c. Kultur sel
Sebanyak 850 µL media DMEMF12 yang telah mengandung FBS 10 dimasukkan ke dalam tiap sumur perlakuan fraksi minyak dan air dalam
lempeng yang bersumur 24 buah. Kemudian sebanyak 50 µl suspensi sel dengan densitas 2 x 10
6
selml dimasukkan ke dalam tiap sumur. Sebanyak 100 µl larutan fraksi minyak dan air buah merah, masing-masing dimasukkan
ke dalam sumur sehingga setiap sumur berisi 1000 µl. Dengan demikian, konsentrasi fraksi di dalam sumur menjadi 1, 2, dan 4 µlml, sedangkan
konsentrasi sel dalam sumur menjadi 1 x 10
5
selml. Kontrol positif antikanker yang digunakan adalah senyawa doxorubicin sebanyak 6 µl dengan
konsentrasi larutan stok sebesar 2 mgml sebagai indikator penghambatan sel kanker. Konsentrasi doxorubicin dalam sumur sebesar 0.0111 mgml atau 11.1
mgml. Kontrol negatif merupakan sumur yang hanya berisi media penumbuh dan sel. Inkubasi kultur dilakukan selama tiga hari dalam inkubator 37
C, dan CO
2
5. Rancangan pemetaan sumur dapat dilihat pada Lampiran 2. d.
Pemanenan dan Penghitungan Sel dengan Metode Trypan Blue
Setelah diinkubasi selama tiga hari, suspensi sel dalam tiap sumur diaduk dengan mikropipet hingga homogen. Kemudian sebanyak 90
μl suspensi tersebut dipipet ke dalam salah satu sumur pada lempeng bersumur
96 lubang dan ditambahkan dengan 10 μl trypan blue 0,4. Lalu campuran
suspensi sel dan trypan blue tersebut diaduk hingga homogen. Larutan suspensi sel dan trypan blue tersebut kemudian diteteskan di ujung
hemasitometer yang telah ditutup dengan gelas penutup hingga semua bagian di bawah gelas penutup dipenuhi larutan tersebut.
Penghitungan sel dilakukan dengan bantuan mikroskop cahaya menggunakan perbesaran 40X. Sel yang dihitung adalah sel berbentuk bulat
yang berada dalam 25 kotak pada bagian tengah hemasitometer. Jumlah total sel adalah jumlah seluruh sel yang hidup dan mati. Sel yang hidup tidak akan
berwarna, sedangkan sel yang mati akan berwarna biru Gambar 8. Jumlah
sel per ml, persen proliferasi dan antiproliferasi dihitung dengan rumus:
a
: dihitung berdasarkan kontrol negatif
b
: dihitung berdasarkan aktivitas kontrol positif
a
b c
Gambar 8. Profil sel kanker di bawah video photo microscope : a sebelum
diberi tryphan blue perbesaran 25x, b dan c setelah diberi tryphan blue
perbesaran 40x.
Jumlah selml = Jumlah total sel x FP X 10
4
selml Proliferasi =
100 X
negatif kontrol
sel rataan
jumlah perlakuan
mati hidup
sel rataan
jumlah +
Antiproliferasi
a
= 100 - proliferasi Antiproliferasi
b
= 100
X positif
kontrol erasi
Antiprolif merah
buah fraksi
erasi Antiprolif
a a
hidup
mati
IV. HASIL DAN PEMBAHASAN A.
PENGARUH PROSES EKSTRAKSI TERHADAP RENDEMEN EKSTRAK BUAH MERAH
Fraksi minyak dan air yang digunakan dalam penelitian dapat dilihat pada
Gambar 9. Kedua fraksi tersebut diperoleh dari satu rangkaian metode ekstraksi sentrifugal seperti yang telah tercantum dalam bab sebelumnya Gambar 7.
a b
Gambar 9. Fraksi minyak a dan fraksi air buah merah b
Metode ekstraksi sentrifugal yang digunakan untuk mengekstrak buah merah memiliki beberapa persamaan tahap dengan metode ekstraksi buah merah
yang dilakukan oleh Susanti 2006, yaitu pengukusan, pengepresan, sentrifugasi, dan penguapan. Metode ekstraksi modifikasi 2 tersebut dapat dilihat pada
Gambar 10.
Rendemen merupakan perbandingan antara jumlah bahan hasil ekstraksi dengan jumlah bahan yang diekstraksi. Rendemen merupakan suatu parameter
yang penting dalam suatu proses produksi. Menurut Budi et al. 2005, hasil rendemen fraksi minyak buah merah dari metode sentrifugal sebesar 15 dari
buah merah utuh. Rendemen fraksi air yang diperoleh dari 3 liter pasta sisa
sebesar 1.6 liter atau sekitar 53 Tabel 3. Rendemen minyak buah merah hasil
ekstraksi modifikasi 2 sebesar 18 Susanti, 2006. Perbedaan rendemen minyak yang dihasilkan dari kedua metode tersebut
dapat dikarenakan adanya perbedaan parameter proses, seperti penggunaan suhu, waktu, dan tekanan. Sirait 1981 menyatakan bahwa rendemen pengepresan
Kategori