commit to user 17
BAB III METODE PENELITIAN
A. Waktu dan Tempat Penelitian
Penelitian ini dilaksanakan di Laboratorium Pusat Universitas Sebelas Maret Surakarta dan Laboratorium Biologi MIPA Universitas Sebelas Maret Surakarta.
Waktu penelitian dilaksanakan pada bulan Juli 2010 sampai Januari 2011.
B. Bahan dan Alat
1. Bahan
Bahan yang digunakan dalam penelitian ini adalah sampel darah sapi Bali dari Sumbawa dan sapi Aceh. Pengambilan sampel darah sapi Bali dari
Sumbawa di Kecamatan Marongge, Kabupaten Sumbawa, sedangkan pengambilan sampel darah sapi Aceh di BPTU Balai Pembibitan Ternak
Unggul Sapi Aceh Indrapuri – Nanggroe Aceh Darussalam. Masing-masing
sampel darah sebanyak 20 individu yang disimpan dalam venoject berisi EDTA.
Bahan kimia yang digunakan untuk penelitian dibagi dalam beberapa bagian sesuai tahapan penelitian, yaitu:
Ekstraksi DNA yaitu: Wizard Genomic DNA Purification Kit dari Promega
cell lysis solution, nuclei lysis solution, protein presipitation solution, DNA rehydration, isopropanol, etanol 70, sampel darah Sapi Bali dari
Sumbawa dan Sapi Aceh.
commit to user 18
Uji Kuantitas DNA yaitu: DNA hasil lisis dan aquades sebagai blangko.
Uji kualitas DNA yaitu: DNA hasil lisis, ultra pure DNA Grade agarose
1 dari Bio Rad, 1X TAE buffer Tris Acetic Acid, blue loading dye dan ethidium bromida.
PCR MIX yaitu: Go Tag Green master mix Promega, USA, Nuclease
Free Water dari Ambion, 5 primer mikrosatelit BM1824, ETH225, INRA005, MM12, dan TGLA227 dari SIGMA, DNA hasil lisis
diencerkan 10X.
Analisis Mikrosatelit yaitu: 10X TBE buffer Tris Borate, 10 APS Ammonium Peroxodisulfate Solution, N,N,N,N Tetramethylethylene -
diamine TEMED, aquades steril, Blue loading dye, acrylamid:bis 19:1 30, Urea, 100 - 1500 base pare DNA Moleculare Weight Marker, buffer
TBE 1X dan ethidium bromida EtBr.
2. Alat
Alat yang digunakan dalam penelitian ini adalah sentrifuge Hettich Mikro 22R Jerman, satu set micropipet ukuran 10
, 200 , 1.000 , satu set tips 10
, 200 , 1.000 , tabung mikro 1,5 ml Axygen, tabung mikro 0,6 ml, satu set alat elektroforesis horisontal dan power supply Bio
Rad, satu set alat elektroforesis vertikal dan power supply Bio Rad, microwave, inkubator, waterbath Julabo, Gene Amplification PCR system
9700 Thermo Cycler Applied Biosystem, Autoclave Ogawa Saiki Co., Erlenmeyer, gelas ukur, tabung venoject, vortex mixer Gemmy Industrial
Corp. Taiwan, lemari pendingin suhu 4 C, freezer suhu -20
C, timbangan
commit to user 19
elektrik Denver Instrumen, UV transluminator , kamera digital dan geldoc Vilber Lourmat.
C. Cara Kerja
Kategori