eksplan steril. Menurut Gunawan 1987, pucuk yang berisi meristem dan jaringan-jaringan yang lebih mudah diisolasi. Dalam kultur pucuk, ukuran 0,3 -
1,0 cm digunakan sebagai bahan awal. Pada umumnya, pertumbuhan pucuk memerlukan zat pengatur tumbuh dalam media. Tahapan pertumbuhan dan tipe
pertumbuhan menentukan jenis dan konsentrasi zat pengatur tumbuh yang diperlukan. Kisaran konsentrasi zat pengatur tumbuh yang digunakan disajikan
pada Tabel 2. Tabel 2 Zat pengatur tumbuh yang digunakan dalam kultur pucuk
Zat Pengatur Tumbuh Media I mgl
Media II mgl Media III mgl
Auksin NAA
0.05 – 1.0
0.05 – 0.2
0.1 – 5.0
IBA 0.01
– 1.0 0.05
– 2.0 0.3
– 2.0 IAA
0.05 – 1.0
0.05 – 1.5
0.3 – 5.0
Sitokinin BAP
0.2 – 3.0
0.1 – 5.0
- Kinetin
0.3 – 2.0
0.3 – 2.0
- ZiP
0.75 – 3.0
2 -
Giberelin GA
3
0.01 – 0.1
0.2 -
Sumber : George dan Sherrington 1984 dalam Gunawan 1987
BAB III METODOLOGI
3.1 Lokasi dan Waktu Penelitian
Penelitian ini dilakukan di Laboratorium Bioteknologi Lingkungan Pusat Penelitian Lingkungan Hidup, Institut Pertanian Bogor PPLH IPB. Penelitian ini
berlangsung mulai dari bulan Maret 2011 sampai bulan Agustus 2011.
3.2 Alat dan Bahan
Alat-alat yang digunakan dalam persiapan bibit yaitu polybag, kertas koran, kardus, gunting stek, paranet dan plastik. Dalam pembuatan media, alat-
alat yang digunakan yaitu gelas piala, gelas ukur biasa, pipet volumetrik, neraca analitik, pH meter, panci, pengaduk, autoklaf, karet gelang dan plastik. Sedangkan
alat-alat yang digunakan dalam kegiatan sterilisasi dan penanaman yaitu spatula, cawan petri, skalpel, pisau, pinset, lampu bunsen, laminar air flow cabinet,
stopwatch, aluminium foil, plastik wrap dan handsprayer; serta alat tulis dan
kamera digital untuk kegiatan pengamatan.
Bahan yang digunakan dalam persiapan bibit yaitu kompos, pasir, sekam padi, serbuk gergaji dan cocopeat. Dalam kegiatan sterilisasi dan penanaman,
bahan-bahan yang digunakan yaitu fungisida, bakterisida, hormon tunas, Hyponex hijau, alkohol 70, deterjen, air steril, HgCl
2
, Clorox, antiseptik betadine dan eksplan tumih bagian pucuk, sedangkan dalam pembuatan media, bahan-bahan
yang diperlukan yaitu larutan stok media MS Murashige dan Skoog, agar-agar, gula pasir, air steril, antibiotik ppm, BAP 6-benzyl amino purine dan TDZ
Thiadiazuron.
3.3 Prosedur Kerja
3.3.1 Persiapan Bibit Tumih
Anakan tumih diambil dengan menggunakan metode puteran dan cabutan. Lokasi pengambilan anakan tumih yaitu Kelurahan Kereng Bangkirai, Kecamatan
Sabangau, Propinsi Kalimantan Tengah. Kriteria pengambilan anakan tumih yaitu anakan yang memiliki tinggi 10 cm hingga 50 cm, pucuk yang masih menguncup,
anakan yang belum memiliki kayu dan memiliki pertumbuhan yang baik.
Pengambilan anakan tumih dengan metode puteran dilakukan dengan mengeruk anakan sehingga akar dan tanah menjadi satu, kemudian anakan
dimasukkan ke dalam polybag. Setelah itu, polybag yang berisi anakan dimasukkan dalam plastik besar kemudian diberi air gambut hingga menutupi
seperempat bagian polybag, lalu ditutup sampai rapat sehingga air tidak dapat keluar dan dimasukkan ke dalam kardus. Sedangkan anakan tumih yang diambil
dengan metode cabutan dilakukan dengan mencabut anakan dan memisahkan tanah dari akar anakan, kemudian anakan dibungkus menggunakan kertas koran.
Anakan yang telah dibungkus kertas koran dimasukkan ke dalam plastik besar dan diberi air gambut sampai kertas koran menjadi lembap serta dimasukkan dalam
kardus. Anakan tumih yang diambil dengan metode puteran dan cabutan
dipindahkan ke media tanam yang telah disediakan sebelumnya di Rumah Kaca Ekologi Hutan, Fakultas Kehutanan IPB. Anakan yang diambil dengan metode
puteran langsung dipindahkan ke media tanam di dalam polybag. Pada anakan dengan metode cabutan, dilakukan pengurangan daun sehingga tersisa sepertiga
daun. Tujuan dari pemotongan daun untuk mengurangi penguapan dari tanaman tersebut. Pemotongan dilakukan dengan menggunakan gunting stek yang telah
disterilisasi menggunakan alkohol 70. Anakan yang telah dipindahkan diberi sungkup UV dan paranet 65 yang bertujuan untuk menjaga suhu, kelembapan
dan intensitas cahaya.
3.3.2 Karantina Tanaman
Karantina dilakukan untuk mensterilisasi tanaman dari kontaminan berupa
jamur atau bakteri yang berasal dari alam. Proses karantina yang dilakukan yaitu dengan menyemprot hormon tunas 10 mll atau Hyponex hijau 2 gl pada pagi
hari. Pada sore hari disemprot fungisida Antracol 1 gl + bakterisida Agrept 1 gl. Dalam pelaksanaannya, proses sterilisasi hanya dilakukan satu kali dalam
seminggu. Hal ini dikarenakan kondisi bibit yang belum stabil serta menghindari kematian bibit tumih.
3.3.3 Sterilisasi
Proses sterilisasi dalam kegiatan kultur jaringan terdiri dari sterilisasi
lingkungan kerja, sterilisasi alat dan medium kultur, serta sterilisasi eksplan.
