Tabel 1 Analisis kesejajaran
fragmen nukleotida
gen κ-Carrageenase
menggunakan program BLAST No
Aksesi Deskripsi
Skor Query
cover E-
value Kesa-
maan 1
X71620.1 A carrageenovora genes
cgkA and cgkB, partial 608
94 5e-
170 76
2 GU38634
2.1 Pseudoalteromonas
tetraodonis cgk-k142a gene for kappa-carrageenase,
complete cds 579
90 3e-
161 76
3 GU38634
2.1 Pseudoalteromonas sp. LL1
kappa-carrageenase gene, complete cds
281 64
1e-71 73
Bakteri A. tumefaciens transforman yang membawa konstruksi pMSH κ-Car
telah siap digunakan untuk perlakuan ke rumput laut Kappaphycus alvarezii atau rumput laut jenis lainnya untuk pembuatan transgenik. Proses transfer gen pada
rumput laut K. alvarezii, telah dilakukan dengan menggunakan metode elektroporasi Rajamuddin et al. 2014, juga telah dapat dilakukan menggunakan
metode perantara A. tumefaciens Daud et al. 2013; Fajriah et al. 2014; Handayani et al. 2014.
Sebagai kelanjutan dari tahap ini, dilakukan pembuatan Kappaphycus alvarezii transgenik gen
κ-Carrageenase menggunakan metode mediasi A. tumefaciens. Rumput laut yang mengekspresikan gen
κ-Carrageenase diharapkan akan memiliki kandungan kappa-karagenan lebih banyak over-ekspresi daripada
non-transgenik.
3.4 Simpulan
Produk PCR dengan cetakan DNA dari Agrobacterium tumefaciens berukuran sekitar 2.000 bp menunjukkan bahwa konstruksi gen pMSH
κ-Car telah berhasil dibuat, dan Agrobacterium tumefaciens yang membawa konstruksi
gen tersebut telah berhasil diperoleh.
4 TRANSFORMASI GEN KAPPAΚ-CARRAGEENASE
PADA RUMPUT LAUT Kappaphycus alvarezii
ABSTRAK Teknik transformasi gen asing telah diaplikasikan untuk meningkatkan karakter
penting pada organisme akuatik. Sebagai langkah awal menuju peningkatan kandungan kappa
-karagenan, dalam penelitian ini gen κ-Carrageenase κ-Car ditransformasi ke rumput laut Kappaphycus alvarezii melalui mediasi
Agrobacterium tumefaciens. Pada penelitian ini digunakan konstruksi plasmid biner pMSH pMSH
κ-Car yang dikendalikan oleh promoter 35S CaMV 35S dan terminator Nos tNos. Analisis DNA untuk identifikasi K. alvarezii
transgenik dilakukan dengan metode PCR menggunakan dua set primer. Hasil pemeliharaan eksplan pascatransformasi menunjukkan bahwa 36 eksplan lulus
hidup dan bertunas sebesar 88,9, dan 100 dari jumlah tunas yang disampling membawa gen
κ-Car. Ukuran fragmen DNA produk PCR menggunakan primer 35S-F dan tNos-R adalah 2.000 bp, ukuran sama dengan produk PCR dari kontrol
positif dengan cetakan plasmid pMSH κ-Car, sementara tidak ada produk
amplifikasi pada K. alvarezii non-transformasi kontrol negatif. Selanjutnya, analisis PCR menggunakan primer 35S-F dan 35S-R menunjukkan produk
amplifikasi 300 bp, ukuran yang sama seperti sekuen promotor 35S CaMV. Dengan demikian, K. alvarezii transgenik yang membawa
κ-Car telah dihasilkan.
Keywords: gen Kappa
κ-Carrageenase, Kappaphycus alvarezii, transformasi gen
TRANSFORMATION OF KAPPA κ-CARRAGEENASE GENE
TO SEAWEED Kappaphycus alvarezii
ABSTRACT Foreign gene transformation techniques have been applied to improve the
valuable traits of farmed organism. As the first step towards increasing of kappa -carrageenan content, in this study κ-Carrageenase gene κ-Car was
transferred into K. alvarezii by mediation of Agrobacterium tumefaciens. The pMSH
κ-Car binary plasmid construct controlled by 35S CaMV promoter 35S and Nos terminator tNos was used in this study. DNA analysis to identify the
transgenic was conducted by PCR method using two sets of primer. The result showed that 36 transformed explants were survived, 88.9 sprouted and 100
of the sprouted explants were having the κ-Car gene. The size of amplified DNA
fragment from K. alvarezii transgenic using 35S-F and tNos-R set primers was 2,000 bp, the same size as PCR product of the template of pMSH
κ-Car plasmid, while no amplification product in non-transformated explants negative control
was found. Furthermore, PCR analysis using 35S-F and 35S-R set primers showed amplification product of 300 bp, the same size as the length of 35S CaMV
promoter sequence. Thus, K. alvarezii transgenic carrying κ-Car had been
generated. Keywords: gene transformation, Kappaphycus alvarezii, K
appaκ-Carrageenase gene
