Setelah proses transformasi, berlangsung integrasi plasmid rekombinan di dalam sel inang bakteri Escherichia coli
DH5α, selanjutnya plasmid target bereplikasi seiring replikasi sel E. coli
DH5α. Vektor bereplikasi menghasilkan banyak salinan atau turunan yang identik dan pada proses yang sama selain vektor
menggandakan diri juga menggandakan plasmid gen yang dibawanya.
3.3.3 Identifikasi Agrobacterium tumefaciens Transforman
Uji keberhasilan konjugasi dengan metode tri-parental mating TPM untuk transformasi pMSH
κ-Car ke Agrobacterium tumefaciens ditunjukkan pada Gambar 11. Pada kultur tunggal, ketiga bakteri tidak tumbuh Gambar 11B,
sedangkan bakteri A. tumefaciens yang dikonjugasi dan diinkubasi pada media selektif berhasil tumbuh Gambar 11A.
Gambar 11 Koloni A. tumefaciens transforman hasil konjugasi dapat tumbuh pada media selektif tanda panah yang mengindikasikan proses tri-
parental matingTPM berhasil dilakukan A, sedangkan kultur tunggal masing-masing: Escherichia coli
DH5αdonor 1, E. coli DH1 pRK2013helper 2, Agrobacterium tumefaciensresipien 3
tidak tumbuh pada media selektif, sebagai kontrol negatif B Agrobacterium tumefaciens transforman mampu tumbuh di media selektif
yang ditambahkan antibiotik marka seleksi kanamisin, higromisin dan streptomisin, karena selain memiliki gen marka seleksi sendiri streptomisin,
juga telah membawa gen marka seleksi kanamisin dan higromisin yang terdapat pada konstruksi pMSH
κ-Car. Sementara kultur tunggal donor, helper dan resipien tidak dapat tumbuh, karena donor E. coli
DH5α maupun helper E. coli DH1 pRK2013 hanya membawa gen marka seleksi kanamisin dan higromisin
saja, tetapi tidak membawa marka seleksi streptomisin. Demikian juga resipien A. tumefaciens sebelum konjugasi yang hanya
membawa marka seleksi streptomisin tetapi tidak membawa marka seleksi kanamisin dan higromisin. Bakteri yang mampu tumbuh pada media selektif,
hanya A. tumefaciens hasil konjugasi yang telah mengandung gen insersi Wise et al. 2006, dalam hal ini plasmid pMSH
κ-Car. Dengan demikian, hasil tersebut menunjukkan bahwa proses transformasi pMSH
κ-Car ke A. tumefaciens telah berhasil dilakukan.
