3.7.8. Prosedur Pemeriksaan dan Pengamatan
Setelah 42 hari perlakuan, masing-masing hewan coba dikorbankan dengan cara dislokasi leher dan selanjutnya dilakukan pembedahan dengan cara mencit
diletakkan pada bak bedah dengan keempat anggota gerak terfiksasi. Scrotum dibuka dengan gunting hingga tampak testis. Testis dianggkat dengan memotong duktus
epididimis. Setelah dikeluarkan maka testis dibersihkan dari jaringan ikat dan lemak. Kemudian dilakukan pengamatan sebagai berikut :
3.7.8.1. Pengamatan kadar MDA Testis mencit
Pemeriksaan kadar MDA testis mencit dilakukan pada hari ke-42 setelah perlakuan pada semua kelompok. Testis dihomogenkan dalam 5 ml larutan buffer
phosphate pH 7,2. Metode pemeriksaan MDA menurut Rao et al., dan Hsieh et al, 2006 yang telah dimodifikasi sebagai berikut :
• Reagensia :
1 2-Thiobarbiturat acid Merck.Cat. No. 1.08180.0025 2 1,1,3,3-terramethoxypropane 99 , 600 µM
3 Acetic acid glacial 4 Sodium hydroxide NaOH
5 Aquadest
Universitas Sumatera Utara
a Persiapan Reagensia •
TBABuffer Reagent TBABuffer Reagent terdiri dari : 0,67 g 2-thiobarbituric acid dilarutkan dalam
100 mL aquadest, selanjutnya 0,5 g sodium hydroxide dan 100 asam asetat glacial. •
Standard MDA Sebanyak 250 µL 1,1,3,3-tetramethoxypropane Malondialdehid bis 500 µM
dilarutkan dalam 750 µL aquadest untuk memperoleh larutan stok MDA 125 µM. Selanjutnya dari larutan stok MDA 125 µM dilarutkan dalam aquadest dan dibuat
8 seri standar yang dapat dilihat pada table di bawah ini :
Tabel 3. Persiapan standar MDA untuk spektrofotometri
Nomor standar
Konsentrasi MDA µM
Volume MDA Standar µL
Volume pelarut µL 8
7 6
5 4
3 2
1 50
25 10
5 2,5
1,25 0,625
400 200
80 40
20 10
5 600
800 920
960 980
990 995
1000
a Prosedur uji 1 Sebanyak 500 µ L sample atau standar MDA dimasukkan dalam
tabung ependorf yang masing-masing telah diberi label. 2 Ditambahkan 0,5 ml aquadest pada masing-masing tabung.
3 Kemudian ditambahkan 0,5 ml TBABuffer Reagent.
Universitas Sumatera Utara
4 Selanjutnya masing-masing tabung diinkubasi di dalam waterbath dengan suhu 95
C selama 60 menit. 5 Setelah diinkubasi, masing-masing tabung dikeluarkan dari waterbath
dan setelah dingin masing-masing tabung disentrifugasi dengan kecepatan 7000 rpm selama 10 menit.
6 Supernatan diambil
untuk selanjutnya
dianalisa dengan
spektrofotometer UV pada panjang gelombang 534 nm.
3.7.8.2. Pengamatan Gambaran Mikroskopis Tubulus Seminiferus Testis Mencit
Kategori