Dengan demikian diperoleh 20 kombinasi perlakuan, yaitu: A
B A
1
B A
2
B A
3
B A
4
B A
B
1
A
1
B
1
A
2
B
1
A
3
B
1
A
4
B
1
A B
2
A
1
B
2
A
2
B
2
A
3
B
2
A
4
B
2
A B
3
A
1
B
3
A
2
B
3
A
3
B
3
A
4
B
3
Jumlah ulangan pada setiap perlakuan adalah 5 maka jumlah total percobaan seluruhnya adalah 100 satuan percobaan.
3.4 Cara Kerja
3.4.1 Sterilisasi Alat
Semua alat gelas dan alat diseksi yang akan digunakan dicuci dengan bersih dan dikeringkan. Lalu cawan petri yang telah bersih diisi dengan kertas saring. Kemudian
alat-alat tersebut dibungkus dengan kertas, sterilisasi dalam autoklaf pada suhu 121
o
C dengan tekanan 15 psi selama 60 menit. Bersamaan dengan itu akuades dalam
erlenmeyer yang telah ditutup dengan aluminium foil yang juga ikut disterilisasi.
3.4.2 Pembuatan Media
Media yang digunakan adalah media dasar MS Murashige dan Skoog, 1962 dengan penambahan atonik dan BAP dengan konsentrasi yang disesuaikan dengan perlakuan.
Tahap awal pembuatan media adalah pembuatan stok, yang terdiri dari stok hara mikro, iron, vitamin dan zat pengatur tumbuh. Sementara unsur hara makro, myo-
inositol, sukrosa dan agar dapat ditimbang langsung sesuai dengan kebutuhan tanpa harus dijadikan stok.
Larutan MS dibuat dengan cara memasukkan hara makro, myo-inositol dan sukrosa ke dalam gelas ukur 1000 ml yang terlebih dahulu telah berisi akuades.
Selanjutnya dimasukan hara mikro, iron, vitamin masing-masing 1 ml dari larutan stok dan penuhkan dengan akuades hingga 1 liter. Kemudian larutan dibagi sesuai
Universitas Sumatera Utara
perlakuan. Setiap bagian diberi zat pengatur tumbuh atonik dan BAP sesuai dengan perlakuan kemudian pH larutan diukur dengan menggunakan pH meter sebesar 5,8.
Untuk mendapatkan pH yang optimal ditambahkan NaOH 0,1 N atau HCl 0,1 N. Kedalam larutan ditambahkan agar dan dipanaskan hingga mendidih. Larutan media
dituang ke dalam botol kultur steril dan dibagi sesuai dengan banyaknya ulangan, ditutup dengan aluminium foil, diikat dengan karet gelang dan disterilisasi dalam
autoklaf bertekanan 15 psi pada suhu 121
o
C selama 20 menit. Selanjutnya media disimpan di dalam ruang kultur sebelum digunakan.
3.4.3 Sterilisasi Eksplan
Eksplan tanaman berupa pucuk daun kemenyan dicuci di bawah air yang mengalir kemudian direndam dengan detergen sebanyak 3 gl selama 60 menit. Selanjutnya
pucuk dibilas dengan akuades steril. Pucuk kemenyan kemudian dishaker dalam larutan benlate sebanyak 2 gl dan di tetesi tween 80 sebanyak dua tetes selama 3 jam.
Kemudian pucuk dibilas dengan akuades steril. Tahap selanjutnya direndam dalam larutan alkohol 70 selama 1 menit, lalu berturut-turut disterilkan dalam larutan
bayclin 10 selama 20 menit, larutan bayclin 20 selama 10 menit. Kemudian dicuci bersih dengan akuades steril. Tahap akhir dilakukan perendaman dalam larutan
Betadine 10 selama 5 menit dan dikeringkan di atas cawan petri steril yang berisi kertas saring Nurwahyuni, 2005.
Gambar 2. Eksplan Daun Kemenyan
Universitas Sumatera Utara
3.4.4 Penanaman Eksplan
