32
E. Tata Cara Penelitian
1. Pemilihan sampel
Sampel jamu beras kencur diambil dari 3 pasar yang ada di kotamadya Yogyakarta yaitu pasar Pingit, pasar Kranggan dan pasar Karangwaru. Dari 3
pasar tersebut diambil sampel dari 5 orang penjual jamu beras kencur. Setiap penjual diambil sampelnya sebanyak 3 kali pada waktu yang berbeda. Sampel
jamu beras kencur selanjutnya diuji mikroba Escherichia coli sesuai prosedur Metode Analisis Pusat Pengujian Obat dan Makanan MAPPOMN
No.97MIK00.
2. Sterilisasi alat
Alat-alat yang telah dicuci, dibungkus menggunakan aluminium foil dan dikeringkan dengan menggunakan oven pada suhu 180
C selama 1 jam
3. Pembuatan media
a. Trypton broth
. Larutkan 10 g tryptone ke dalam 1 L air suling. Diisikan ke dalam tabung masing
masing 5 ml, disterilkan dengan autoklaf pada suhu 121
○
C selama 15 menit. Larutan yang baru disterilkan, didinginkan sampai suhu kamar kemudian
digunakan sesuai kebutuhan. Media yang telah disterilkan, jika tidak digunakan disimpan pada suhu 5 – 15
○
C. pH akhir = 7,1. b.
Simmon’s citrate agar. Bahan-bahan dilarutkan dalam air suling hingga volume mencapai 1000 ml.
panaskan sambil diaduk hingga mendidih. Diisikan ke dalam tabung 3mltabung dan disterilkan dalam autoklaf pada suhu 121
○
C selama 15 menit, kemudian
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
33
diletakkan miring. penggunaan : langsung digunakan yang dalam tabung reaksi agar miring. Media yang telah disterilkan, jika tidak digunakan disimpan pada
suhu 5 – 15
○
C. pH akhir = 6,8. c.
Nutrient agar .
Bahan-bahan dilarutkan dalam 1000 ml air suling. panaskan sambil diaduk hingga mendidih. Didinginkan pada suhu 50 – 60
○
C. Kemudian diisikan ke dalam tabung reaksi untuk agar miring. Disterilkan dalam autoklaf pada suhu 121
○
C selama 15 menit. Media yang telah disterilkan, jika tidak digunakan disimpan pada suhu 5 –
15
○
C. pH akhir = 6,8 – 7,0. d.
Eosin methyelne blue agar EMBA.
Bahan-bahan dilarutkan dalam 1000 ml air suling, dipanaskan sambil diaduk sampai mendidih. Disterilkan dengan autoklaf pada suhu 121
○
C selama 15 menit. Media yang baru disterilkan, didinginkan sampai suhu 44 – 45
○
C kemudian digunakan sesuai kebutuhan. Media yang telah disterilkan dan disimpan sampai
padat, dilelehkan diatas tangas air. Didinginkan sampai suhu 44 – 45
○
C kemudian digunakan sesuai dengan kebutuhan. Media yang baru disterilkan, jika digunakan
disimpan pada suhu 5 – 15
○
C. pH akhir : 7,1. e.
Tryptic Soy Broth TSB Bahan-bahan dilarutkan dalam 1000 ml air suling, panaskan sambil diaduk hingga
larut sempurna. Diisikan ke dalam wadah yang sesuai dan disterilkan dalam autoklaf pada suhu 121
○
C selama 15 menit. pH akhir = 7,3.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
34
f. MR-VP medium
Bahan-bahan dilarutkan dalam 1000 ml air suling. Diisikan ke dalam tabung 3mltabung dan disterilkan dalam autoklaf pada suhu 121
○
C selama 15 menit. pH akhir = 6,9.
g. Lechteen broth LB
Bahan-bahan dilarutkan dalam 1000 ml air suling, panaskan sambil diaduk hingga larut sempurna. Diisikan ke dalam wadah yang sesuai dan disterilkan dalam
autoklaf pada suhu 121
○
C selama 15 menit. pH akhir = 7,4.
4. Homogenisasi contoh
Kategori