Analisis asam lemak AOAC 1999

d. Analisis kadar protein AOAC 1995

Prinsip dari analisis protein adalah menentukan kandungan protein kasar crude protein pada suatu bahan. Tahap-tahap yang dilakukan dalam analisis protein yaitu destruksi, destilasi dan titrasi. 1 Tahap destruksi Sampel ditimbang seberat 0,5 gram, kemudian dimasukkan ke dalam tabung Kjeltec. Satu butir Kjeltab dimasukkan ke dalam tabung tersebut dan ditambahkan 10 ml H 2 SO 4 . Tabung yang berisi larutan tersebut dimasukkan ke dalam alat pemanas dengan suhu 410 o C ditambahkan 10 ml air. Proses destruksi dilakukan sampai larutan menjadi bening. 2 Tahap destilasi Isi labu dituangkan ke dalam labu destilasi, lalu ditambahkan dengan aquades 50 ml. Air bilasan juga dimasukkan ke dalam alat destilasi dan ditambahkan larutan NaOH 40 sebanyak 20 ml. Cairan dalam ujung tabung kondensor ditampung dalam Erlenmeyer 125 ml berisi larutan H 3 BO 3 dan 3 tetes indikator cairan methyl red dan brom cresol green yang ada di bawah kondensor. Destilasi dilakukan sampai diperolah 200 ml destilat yang bercampur dengan H 3 BO 3 dan indikator dalam erlenmeyer. 3 Tahap titrasi Titrasi dilakukan dengan menggunakan HCl 0,09 N sampai warna larutan pada erlenmeyer berubah warna menjadi merah muda. Volume titran dibaca dan dicatat. Perhitungan kadar nitrogen dalam bahan: Nitrogen = � − � 0,1 � � 14 x 100 Kadar protein = Nitrogen x faktor konversi 6,25

3.3.5 Analisis asam lemak AOAC 1999

Metode analisis yang digunakan memiliki prinsip mengubah asam lemak menjadi turunannya, yaitu metil ester sehingga dapat terdeteksi oleh alat kromatografi. Diagram alir analisis asam lemak disajikan pada Gambar 6. Gas chromatography GC memiliki prinsip kerja pemisahan antara gas dan lapisan tipis cairan berdasarkan perbedaan jenis bahan Fardiaz 1989. Hasil analisis akan terekam dalam suatu lembaran yang terhubung dengan rekorder dan ditunjukkan Gambar 6 Diagram alir analisis asam lemak Contoh lemak Preparasi contoh hidrolisis dan esterifikasi Penimbangan 20-30 mg contoh lemak Pemasukan dalam tabung reaksi ulir Penambahan 1 ml NaOH 0,5 N dalam metanol Pemanasan menggunakan waterbath pada suhu 80 ˚C selama β0 menit Kromatogram asam lemak Penambahan 2 ml BF 3 20 dan 5 mgml standar internal Pemanasan menggunakan waterbath pada suhu 80 ˚C selama β0 menit Penambahan 2 ml NaCl jenuh Penambahan 1 ml Hexan Pengambilan 1 μl dan penginjekkan ke Gas Chromatograpy melalui beberapa puncak pada waktu retensi tertentu sesuai dengan karakter masing-masing asam lemak. Sebelum melakukan injeksi metil ester, terlebih dahulu lemak diekstraksi dari bahan lalu dilakukan metilasi sehingga terbentuk metil ester dari masing-masing asam lemak yang didapat. a Tahap ekstraksi Lemak diperoleh dengan metode Soxhlet. Pada tahap ini diperoleh lemak dalam bentuk minyak. Kemudian, dari sampel tersebut ditimbang lemak sebanyak 0,02-0,03 g untuk dilanjutkan pada tahap metilasi. b Pembentukan metil ester metilasi Tahap metilasi dimaksudkan untuk membentuk senyawa turunan dari asam lemak menjadi metil esternya. Asam-asam lemak diubah menjadi ester-ester metil atau alkil yang lainnya sebelum disuntikkan ke dalam kromatografi gas. Metilasi dilakukan dengan merefluks lemak di atas penangas air dengan pereaksi berturut-turut NaOH-metanol 0,5 N, BF 3 dan n-heksana. Sebanyak 0,02 g minyak dari sampel dimasukkan ke dalam tabung reaksi dan ditambahkan 5 ml NaOH-metanol 0,5 N lalu dipanaskan dalam penangas air selama 20 menit pada suhu 80 o C. Larutan kemudian didinginkan. Sebanyak 5 ml BF 3 ditambahkan ke dalam tabung lalu tabung dipanaskan kembali pada waterbath dengan suhu 80 o C selama 20 menit dan didinginkan. Kemudian ditambahkan 2 ml NaCl jenuh dan dikocok. Selanjutnya, ditambahkan 5 ml heksana, kemudian dikocok dengan baik. Larutan heksana di bagian atas larutan dipindahkan dengan bantuan pipet tetes ke dalam tabung reaksi. Sebanyak 1 μl sampel lemak diinjeksikan ke dalam gas chromatography . Asam lemak yang ada dalam metil ester akan diidentifikasi oleh flame ionization detector FID atau detektor ionisasi nyala dan respon yang ada akan tercatat melalui kromatogram peak. c Identifikasi asam lemak Identifikasi asam lemak dilakukan dengan menginjeksikan metil ester pada alat kromatografi gas dengan kondisi sebagai berikut : jenis alat kromatografi gas yang digunakan adalah Shimadzu GC 2010 Plus Gambar 7, gas yang digunakan sebagai fase bergerak adalah gas nitrogen dengan laju alir 30 mLmenit dan sebagai gas pembakar adalah hidrogen dan oksigen, kolom yang digunakan adalah capilary column merk Quadrex dengan diameter dalam 0,25 mm. Analisis kuantitatif asam lemak dihitung dengan rumus : Asam lemak = 100 − x 100 a b Gambar 7 Kromatografi gas a dan rekorder b Kondisi alat GC pada saat analisis: a Kolom : Cyanopropil methyl sil capilary column b Dimensi kolom : P = 60 m, Ø dalam = 0,25 mm, 0,25 µm film Tickness c Laju alir N 2 : 30 mLmenit d Laju alir H 2 : 40 mLmenit e Laju alir udara : 400 mLmenit f Suhu injektor : 220 °C g Suhu detektor : 240 °C h Suhu terprogram : 125-225 °C i Inject volume : 1 µL

3.3.6 Pengamatan mikroskopik jaringan daging ikan patin