah dilakukan analisa secara statistik dapat dilihat pada Tabel 4.2.

Tab el 4.2 Kadar fenilbutazon dan propifenazon dalam tablet

Dari Tabel 4.2 dapat dilihat bahwa kadar fenilbutazon dan propifenazon pada tablet X telah memenuhi persyaratan kadar.

Persyaratan kadar untuk sediaan tablet fenilbutazon menurut Farmakope Indonesia Edisi V yaitu mengandung fenilbutazon tidak kurang dari 93,0% dan tidak lebih dari 107,0% dari jumLah yang tertera pada etiket. Dan untuk persyaratan kadar tablet propifenazon yaitu berdasarkan syarat kadar tablet secara umum yaitu mengandung zat aktif tidak kurang dari 90,0% dan tidak lebih dari 110%.

4.8 Hasil Uji Validasi 4.8.1 Hasil Uji Akurasi

Uji akurasi dengan parameter persen perolehan kembali dilakukan dengan menggunakan tablet X. Metode penambahan baku dilakukan dengan menambahkan sejumLah tertentu larutan baku ke dalam sampel yang telah diadisi. Kemudian larutan diukur serapannya sesuai panjang gelombang analisis yang digunakan. Kurva serapan uji perolehan kembali fenilbutazon dan propifenazon dalam tablet Xdapat dilihat pada Lampiran 17. Sedangkan data dan perhitungan uji perolehan kembali fenilbutazon dan propifenazon dalam tablet dapat dilihat pada Lampiran 18 dan Lampiran 19.

Sediaan Kadar Fenilbutazon (%) Kadar Propifenazon (%)

Tab el 4.3 Hasil perolehan kembali fenilbutazon dan propifenazon dengan metode penambahan baku standar (standard addition method) pada tablet X

Rentang Spesifik % Perolehan kembali Fenilbutazon (%) Perolehan kembali Propifenazon(%) 80

98,68 100,28

98,68 100,28

98,55 100,72

100

99,69 99,20

98,39 101,88

98,61 101,65

120

99,98 98,09

99,08 100,42

99,18 100,52

Rata-rata (% recovery)

Standard Deviation (SD)

Relative Standard Deviation (RSD) (%)

98,98 0,55 0,55 100,34 1,15 1,15

Tabel 4.3. menunjukkan bahwa rata-rata persen perolehan kembali yang diperoleh yaitu 98,98% untuk fenilbutazon dan 100,34% untuk propifenazon. Dimana rata-rata persen perolehan kembali memenuhi syarat akurasi untuk validasi prosedur analitik karena rata-rata berada di antara rentang 98-102% (Harmita, 2004).

4.8.2 Hasil Uji Presisi

Uji presisi dilakukan dengan perhitungan simpangan baku relatif. Berdasarkan data perhitungan terhadap kadar fenilbutazon dan propifenazon, diperoleh simpangan baku relatif untuk fenilbutazon yaitu 0,55% dan propifenazon 1,15%. Hasil simpangan baku relatif untuk fenilbutazon dan propifenazon memenuhi persyaratan yaitu ≤ 2% (Harmita, 2004). Perhitungan dan data simpangan baku relatif untuk fenilbutazon dan propifenazon dapat dilihat pada Lampiran 18 dan Lampiran 19.

BAB V

KESIMPULAN DAN SARAN

5.1 Kesimpulan

a. Campuran fenilbutazon dan propifenazon dalam sediaan tablet dapat ditetapkan kadarnya dengan menggunakan spektrofotometri derivatif metode zero crossing dan memenuhi syarat validasi metode.

b. Kadar campuran fenilbutazon dan propifenazon dalam sediaan tablet yang ditetapkan kadarnya menggunakan spektrofotometri derivatif memenuhi persyaratan kadar sediaan.

5.2 Saran

Disarankan agar dilakukan penelitian lebih lanjut pada penetapan kadar campuran fenilbutazon dan propifenazon pada sediaan tablet dengan menggunakan pelarut yang berbeda pada metode spektrofotometri derivatif dengan zerro crossing

BAB II

TINJAUAN PUSTAKA 2.1 Uraian Bahan

2.1.1 Fenilbutazon

2.1.1.1 Sifat Fisika dan Kimia

Rumus struktur

Gambar 2.1. Fenilbutazon (Ditjen POM., 2010). Rumus molekul : C19H20N2O2

Berat Molekul : 308,38

Nama IUPAC : 4-Butil-1,2-difenil-3,5-pirazolidinadion

Pemerian : Serbuk hablur, putih atau agak putih; tidak berbau. Kelarutan : Sangat sukar larut dalam air; mudah larut dalam aseton

dan dalam eter; larut dalam etanol. Larut dala larutan alkali.

Titik lebur : 1040-107 0

(Ditjen POM, 2010; The Department of Health, 2002).

2.1.1.2 Farmakologi

Derivat pyrazolidin ini (1949) mirip rumuus intinya dengan fenazon. Khasiat antiradangnya lebih kuat daripada daya kerja analgetisnya. Oleh karena obat ini khusus digunakan untuk jenis artritis tertentu (Tjay dan Rahardja, 2007).

Kadangkala fenilbutazon dimasukkan secara ilegal (tanpa dicantumkan pada etiket) pada produk dari pabrik-pabrik kecil asing atau seringkali dalam tonika (dengan Ginseng) untuk keadaan lesu dan letih, nyeri otot dan perasaan lemah. Adalkalanya obat ini dikombinasi dengan kortikosteroida yang dalam obatt-obat demikian sangat berbahaya berhubung efek merusaknya terhadap se-lsel darah dan efek memperlemahnya sistem imun (Tjay dan Rahardja, 2007).

Efek sampingnya serius antara lain terhadap darah dan lambung, sehingga di banyak negara Barat sudah ditarik dari peredaran sejak akhir tahun 1980-an. Kadangkala fenilbutazon masih digunakan untuk nyeri otot dalam bentuk krem 5% (Tjay dan Rahardja, 2007).

Fenilbutazon digunakan untuk mengobati rematoid artritis dan sejenisnya sejak tahun 1949, kemudian secara berurutan didapat turunan fenibutazon, yaitu oksifenbutazon, sulfinpirazon, dan ketofenilbutazon. Fenilbutazon juga mempunyai efek antipiretik dan analgesik. Efek antiinflamasinya sama dengan salisilat (Kee dan Hayes, 1996).

Bila diberikan per oral, absorpsinya akan cepat dan sempurna. Konsentrasi tertinggi dicapai dalam waktu 2 jam. Dengan dosis terapi 98% fenilbutazon dalam plasma terikat pada protein plasma, sedangkan bila konsentrasi lebih tinggi pengikatan dengan plasma protein mungkin hannya 90%. Masa paruh fenilbutazon lama, yaitu 50-100 jam (Kee dan Hayes, 1996).

2.1.2 Propifenazon

Rumus Struktur

Gambar 2.2. Propifenazon (Moffat, et al., 2011) Rumus Molekul : C14H18N2O

Berat Molekul : 230,3

Nama IUPAC : 1,5-dimetil-2-fenil-4-propan-2-nil-pirazol-3-on Titik lebur : 103-195 0C

Pemerian : Berupa kristal putih atau serbuk kristal. Tidak berbau dan terasa agak pahit

Kelarutan : Mudah larut dalam etanol dan dalam kloroform. Larut dalam eter dan sedikit larut dalam air

(Moffat, et al., 2011)

Propifenazon adalah zat analgetik yang telah dikenal cukup lama. Propifenazon adalah contoh analgetika ringan yang digunakan sesuai permintaan. Propifenazon biasanya dikombinasikan dengan NSAID lainnya pada tablet, yang dapat diperoleh tanpa resep di berbagai negara. Propifenazon disebutkan sebagai pencetus reaksi alergi/pseudoalergi di dalam berbagai textbook dan dalam studi epidemiologi, dan dalam berbagai laporan propifenazon dapat menginduksi berbagai tipe reaksi alergi (Himly, et al., 2003).

2.2 Spektrofotometri Ultraviolet-Visibel

2.2.1 Pengertian Spektrofotometri Ultraviolet-Visibel

Spekrofotometri UV-visibel merupakan metode spektrofotometri yang didasarkan pada adanya serapan sinar pada daerah ultraviolet (UV) dan sinar tampak (Visibel) dari suatu senyawa. Senyawa dapat dianalisis dengan metode ini jika memiliki kemampuan menyerap pada daerah UV atau daerah tampak. Senyawa yang dapat menyerap intensitas pada daerah UV disebut dengan kromofor, sedangkan untuk melakukan analisis senyawa dalam daerah sinar tampak, senyawa harus memiliki warna (Fatimah, 2003).

2.2.2 Proses Penyerapan Radiasi pada Spektrofotometer Ultraviolet-Visibel Radiasi ultravioet dan sinar tampak diabsorpsi oleh molekul organik

aromatik, molekul yang mengandung elektron π terkonyugasi dan/ atom yang

mengandung elektron-n, menyebabkan transisi elektron di orbit terluarnya dari tingkat enersi elektron dasar ke tingkat enersi elektron tereksitasi lebih tinggi (Satiadarma, dkk., 2004).

Jika suatu molekul sederhana dikenakan radiasi elektromagnetik maka molekul tersebut akan menyerap radiasi elektromagnetik yang energinya sesuai. Interaksi antara molekul dengan radiasi elektromagnetik ini akan meningkatkan energi potensial elektron pada tingkat keadaan tereksitasi (Rohman, 2007).

Sinar ultraviolet dan sinar tampak (visibel) memberikan energi yang cukup untuk terjadinya transisi elektron (Rohman, 2007). Elektron yang energinya tertinggi dalam molekul, berada dalam tingkat energi elektron dasar, terdapat

dalam orbital δ, π, atau n, masing-masing mempunyai keadaan tereksitasi sesuai dengan energi elektron terendah. Transisi elektron yang terkait dengan absorbsi

(Satiadarma, dkk., 2004).

Penyerapan radiasi ultraviolet dan sinar tampak dibatasi oleh sejumLah gugus fungsional (yang disebut dengan kromofor) yang mengandung elektron valensi dengan tingkat energi eksitasi yang relatif rendah. Elektron yang terlibat pada penyerapan radiasi ultraviolet dan visibel ini ada tiga, yaitu elektron sigma, elektron phi, dan elektron bukan ikatan (non bonding electron) (Rohman, 2007).

Menurut Rohman (2007), transisi-transisi elektronik yang terjadi di antara tingkat-tingkat energi di dalam suatu molekul ada empat yaitu transisi δ→δ*, transisi n→δ*, transisi n→π*, dan transisi π→π*. Berikut akan diuraikan keempat jenis transisi :

1. Transisi δ→δ*

Energi yang diperlukan untuk transisi ini besarnya sesuai dengan energi sinar yang frekuensinya terletak di antara ultraviolet vakum (kurang dari 180 nm). Jenis transisi ini terjadi pada daerah ultraviolet vakum sehingga kurang begitu bermanfaat untuk analisis dengan cara spektrofotometri ultraviolet-visibel.

2. Transisi n→δ*

Jenis transisi ini terjadi pada senyawa organik jenuh yang mengandung atom-atom yang memiliki elektron bukan ikatan (elektron n). Energi yang

diperlukan untuk transisi jenis ini lebih kecil dibandingkan transisi δ→δ*

sehingga sinar yang diserap pun mempunyai panjang gelombang lebih panjang, yakni sekitar 150-250 nm. Kebanyakan transisi ini terjadi pada panjang gelombang kurang dari 200 nm.

3. Transisi n→π* dan transisi π→π*

gugus tersebut memberikan orbital phi yang diperlukan. Jenis transisi ini merupakan transisi yang paling cocok untuk analisis sebab dengan panjang gelombang 200-700 nm, dan panjang gelombang ini secara teknis dapat diaplikasikan pada spektrofotometer ultraviolet-visibel. Perbedaan antara transisi n→π* dan transisi π→π* dapat dilihat pada Tabel 2.1.

Tabel 2.1. Perbedaan antara transisi n→π* dan transisi π→π*

Transisi n→π* Transisi π→π*

Absorptivitas molar (ε) antara 10-100 Lcm-1mol-1

Absorptivitas molar (ε) antara

1000-10000 Lcm-1mol-1 Biasanya pelarut yang polar

menyebabkan pergeseran biru atau

hypsocromic shift (pergeseran pita serapan ke arah panjang gelombang yang lebih pendek)

Biasanya pelarut yang polar menyebabkan pergeseran merah atau bathocromic shift (pergeseran pita serapan ke arah panjang gelombang yang lebih panjang)

2.2.3 Kegunaan Spektrofotometri Ultraviolet-Visibel

Data spektrum ultraviolet-visibel secara tersendiri tidak dapat digunakan untuk identifikasi kualitatif obat karena rentang daerah radiasi yang relatif sempit hanya dapat menghasilkan sedikit sekali puncak absorbsi maksimum dan minimum. Akan tetapi jika digabung dengan cara lain seperti spektrofotometri inframerah, resonansi magnet inti, dan spektrometri massa, maka dapat digunakan untuk maksud identifikasi kualitatif suatu senyawa tersebut. Penggunaannya terbatas pada konfirmasi identitas dengan menggunakan parameter panjang gelombang maksimum, nilai absorptivitas, nilai absorptivitas molar, dan nilai koefisien ekstingsi yang khas untuk senyawa yang dilarutkan dalam suatu pelarut

tertentu (Satiadarma, dkk., 2004; Rohman, 2007).

Hukum Lambert-Beer menjadi dasar aspek kuantitatif spektrofotometri ultraviolet-visibel. Menurut Hukum Lambert-Beer, serapan berbanding lurus terhadap konsentrasi dan ketebalan sel, yang dapat ditulis dengan persamaan :

A = a.b.c (g/liter) atau A = ε. b. c (mol/liter) atau A = A1

1.b.c (g/100 mL) Dimana: A = serapan

a = absorptivitas b = ketebalan sel c = konsentrasi

ε = absorptivitas molar A11 = absorptivitas spesifik

2.2.4 Komponen Spektrofotometer Ultraviolet-Visibel

Instrumen yang digunakan untuk mempelajari serapan atau emisi elektromagnetik sebagai fungsi dari panjang gelombang disebut spektrometer atau spektrofotometer (Sastrohamidjojo, 1985).

Terdapat beberapa tipe spektrofotometer UV-Vis, dengan komponen yang sama yang terdapat pada laboratorium yang merupakan spektrofotometer double beam, yang terdiri dari sumber cahaya, dua sel dimana cahaya akan melaluinya, dan detektor untuk mengukur jumLah cahaya yang melewati sel. Spektrofotometer saat ini biasanya telah dikontrol oleh komputer dan memberikan fleksibilitas yang lebih besar bagi penggunanya, misalnya dalam menunjukkan spektrum dari suatu campuran atau dalam menampilkan grafik kalibrasi untuk menentukan konsentrasi senyawa yang tidak diketahui (Anderson, et al., 2004).

Menurut Satiadarma, dkk., (2004) dan Rohman (2007), komponen spektrofotometer Ultraviolet-Visibel adalah sebagai berikut:

1. Sumber-sumber lampu: lampu deuterium digunakan untuk daerah ultraviolet pada panjang gelombang dari 190-350 nm, sementara lampu halogen kuarsa atau lampu tungsten digunakan untuk daerah visibel pada panjang gelombang antara 350- 900 nm.

2. Monokromotor: digunakan untuk memperoleh sumber sinar yang monokromatis.

3. Optik-optik: dapat didesain untuk memecah sumber sinar melewati 2 kompartemen.

4. Detektor: digunakan sebagai alat yang menerima sinyal dalam bentuk radiasi elektromagnetik, mengubah, dan meneruskannya dalam bentuk sinyal listrik ke rangkaian sistem penguat elektronika. Respon tiap jenis detektor terhadap bagian dari spektrum radiasi tidak sama, sehingga setiap spektrofotometer menggunakan detektor yang paling cocok untuk daerah pengukurannya.

2.3 Spektrofotometri Derivatif

2.3.1 Pengertian Spektrofotometri Derivatif

Metode spektrofotometri derivatif atau metode kurva turunan adalah salah satu metode spektrofotometri yang dapat digunaan untuk analisis campuran beberapa zat secara langsung tanpa harus melakukan pemisahan terlebih dahulu waaupun dengan panjang gelombang yang berdekatan (Nurhidayati, 2007).

Aplikasi spektrofotometri derivatif menyediakan teknik yang baik untuk menganalisis campuran multikomponen secara kuantitatif. Metode spektrofotometri derivatif telah digunakan secara luas untuk memperbesar sinyal dan menjelaskan puncak-puncak yang saling tumpang tindih disebabkan oleh kemampuannya dalam mendiferensiasi puncak-puncak yang berdekatan, dan

mengidentifikasi puncak-puncak lemah yang dihalangi oleh puncak yang lebih tajam (Ojeda dan Rojas, 2012).

Spektrofotometri derivatif adalah teknik yang didasarkan pada derivatisasi spektrum dasar yakni spektrum orde nol. Hasil derivatisasi fungsi dijelaskan lari dari absorbansi kurva disebut spektrum derivatif dan dapat dinyatakan sebagai : n

D_xλ = dnA / dλn = f(λ) atau nDxv = dnA / dvn = f(v)

Dimana: n : orde derivatif, nDxλ atau nDxv menunjukkan nilai dari orde derivatif

ke-n suatu ake-nalit (x) pada pake-njake-ng gelombake-ng ake-nalisis (λ) atau pada bilake-ngake-n pake-njake-ng

gelombang (v), A : absorbansi (Karpinska, 2012).

Spektrum serapan normal sampai derivat ke-n dapat dilihat pada Gambar 2.3.

Gambar 2.3. Spektrum serapan normal sampai derivat ke-n (Karpinska, 2012) Dalam spektrum derivatif, kemampuan untuk mendeteksi dan mengukur gambaran spektrum minor telah jauh ditingkatkan. Peningkatan karakteristik

mengikuti perubahan halus pada spektrum. Lebih daripada itu, teknik ini dapat digunakan dalam analisis kuantitatif untuk mengukur konsentrasi analit dimana puncaknya dihalangi oleh puncak yang lebih besar dan saling tumpang tindih (Willard, et al., 1988).

2.3.2 Teknik Pengukuran Nilai Derivatif

Spektrum derivatif beberapa orde merupakan hasil diferensiasi spektrum orde nol (dasar) dari campuran beberapa komponen. Diferensiasi spektrum dilakukan dengan berbagai metode, biasanya dengan metode analog atau metode numerik. Hasilnya, terlepas dari modus diferensiasi, dapat disajikan secara grafis di atas kertas atau terdaftar dalam memori komputer. Penentuan nilai-nilai derivatif dilakukan dengan cara salah satu dari tiga metode berikut.

Pengukuran Grafis yang terdapat dalam rekaman pada kertas (menggunakan plot XY) yaitu spektrum derivatif dan zero line. Panjang gelombang dimana nilai derivatif akan diukur kemudian ditandai, dan pada titik ini sebuah garis ditarik tegak lurus terhadap zero line. Panjang A-B adalah nilai derivatif yang dinyatakan dalam satuan panjang (misalnya mm). Kelemahan teknik ini adalah ketidaktelitian pengukuran, terutama bila dilakukan pada sisi curam dari kurva (garis tegak lurus melintasi spektrum derivatif di bawah sudut akut). Kerugian ini dapat dihilangkan dengan menentukan nilai derivatif secara numerik (Kus, et al., 1996).

Pengukuran numerik dari nilai-nilai derivatif dilakukan dengan membaca nilai derivatif pada panjang gelombang tertentu (bilangan gelombang) dari set poin (nilai panjang gelombang-derivatif). Suatu set diperoleh sebagai hasil dari diferensiasi spektrum menggunakan algoritma numerik yang tepat untuk memperoleh derivatif. Ketika melihat di spektrum derivatif, misalnya pada

monitor komputer yang terhubung ke spektrofotometer, salah satunya dapat membaca nilai derivatif pada panjang gelombang yang berubah secara bertahap (Kus, et al., 1996).

Gambar 2.4 Pengukuran sinyal derivatif dengan metode Grafik (a) dan metode numerik (b) (Kus, et al., 1996).

Teknik zero-crossing terdiri dari pengukuran nilai derivatif pada panjang gelombang (bilangan gelombang), di mana turunan dari komponen campuran menerima nilai nol - melintasi garis nol (Gambar 2.5 a). Kurva A melintasi garis nol pada titik Z, dan kurva B pada titik P- derivatif menerima nilai nol pada titik-titik ini. Dengan cara ini tidak ada efek dari satu komponen pada komponen yang lain. Teknik zero crossing mengizinkan untuk menghilangkan pengaruh komponen yang mengganggu komponen yang ditentukan. Kelemahan dari teknik pengukuran ini adalah presisi pengukuran yang tidak terlalu besar. Titik zero crossing suatu derivat harus ditentukan oleh setidaknya dua konsentrasi (Kus, et al., 1996).

Teknik peak-to-peak terdiri dari pengukuran nilai derivatif pada panjang gelombang di mana rasio dari nilai-nilai derivatif HA dari komponen A dengan

2.5 b). Penentuan dilakukan dengan mengukur amplitudo (dari kurava maksimum ke kurva minimum) (Kus, et al., 1996).

Teknik baseline-to-peak terdiri dari pengukuran nilai derivatif pada panjang gelombang di mana rasio dari nilai derivat HA dari komponen A dengan nilai derivat HB dari komponen campuran B mencapai nilai paling besar ( Gambar 2.5 c). Pengukuran dilakukan dari titik maksimum ke garis nol atau dari titik minimum ke garis nol. Teknik ini adalah versi dari teknik peak-to-peak, dibandingkan dengan yang kurang sensitif (rasio nilai derivatif lebih kecil di sini) (Kus, et al., 1996).

Gambar 2.5 Teknik pengukuran zerro crossing (a), peak-to-peak (b), dan baseline-to-peak (c)

2.3.3 Kegunaan Spektrofotometri Derivatif

Metode spektrofotometri derivatif dapat digunakan untuk analisis kuantitatif zat dalam campuran yang spektrumnya mungkin tersembunyi dalam suatu bentuk spektrum besar yang saling tumpang tindih dengan mengabaikan proses pemisahan zat yang bertingkat-tingkat. Dalam bidang farmasi, karena terkait terapi, penetapan kadar obat adalah kontrol kualitas pada industri farmasi.

Metode spektrofotometri derivatif adalah teknik analisis dengan kemampuan memisahkan campuran obat yang memiliki spektra tumpang tindih (Nurhidayati, 2007).

2.4 Validasi metode

Validasi metode menurut United States Pharmacopeia (USP) diakukan untuk menjamin bahwa metode analisis akurat, spesifik, reprodusibel, dan tahan pada kisaran analit yang akan dianalisis. Suatu metode analisis harus divalidasi untuk melakukan verifikasi bahwa parameter-parameter kinerjanya cukup mampu untuk mengatasi problem analisis (Rohman, 2007).

2.4.1 Akurasi

Akurasi adalah kedekatan nilai hasil uji yang diperoleh melalui metode analisis dengan nilai yang sebenarnya. Akurasi dinyatakan dengan persen perolehan kembali (% recovery). Akurasi dapat ditentukan dengan dua metode, yaitu spiked-placebo recovery (metode simulasi) dan standard addition method

(metode penambahan baku). Pada metode spiked-placebo recovery, analit murni ditambahkan (spiked) ke dalam campuran bahan pembawa sediaan farmasi, lalu campuran tersebut dianalisis dan jumLah analit yang dianalisis dibandingkan dengan jumLah analit yang telah diketahui konsentrasinya dapat ditambahkan langsung ke dalam sediaan farmasi. Metode ini dinamakan metode penambahan baku(Ermer dan Mcb.Miller, 2005; Harmita, 2004).

Menurut Harmita (2004), dalam metode penambahan baku, sejumLah sampel yang dianalisis ditambah analit dengan konsentrasi biasanya 80% sampai 120% dari kadar analit yang diperkirakan, dicampur, dan dianalisis kembali.

Tabel Halaman 4.1 Panjang gelombang analisis dan absorbansi pada derivat

pertama ... 37 4.2 Kadar Fenilbutazon dan Propifenazon dalam tablet ... 41

4.3 Hasil perolehan kembali Fenilbutazon dan Propifenazon dengan metode penambahan baku standar pada tablet

DAFTAR GAMBAR

Gambar Halaman

4.1 Kurva serapan maksimum fenilbutazon 6,5 μg/mL ... 30

4.2 Kurva Serapan Maksimum Propifenazon 11 μg/mL ... 30

4.3 Kurva Tumpang Tindih Serapan maksimum Fenilbutazon dan Propifenazon... 31

4.4 Kurva Tumpang Tindih Serapan Fenilbutazon dalam berbagai Konsentrasi ... 31

4.5 Kurva Tumpang Tindih Serapan Propifenazon dalam berbagai Konsentrasi ... 32

4.6 Zero Crossing fenilbutazon pada serapan derivat pertama ... 33

4.7 Zero Crossing propifenazon pada serapan derivat pertama ... 33

4.8 Kurva Serapan Fenilbutazon konsentrasi 5 µg/mL ... 34

4.9 Kurva Serapan Propifenazon konsentrasi 5 µg/mL ... 34

4.10 Kurva Serapan Campuran Fenilbutazon dan Propifenazon konsentrasi 5 µg/mL ... 35

4.11 Kurva Tumpang Tindih Serapan Fenilbutazon dan Propifenazon pada Derivat Pertama ... 35

4.12 Kurva Tumpang Tindih Serapan Derivat Pertama Fenilbutazon, Propifenazon dan Campuran ... 36

4.13 Panjang Gelombang Analisis Fenilbutazon λ = 247 nm ... 36

4.14 Panjang Gelombang Anaisis Propifenazon λ = 264 nm ... 36

4.15 Kurva kalibrasi Fenilbutazon λ = 247 nm ... 39

Gambar Halaman

1 Tablet X ... 46

2 Tablet X yang telah digerus homogen ... 46

3 Spektrofotometer UV/VIS (Shimadzu 1800)... 47

4 Neraca Analitik (Mettler Toledo) ... 47

5 Sonikator (Branson 1510) ... 47

6 Kurva serapan fenilbutazon konsentrasi 3 μg/mL ... 54

7 Kurva serapan fenilbutazon konsentrasi 4,5 μg/mL ... 54

8 Kurva serapan fenilbutazon konsentrasi 6 μg/mL ... 54

9 Kurva serapan fenilbutazon konsentrasi 7,5 μg/mL ... 55

10 Kurva serapan fenilbutazon konsentrasi 9 μg/mL ... 55

11 Kurva serapan propifenazon konsentrasi 5 μg/mL ... 55

12 Kurva serapan propifenazon konsentrasi 8 μg/mL ... 56

13 Kurva serapan propifenazon konsentrasi 10 μg/mL ... 56

14 Kurva serapan propifenazon konsentrasi 13 μg/mL ... 56

15 Kurva serapan propifenazon konsentrasi 15 μg/mL ... 57

16 Kurva serapan derivat pertama fenilbutazon konsentrasi 3 μg/mL ... 57

17 Kurva serapan derivat pertama fenilbutazon konsentrasi 4,5 μg/mL ... 58

18 Kurva serapan derivat pertama fenilbutazon konsentrasi 6 μg/mL ... 58

19 Kurva serapan derivat pertama fenilbutazon konsentrasi 7,5 μg/mL ... 58 20 Kurva serapan derivat pertama fenilbutazon konsentrasi 9

21 Kurva serapan derivat pertama propifenazon konsentrasi 5

μg/mL ... 59

22 Kurva serapan derivat pertama propifenazon konsentrasi 8 μg/mL ... 59

23 Kurva serapan derivat pertama propifenazon konsentrasi 10 μg/mL ... 60

24 Kurva serapan derivat pertama propifenazon konsentrasi 13 μg/mL ... 60

25 Kurva serapan derivat pertama propifenazon konsentrasi 15 μg/mL ... 60

26 Kurva serapan sampel X-1 ... 67

27 Kurva serapan sampel X-2 ... 67

28 Kurva serapan sampel X-3 ... 68

29 Kurva serapan sampel X-4 ... 68

30 Kurva serapan sampel X-5 ... 69

31 Kurva serapan sampel X-6 ... 69

32 Kurva serapan perolehan kembali 80%-1 pada tablet X ... 79

33 Kurva serapan perolehan kembali 80%-2 pada tablet X ... 79

34 Kurva serapan perolehan kembali 80%-3 pada tablet X ... 80

35 Kurva serapan perolehan kembali 100%-1 pada tablet X ... 80

36 Kurva serapan perolehan kembali 100%-2 pada tablet X ... 81

37 Kurva serapan perolehan kembali 100%-3 pada tablet X ... 81

38 Kurva serapan perolehan kembali 120%-1 pada tablet X ... 82

39 Kurva serapan perolehan kembali 120%-2 pada tablet X ... 82

Lampiran Halaman

1 Gambar sampel X ... 46

2 Komposisi Tablet X ... 46

3 Gambar Alat Spektrofotometer Ultraviolet ... 47

4 Perhitungan Pembuatan NaOH 0,1N ... 48

5 Bagan Alir Prosedur Penelitian ... 49

6 Kurva Serapan Baku Fenilbutazon dan Propifenazon ... 54

7 Kurva Serapan Derivat Pertama Fenilbutazon dan Propifenazon ... 57

8 Data Kalibrasi Baku Fenilbutazon, Persamaan Regresi dan Koefisien Korelasi ... 61

9 Data Kalibrasi Baku Propifenazon, Persamaan Regresi dan Koefisien Korelasi ... 63

10 Perhitungan Batas Deteksi dan Batas Kuantitasi Fenilbutazon ... 65

11 Perhitungan Batas Deteksi dan Batas Kuantitasi Propifenazon ... 66

12 Kurva Serapan Derivat Pertama Sampel ... 67

13 Hasil Analisis Kadar Fenilbutazon dan Propifenazon dalam Tablet ... 70

14 Contoh Perhitungan Kadar Fenilbutazon dan Propifenazon Dalam Sediaan Tablet ... 71

15 Perhitungan Statistik Fenilbutazon pada Tablet X... 74

16 Perhitungan Statistik Propifenazon pada Tablet X ... 76

17 Kurva Serapan X pada Uji Perolehan Kembali ... 79 18 Data Hasil Persen Perolehan Kembali Fenilbutazon pada

19 Data Hasil Persen Perolehan Kembali Propifenazon pada Tablet X dengan Metode Penambahan Baku

(Standard Addition Methode) ... 85

20 Contoh Perhitungan Persentase Perolehan Kembali (% recovery) ... 86

21 Perhitungan Rata-rata, Standar Deviasi, dan Relatif Standar Deviasi Perolehan Kembali Fenilbutazon pada Tablet X ... 92

22 Perhitungan Rata-rata, Standar Deviasi, dan Relatif Standar Deviasi Perolehan Kembali Propifenazon pada Tablet X ... 93

23 Daftar Nilai Distribusi t ... 94

24 Sertifikat Pengujian Fenilbutazon ... 95