Pengurutan DNA dan Analisis Kesejajaran Gen κ-Carrageenase

4 TRANSFORMASI GEN KAPPAΚ-CARRAGEENASE PADA RUMPUT LAUT Kappaphycus alvarezii ABSTRAK Teknik transformasi gen asing telah diaplikasikan untuk meningkatkan karakter penting pada organisme akuatik. Sebagai langkah awal menuju peningkatan kandungan kappa -karagenan, dalam penelitian ini gen κ-Carrageenase κ-Car ditransformasi ke rumput laut Kappaphycus alvarezii melalui mediasi Agrobacterium tumefaciens. Pada penelitian ini digunakan konstruksi plasmid biner pMSH pMSH κ-Car yang dikendalikan oleh promoter 35S CaMV 35S dan terminator Nos tNos. Analisis DNA untuk identifikasi K. alvarezii transgenik dilakukan dengan metode PCR menggunakan dua set primer. Hasil pemeliharaan eksplan pascatransformasi menunjukkan bahwa 36 eksplan lulus hidup dan bertunas sebesar 88,9, dan 100 dari jumlah tunas yang disampling membawa gen κ-Car. Ukuran fragmen DNA produk PCR menggunakan primer 35S-F dan tNos-R adalah 2.000 bp, ukuran sama dengan produk PCR dari kontrol positif dengan cetakan plasmid pMSH κ-Car, sementara tidak ada produk amplifikasi pada K. alvarezii non-transformasi kontrol negatif. Selanjutnya, analisis PCR menggunakan primer 35S-F dan 35S-R menunjukkan produk amplifikasi 300 bp, ukuran yang sama seperti sekuen promotor 35S CaMV. Dengan demikian, K. alvarezii transgenik yang membawa κ-Car telah dihasilkan. Keywords: gen Kappa κ-Carrageenase, Kappaphycus alvarezii, transformasi gen TRANSFORMATION OF KAPPA κ-CARRAGEENASE GENE TO SEAWEED Kappaphycus alvarezii ABSTRACT Foreign gene transformation techniques have been applied to improve the valuable traits of farmed organism. As the first step towards increasing of kappa -carrageenan content, in this study κ-Carrageenase gene κ-Car was transferred into K. alvarezii by mediation of Agrobacterium tumefaciens. The pMSH κ-Car binary plasmid construct controlled by 35S CaMV promoter 35S and Nos terminator tNos was used in this study. DNA analysis to identify the transgenic was conducted by PCR method using two sets of primer. The result showed that 36 transformed explants were survived, 88.9 sprouted and 100 of the sprouted explants were having the κ-Car gene. The size of amplified DNA fragment from K. alvarezii transgenic using 35S-F and tNos-R set primers was 2,000 bp, the same size as PCR product of the template of pMSH κ-Car plasmid, while no amplification product in non-transformated explants negative control was found. Furthermore, PCR analysis using 35S-F and 35S-R set primers showed amplification product of 300 bp, the same size as the length of 35S CaMV promoter sequence. Thus, K. alvarezii transgenic carrying κ-Car had been generated. Keywords: gene transformation, Kappaphycus alvarezii, K appaκ-Carrageenase gene