sel-sel yang berasal dari jaringan. Sel yang dikultur dalam bentuk ini memerlukan support untuk menempel pada permukaan tempat kultur. Dalam
perkembangbiakannya, sel akan memenuhi permukaan tempat tumbuhnya sehingga diperlukan wadah yang lebih luas dibandingkan yang dibutuhkan oleh
sel yang dibiakkan dalam bentuk suspensi Freshney, 1985.
a. Alur Sel
Alur sel cell line adalah sel yang berasal dari suatu sumber jaringan tertentu yang mengalami pengkulturan lebih lanjut, hingga menghasilkan
subkultur. Pasase atau pengkulturan kembali dilakukan dengan memindahkan sel-sel dari kultur lama ke tempat yang baru dan menumbuhkannya dengan
media baru. Pemeliharaan alur sel dilakukan dengan inkubasi pada kondisi yang sesuai dan penggantian media secara periodik. Interval waktu
penggantian media dan subkultur ini bervariasi untuk tiap sel, tergantung pada kecepatan pertumbuhan dan metabolisme Freshney, 1994.
Alur sel terbagi dua, yaitu finite cell line dan continuos cell line. Jika sel yang dikultur berasal dari jaringan normal dan sel-sel tersebut tidak
berubah selama masa pengkulturan, baik secara spontan ataupun dengan rangsangan virus maupun bahan kimia, maka alur sel tersebut mempunyai
masa hidup yang terbatas finite cell line. Sel-sel itu akan mati setelah beberapa kali pasase. Namun, jika yang dikultur adalah sel tumor atau terjadi
perubahan secara in vitro, maka yang dihasilkan adalah alur sel yang masa hidupnya tidak terbatas continuos cell line Walum et al., 1990. Sel ini juga
disebut sel immortal. Alur sel yang masa hidupnya terbatas memerlukan waktu penggandaan lebih panjang, yaitu setelah 24 - 96 jam, sedangkan alur
sel immortal hanya memerlukan waktu 12 - 24 jam saja Freshney, 1994. Terbentuknya continuos cell line ditandai dengan adanya beberapa
perubahan, yaitu perubahan dalam morfologi sel, misalnya menjadi lebih kecil, kurang melekat, lebih bulat, dan perbandingan inti dengan
sitoplasmanya lebih besar. Selain itu, sel menjadi lebih cepat tumbuh, ketergantungan pada serum berkurang, sel menjadi lebih mampu berproliferasi
dalam suspensi karena ketergantungan pelekatan berkurang, variasi kromosom dalam sel meningkat, terjadi penyimpangan pada fenotip sel donor dan
cenderung bersifat tumor Malole, 1990. Dua jenis alur sel yang digunakan dalam penelitian ini, antara lain:
¾ Alur sel K-562
K-562 termasuk tipe alur sel yang masa hidupnya tidak terbatas continuos cell line. Alur sel ini diisolasi pertama kali oleh Lozzio dan Lozzio
pada tahun 1972 dari efusi pleural wanita berusia 53 tahun yang menderita leukimia myeologeneus kronik. K- 562 atau alur erythroleukimia manusia
digunakan sebagai target yang sensitif untuk percobaan dengan Natural Killer NK ATCC, 2006. Alur sel ini dibiakkan dalam bentuk suspensi.
¾ Alur sel HeLa
Sel ini berasal dari jaringan tumor serviks seorang wanita yang bernama Henrietta Lacks yang meninggal pada tahun 1951 di usia 30 tahun. Sampel sel
tumor ini dikirimkan kepada George and Margaret Gey yang sedang mencari alur
sel manusia yang dapat bertahan di luar tubuh untuk tujuan penelitian. Sel tumor
yang mereka terima tersebut berkembang biak tidak seperti sel yang sebelumnya telah mereka lihat. Sel HeLa tersebut kemudian menjadi standar laboratorium dan
dapat ditumbuhkan di luar tubuh Anonim, 2006. Sel HeLa ini bersifat immortal dan dapat membelah hingga jumlah yang tak terbatas selama kondisi kebutuhan
sel terpenuhi. Perubahan sel normal menjadi sel kanker disebabkan oleh adanya faktor-
faktor dari luar, seperti senyawa kimia, sinar ionisasi, dan virus onkogen. Guyton 1993 menyatakan bahwa pada kebanyakan contoh yang terjadi, penyakit ini
dapat disebabkan oleh keadaan mutasi pada gen yang mengatur pertumbuhan sel- sel dan proses mitosis. Sel kanker akan membunuh sel lain karena jaringan kanker
bersaing dengan jaringan normal untuk memperoleh nutrisi sehingga jaringan normal menderita kematian nutritif.
Suatu molekul yang bersifat karsinogen dapat menimbulkan mutasi somatik yang berujung pada terbentuknya kanker. Hal ini merupakan reaksi yang
berhubungan erat dengan DNA. Beberapa karsinogen mengaitkan dirinya secara langsung kepada guanin atau mengambil gugus amino dari sitosin Spector dan
Spector, 1993.
Radiasi elektromagnetik, misalnya elektron, neutron, dan partikel alfa juga dapat menyebabkan kanker pada manusia. Cahaya ultraviolet akan menginduksi
tumor pada hewan dan akan menyebabkan mutasi pada banyak bentuk kehidupan yang berbanding langsung dengan kemampuannya menyebabkan tumor. Serangan
yang bersifat langsung pada aparat genetik dan iradiasi ultraviolet ini akan membentuk ikatan antara pasangan basa yang berdekatan di dalam sel DNA
dengan pembentukan timin abnormal sehingga akan menimbulkan transformasi malignan Spector dan Spector, 1993.
Banyak hewan dan manusia rentan terhadap kanker yang diinduksi virus. Kelompok virus penyebab kanker adalah retrovirus. Retrovirus merupakan virus
RNA yang memiliki enzim transkriptase terbalik yang memungkinkan sel membuat duplikat DNA genom virus RNA yang kemudian diinkorporasikan ke
dalam genom sel hospes Spector dan Spector, 1993. Mutasi yang disebabkan oleh zat kimia, radiasi atau peristiwa lain seperti
hilangnya atau penyusunan kembali kromosom, serta penyisipan retrovirus dapat menjurus kepada hilangnya gen dalam sel somatik. Adanya kehilangan alel dalam
garis germinal akan mempengaruhi penurunan sifat pada individu selanjutnya yang dapat menimbulkan mutasi genetik berakibat kanker Spector dan Spector,
1993. Kanker dapat dibagi menjadi tiga bagian, yaitu karsinoma, bila tumor
berasal dari jaringan epitel, sarkoma jika berasal dari jaringan fibrous atau jaringan konektif dan pembuluh darah, serta leukimia dan limfoma yang timbul
dalam sel darah Ensminger et al., 1983. b.
Proliferasi Sel Semua sel, kecuali sel syaraf, mengalami siklus pertumbuhan yang
lengkap melalui pembelahan sel untuk membentuk dua sel baru yang identik. Ketika sel distimulasi untuk tumbuh, mereka meninggalkan keadaan diamnya
resting state dan memasuki satu fase siklus sel yang disebut fase G Gambar 6.
Sel berada dalam fase ini selama lebih kurang 8 jam. Setelah itu, sel memasuki fase S. Di dalam fase ini, replikasi DNA dimulai dan terus berlangsung sampai
terbentuk dua DNA baru yang identik. Sintesis DNA memakan waktu lebih kurang 6 jam. Fase selanjutnya adalah fase G2 yang berlangsung selama 4 – 5
jam. Fase ini merupakan fase persiapan, sebelum sel membelah. Periode pembelahan disebut fase M atau fase mitotik. Di dalam fase yang berlangsung 1 –
5 jam ini, dihasilkan dua sel baru Walum et al., 1990. Menurut Giese 1979, sel-sel kanker pada umumnya tumbuh secara eksponensial, lebih cepat dari sel-sel
normal. Sel tumor dapat berada pada tiga kondisi, yaitu yang sedang membelah
siklus proliferatif, yang sedang dalam keadaan istirahat tidak membelah atau fase G0, dan yang secara permanen tidak membelah. Sel yang sedang berada
pada siklus proliferatif mengalami beberapa fase yang sama seperti sel normal. Pada akhir fase G1 pasca mitosis, terjadi peningkatan RNA disusul dengan fase
S yang merupakan saat terjadinya replikasi DNA. Setelah fase S berakhir, sel masuk dalam fase pramitosis G2. Dalam fase ini, sel berbentuk tetraploid,
mengandung DNA dua kali lebih banyak daripada sel fase lain dan masih berlangsung sintesis RNA dan protein. Pada saat sel mengalami mitosis fase M,
sintesis protein dan RNA berkurang tiba-tiba dan terjadi pembelahan menjadi dua sel. Setelah itu, sel memasuki tahap interfase untuk kembali memasuki fase G1,
saat sel berproliferasi atau memasuki fase istirahat G0. Di dalam fase tersebut, sel masih berpotensi untuk berproliferasi Gan dan Nafrialdi, 1989.
Gambar 6 . Siklus Sel
Pengujian terhadap proliferasi sel umumnya dilakukan dengan metode pewarnaan MTT ataupun dengan metode trypan blue. Metode trypan blue
merupakan metode yang sangat mudah dan sederhana. Pewarna trypan blue akan diserap oleh sel yang mati atau mengalami kerusakan membran plasma McAteer
dan Davis, 1994. Menurut Anonim 2007b, sel hidup sangat selektif terhadap senyawa yang melalui membran. Pada sel yang hidup, trypan blue tidak akan
diserap tetapi pewarna tersebut dapat memasuki membran pada sel yang mati. Sel yang mati akan memperlihatkan warna biru di bawah mikroskop akibat
penyerapan trypan blue pada sel.
III. METODOLOGI PENELITIAN
