6. Penentuan kandungan fenolat total
a. Pembuatan larutan asam galat
Asam galat ditimbang sebanyak 25 mg, kemudian dimasukkan ke dalam gelas Beker dan dilarutkan dengan aquades : metanol p.a 1:1.
Larutan dimasukkan ke dalam labu takar 50 mL, tambahkan akuades : metanol p.a 1:1 sampai batas tanda. Larutan tersebut diambil sebanyak
0,5; 0,75 ; 1 ; 1,25 dan 1,5 mL, masukkan ke dalam labu takar 10 mL dan tambahkan aquades : metanol p.a 1:1 sampai batas tanda, sehingga
diperoleh konsentrasi larutan baku asam galat sebesar 50; 75; 100; 125; dan 150 g mL.
b. Pembuatan larutan uji untuk penentuan kandungan fenolik total
Ekstrak etanol buah buni ditimbang sebanyak 250 mg, larutkan menggunakan metanol p.a dalam gelas beker. Kemudian masukkan ke
dalam labu takar 10 mL dan ditambahkan metanol p.a hingga batas tanda. Larutan intermediet dibuat dengan mengambil 3,6 mL dari larutan stok,
masukkan ke dalam labu takar 10 mL dan ditambahkan metanol p.a hingga batas tanda. Sejumlah 2,5 mL larutan intermediet diambil, masukkan ke
dalam labu takar 10 mL dan ditambahkan metanol p.a hingga batas tanda. Konsentrasi larutan uji sebesar 4500,0 g mL.
c. Penentuan operating time
Larutan asam galat dengan konsentrasi 50; 100; dan 150 gmL diambil sebanyak 0,5 mL. Reagen Folin-Ciocalteu ditambahkan sebanyak
2,0 mL pada masing – masing larutan. Selanjutnya, ditambahkan dengan 4,0
mL natrium karbonat 1 M. Baca absorbansi larutan setiap 5 menit dengan spektrofotometer visibel pada panjang gelombang 760 nm selama 60 menit.
d. Penentuan panjang gelombang maksimum
Larutan asam galat dengan konsentrasi 50; 100; dan 1 50 gmL
diambil sebanyak 0,5 mL. Reagen Folin-Ciocalteu ditambahkan sebanyak 2 mL pada masing
– masing larutan. Selanjutnya, ditambahkan dengan 4,0 mL natrium karbonat 1 M. Diamkan selama operating time yang telah
didapat, kemudian dilakukan scanning panjang gelombang maksimum dengan spektrofotometer visibel dengan panjang gelombang 600-800 nm.
e. Pembuatan kurva baku asam galat
Larutan asam galat dengan konsentrasi 50; 75; 100; 125; dan 150 gmL diambil sebanyak 0,5 mL. Reagen Folin-Ciocalteu ditambahkan
sebanyak 2 mL.Selanjutnya, ditambahkan dengan 4,0 mL natrium karbonat 1 M, diamkan selama operating time yang telah didapat. Baca
absorbansinya pada panjang gelombang maksimum yang telah diperoleh. Lakukan replikasi sebanyak 3 kali.
f. Estimasi kandungan fenolik total larutan uji
Larutan uji dengan konsentrasi 4500,0 gmL diambil sebanyak 0,5 mL. Reagen Folin-Ciocalteu ditambahkan sebanyak 2mL. Selanjutnya,
ditambahkan dengan 4,0 mL natrium karbonat 1 M, diamkan selama operating time yang telah didapat. Baca absorbansinya pada panjang
gelombang maksimum yang telah diperoleh. PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
7. Penentuan aktivitas antioksidan
Kategori