34
f. MR-VP medium
Bahan-bahan dilarutkan dalam 1000 ml air suling. Diisikan ke dalam tabung 3mltabung dan disterilkan dalam autoklaf pada suhu 121
○
C selama 15 menit. pH akhir = 6,9.
g. Lechteen broth LB
Bahan-bahan dilarutkan dalam 1000 ml air suling, panaskan sambil diaduk hingga larut sempurna. Diisikan ke dalam wadah yang sesuai dan disterilkan dalam
autoklaf pada suhu 121
○
C selama 15 menit. pH akhir = 7,4.
4. Homogenisasi contoh
Dilakukan prosedur seperti pada MA No.94MIK00. Dengan cara aseptik dipipet 10 ml cuplikan, ke dalam wadah steril yang sesuai ditambahkan 90 ml LB
kemudian dihomogenkan sehingga diperoleh suspensi pengenceran 1:10.
5. Pengkayaan
Dengan cara aseptik dipipet 10 ml suspensi hasil homogenisasi contoh kemudian diinokulasikan pada 90 ml TSB, diinkubasi pada suhu 35-37
○
C selama 18-24 jam
6. Isolasi
Dari biakan pengkayaan diinokulasikan 1 sengkelit pada permukaan EMB dan diinkubasi pada suhu 35-37
○
C selama 24-48 jam, dengan posisi lempeng dibalik. Diamati koloni spesifik yang tumbuh dengan ciri-ciri bentuk bulat, diameter 2-3
mm, warna hijau dengan kilap logam dan bintik biru kehijuan di tengahnya.
7. Identifikasi dan konfirmasi
Dipilih dua atau lebih koloni spesifik pada EMB diinokulasikan pada NA miring, kemudian diinkubasi pada suhu 35-37
○
C selama 18-24 jam.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
35
8. Uji biokimia
Dari biakan NA miring dilanjutkan dengan uji biokimia sebagai berikut : a.
Uji Indol Dari biakan NA miring diinokulasikan pada media Trypton Broth dan diinkubasi
pada suhu 35-37
○
C selama 24-48 jam. Setelah diinkubasi, ke dalam biakan ditambahkan 1 ml pereaksi indolKovacks dikocok dan didiamkan beberapa
menit. Warna merah Cherry yang membentuk cincin pada permukaan biakan menunjukkan reaksi indol positif.
b. Uji Metil Merah
Dari biakan NA miring diinokulasikan pada media MR-VP dan diinkubasi pada suhu 35-37
○
C selama 24-48 jam. Setelah diinkubasi tambahkan 5 tetes larutan metil merah dikocok homogen dan didiamkan beberapa menit, bila biakan
menjadi merah menunjukkan hasil uji positif. c.
Uji Voges Proskauer Dari biakan NA miring diinokulasikan pada media MR-VP dan diinkubasi pada
suhu 35-37
○
C selama 24-48 jam. Setelah diinkubasi tambahkan 12 tetes larutan alfa naftol dan 4 tetes larutan KOH 40, dikocok kemudian didiamkan selama 2-
4 jam. Jika warna biakan menjadi merah muda hingga merah menyala menunjukkan reaksi positif.
d. Uji Sitrat
Dari biakan NA miring diinokulasikan pada media Simmon’s citrate agar dan diinkubasi pada suhu 35-37
○
C selama 24-48 jam. Jika terjadi perubahan warna biakan menunjukkan hasil uji positif.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
36
9. Pengecatan gram
