Gambar 12. Grafik penentuan operating time asam galat
Dari grafik Gambar 12 terlihat pada menit ke 30 nilai absorbansi yang didapat telah stabil, berarti reaksi sudah berjalan sempurna. Sehingga dapat
disimpulkan OT untuk pengukuran asam galat adalah 30 menit.
2. Penentuan panjang gelombang maksimum
Penentuan panjang gelombang maksimum dilakukan untuk mendapatkan panjang gelombang serapan maksimum dari hasil reaksi antara asam galat dengan
reagen Folin-Cioucalteu yang akan digunakan untuk pengukuran absorbansi pengujian kandungan fenolik total sampel. Pembacaan panjang gelombang
dilakukan dengan mereaksikan asam galat dan pereaksi Folin-Ciocalteu dan
didiamkan selama 30 menit.
Penentuan panjang gelombang serapan maksimum sangat penting dalam sensitifitas suatu analisis dengan menggunakan spektrofotometer. Hal ini
dikarenakan pada panjang gelombang maksimum kepekaannya tinggi, sehingga perubahan absorbansi untuk setiap satuan konsentrasi adalah yang paling besar
Gandjar dan Rohman, 2007.
0,1 0,2
0,3 0,4
0,5 0,6
0,7 0,8
0,9
0 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 70
Abs o
rba ns
i
Waktu menit
50 µgmL 100 µgmL
150 µgmL
Penentuan panjang gelombang maksimum dilakukan pada 3 konsentrasi yang berbeda, yaitu konsentrasi tinggi, tengah, dan rendah. Setiap
konsentrasi akan memberikan nilai absorbansi yang berbeda pada panjang gelombang maksimum, sehingga ketiga konsentrasi larutan asam galat, yaitu yaitu
50 μgmL, 100 μgmL, dan 150 μgmL.
Penggunaan tiga
konsentrasi tersebut
diharapkan akan
mempresentasikan panjang gelombang maksimum pada masing – masing
konsentrasinya. Scanning panjang gelombang maksimum dilakukan pada rentang panjang gelombang 600 nm
– 800 nm, dimana menurut Blainskiet al. 2013 panjang gelombang serapan maksimum untuk pereaksi Folin-Ciocalteu yang
direaksikan dengan senyawa fenolik adalah 760 nm.
Tabel II. Hasil scanning panjang gelombang serapan maksimum asam galat yang direaksikan dengan pereaksi Folin-Ciocalteu
Konsentrasi larutan asam galat
maksimum hasil scanning nm
maksimum yang digunakan
50 750
745 100
746 150 µgmL
740 Dari hasil scanning pada tiga seri konsentrasi asam galat pada tabel,
didapatkan rata – rata panjang gelombang maksimum sebesar 745 nm. Panjang
gelombang tersebut yang digunakan untuk pengukuran absorbansi kurva baku asam galat dan pengujian kandungan fenolik total sampel.
G. Penetapan Kandungan Fenolik Total
