kocok perlahan. Panaskan mulut tabung lalu masukan 10 ml LB dengan menggunakan pipet ke dalam tabung lalu masukan
0,1 ml sampel larutan pengenceran 10
-3
dan kocok perlahan. Inkubasi tabung selama 24-48 jam dengan suhu 35
C. Hasil
presumtive test dikatakan positif apalabila terdapat gas pada
tabung durham. Pengujian selalu disertai dengan kontrol positif yaitu koloni E. coli dan control negatif yaitu aquades
steril.
14
3.8.3.2.Confirmed Test
Dari tabung yang positif gas pada presumtive test dipindahkan menggunakan jarum inokulasi ke dalam media
EMBA secara aseptik. Inkubasikan pada suhu 35-37 ± 0,5 C
selama 24±2jam. Uji dikatakan positif bila terdapat koloni kehijauan dengan kilap logam.
15
3.8.4. Uji Identifikasi E. coli
3.8.4.1. Uji Biokimia IMViC
Dalam menentukan jenis bakteri E.coli maka dilakukan uji biokimia IMViC Indol, Metil merah, Voges
Praskauer dan Sitrat. 1.
Uji Indol akan terbentuk lapisan cincin berwarna merah muda pada permukaan biakan setelah p6bahan reagen
erlich. Hal
tersebut menunjukan
hasil positif
dan menguatkan kemungkinan adanya bakteri E. coli karena E.
coli merupakan bakteri yang dapat membentuk indol dari triptofan sebagai sumber karbonnya.
2. Uji methyl red, jika diduga terdapat E. coli maka hasilnya
akan positif karena terjadi perubahan warna menjadi merah setelah ditambahkan indikator methyl red. Artinya, bakteri
ini mengahasilkan asam campuran dari proses fermentasi glukosa yang terkandung dalam medium MR-VP.
3. Uji VP, jika diduga pada sampel terdapat E. coli maka
hasilnya akan negatif, karena tidak terbentuk warna merah pada medium setelah ditambahkan alfanaftol dan KOH, hal
ini disebabkan karena bakteri tidak menghasilkan produk netral seperti asetil metil karbinol asetoin dari hasil
metabolisme glukosa melainkan menghasilkan asam. Uji PV ini negatif untuk Escherichia coli karena Escherichia
coli memfermentasikan karbohidrat menjadi produk asam dan tidak menghasilkan produk netral seperti asetoin.
4. Uji Sitrat, uji ini dilihat kemampuan bakteri untuk
menggunakan sitrat sebagai satu-satunya sumber karbon. Uji ini negatif untuk Escherichia coli karena Escherichia
coli tidak dapat menggunakan sitrat sebagai sumber karbon Pernyataan hasil dari uji deteksi Escherichia coli
pada uji IMViC memberikan hasil yaitu uji Indol akan positif, Uji Merah metal akan positif, Voges-proskauer
akan negatif dan uji Citrate akan negatif.
14,17
3.8.4.2. Pewarnaan Gram
Pewarnaan Gram dilakukan dengan cara yaitu buat preparat apus bakteri dengan cara apuskan satu ose NaCl
fisiologis steril pada gelas objek, lalu ambil satu ose biak bakteri dari Agar Darah, kemudian dibuat apus setipis
mungkin, dikeringkan dan difiksasi di atas api bunsen. Preparat apus ditetesi pewarna pertama dengan gentian
violet selama 5 menit, warna dibuang dan bilas dengan air, ditetesi lugol selama 1 menit lalu dibuang dan dibilas,
kemudian preparat apus diteteskan dengan alkohol 95 secepatnya.
Selanjutnya alkohol
dibuang dan dibilas
dengan air, dan diberi pewarna kedua dengan safranin selama 2 menit dan warna kemudian dibuang dan
dibersihkan dengan air. Keringkan preparat dengan tisu lalu
