Pengambilan anakan tumih dengan metode puteran dilakukan dengan mengeruk anakan sehingga akar dan tanah menjadi satu, kemudian anakan
dimasukkan ke dalam polybag. Setelah itu, polybag yang berisi anakan dimasukkan dalam plastik besar kemudian diberi air gambut hingga menutupi
seperempat bagian polybag, lalu ditutup sampai rapat sehingga air tidak dapat keluar dan dimasukkan ke dalam kardus. Sedangkan anakan tumih yang diambil
dengan metode cabutan dilakukan dengan mencabut anakan dan memisahkan tanah dari akar anakan, kemudian anakan dibungkus menggunakan kertas koran.
Anakan yang telah dibungkus kertas koran dimasukkan ke dalam plastik besar dan diberi air gambut sampai kertas koran menjadi lembap serta dimasukkan dalam
kardus. Anakan tumih yang diambil dengan metode puteran dan cabutan
dipindahkan ke media tanam yang telah disediakan sebelumnya di Rumah Kaca Ekologi Hutan, Fakultas Kehutanan IPB. Anakan yang diambil dengan metode
puteran langsung dipindahkan ke media tanam di dalam polybag. Pada anakan dengan metode cabutan, dilakukan pengurangan daun sehingga tersisa sepertiga
daun. Tujuan dari pemotongan daun untuk mengurangi penguapan dari tanaman tersebut. Pemotongan dilakukan dengan menggunakan gunting stek yang telah
disterilisasi menggunakan alkohol 70. Anakan yang telah dipindahkan diberi sungkup UV dan paranet 65 yang bertujuan untuk menjaga suhu, kelembapan
dan intensitas cahaya.
3.3.2 Karantina Tanaman
Karantina dilakukan untuk mensterilisasi tanaman dari kontaminan berupa
jamur atau bakteri yang berasal dari alam. Proses karantina yang dilakukan yaitu dengan menyemprot hormon tunas 10 mll atau Hyponex hijau 2 gl pada pagi
hari. Pada sore hari disemprot fungisida Antracol 1 gl + bakterisida Agrept 1 gl. Dalam pelaksanaannya, proses sterilisasi hanya dilakukan satu kali dalam
seminggu. Hal ini dikarenakan kondisi bibit yang belum stabil serta menghindari kematian bibit tumih.
3.3.3 Sterilisasi
Proses sterilisasi dalam kegiatan kultur jaringan terdiri dari sterilisasi
lingkungan kerja, sterilisasi alat dan medium kultur, serta sterilisasi eksplan.
Sterilisasi lingkungan kerja untuk kultur in vitro terdiri dari lingkungan umum ruang transfer secara keseluruhan dan lingkungan khusus lingkungan di dalam
laminar air flow cabinet. Steriliasi alat-alat kerja yaitu pinset, skalpel, gunting dan botol kultur
dicuci menggunakan deterjen sampai bersih kemudian dikeringkan. Alat-alat tersebut dibungkus menggunakan kertas koran kemudian diautoklaf selama satu
jam pada suhu 121 ⁰C sampai 126⁰C dan tekanan 1,5 atm. Alat-alat yang telah
diautoklaf dimasukkan ke dalam laminar air flow cabinet untuk disinari ultraviolet UV. Sterilisasi pada laminar air flow cabinet yaitu dengan
menyemprot permukaan atau meja kerja dengan alkohol 70 dan menghidupkan blower pada laminar air flow cabinet. Lampu ultraviolet dalam laminar air flow
cabinet dinyalakan selama satu hingga dua jam sebelum melakukan kegiatan di laminar air flow cabinet, ini bertujuan untuk mengurangi kontaminan di tempat
kerja. Pinset dan mata pisau yang digunakan pada proses inisiasi dicelupkan ke dalam alkohol 70 dan dibakar di atas api bunsen untuk menjaga sterilitas
sebelum kegiatan pemotongan dan penanaman eksplan. Media kultur yang digunakan disterilkan menggunakan autoklaf selama 20
menit pada suhu 121 ⁰C sampai 126⁰C dengan tekanan 1,5 atm. Untuk mengetahui
perubahan atau kontaminasi yang terjadi sebelum digunakan, media perlu disimpan selama dua hingga tiga hari.
Perlakuan sterilisasi yang dilakukan merupakan perlakuan yang dianggap optimal berdasarkan literatur dikarenakan jumlah eksplan yang terbatas. Proses
sterilisasi eksplan yang dilakukan yaitu sterilisasi di luar dan di dalam laminar air flow cabinet. Proses sterilisasi eksplan di luar laminar air flow cabinet yaitu:
1. Anakan tumih yang telah dikarantina, diambil pucuk yang masih menguncup
dari bahan induk dengan panjang 1-2 cm. 2.
Eksplan pucuk yang telah dipotong dari bahan induk dicuci bersih pada air mengalir dan diusap dengan kapas basah untuk menghilangkan kotoran yang
menempel. 3.
Pencucian eksplan dengan deterjen sebanyak sepertiga sendok spatula selama 10 menit, kemudian eksplan dicuci bersih.
